《蛋白质技术》PPT课件.ppt

蛋白质技术,1.蛋白的分离纯化技术(略)2.蛋白的检测技术(1)SDS-PAGE(2)Western blot(3)ELISA(4)蛋白芯片(5)蛋白测序(略)(6)双向电泳-新基因的获取技术(7)蛋白质磷酸化分析(8)EMSA-蛋白与核酸相互作用的研究(功能)(9)免疫共沉淀技术(CoIP)-蛋白与蛋白相互作用的研究(功能),(1)SDS-PAGE 电泳,1、原理2、用途,SDS-PAGE 电泳原理,1.SDS(带负电)和还原剂破坏蛋白的高级结构,同时SDS与蛋白定量结合,消除蛋白之间的电荷差异,使得蛋白的迁移率主要依赖分子量(分子小跑得快).2.不连续电泳:上层为浓缩胶,可将样品压缩到同一起跑线,下层为分离胶;可获得更高的分辨率.3.考马斯亮蓝进行染色.,SDS-PAGE 电泳用途,1.蛋白分子量的测定2.蛋白浓度的测定3.蛋白的鉴定(通过1来实现),(2).Western blot,Western blot,(3)ELISA,(4)蛋白芯片,(6)双向电泳,双向电泳是蛋白质组学中对蛋白质组进行研究的主要分离方法，同时能分离成百上千种蛋白质。蛋白质在第一向根据电荷的不同（等电聚焦），第二向根据分子量的不同进行分离（SDS-PAGE）。分离后对蛋白质进行染色，根据实际分析情况，分别进行考马斯亮兰染色、银染或荧光染色。扫描后用相关软件（PDQUEST等）进行图谱分析，分析差别点等。双向电泳与质谱技术联用，还可以进一步分析差别点蛋白的特性。,(7)蛋白质磷酸化分析,蛋白磷酸化是一种重要的细胞信号调控方式一般在丝氨酸,苏氨酸和酪氨酸上磷酸化.蛋白激酶-磷酸化;蛋白质磷酸酯酶-去磷酸化.A.一般通过双向电泳和质谱分析.B.也可通过磷酸化抗体Western blot检测,(8)EMSA,凝胶阻滞试验(electrophoretic mobility shift assay)体外分析DNA与蛋白质相互作用的一种特殊的凝胶电泳技术.原理:非变性电泳中,核酸蛋白结合后,泳动速度变慢.,DNA与Protein 相互作用检测,(9)免疫共沉淀技术(CoIP),蛋白-蛋白相互作用常验证酵母双杂交的结果,Protein-protein 相互作用的检测,