《细胞信号转到》PPT课件.ppt

ph causes non-autonomous overgrowth in mosaic eyes,主要技术手段：MARCM技术 TUNEL法,MARCM技术,如果想在嵌合体中敲除基因，用FLP/FRT系统,如果想在嵌合体中增加基因表达，用UAS/Gal4系统,UAS/Gal4系统,GAL4/UAS系统是一种转基因体系。原理：利用特定的启动子或增强 子，以组织特异性的方式激 活酵母转录激活子GAL4的表 达，GAL4又以同样的方式引 起GAL4反映元件（UAS）-靶 基因的转录。,GAL4,UAS,UAS/Gal4系统,FLP/FRT 系统,果蝇含有四对染色体，每对染色体中的一条被称为同源染色体，分别来自于母本和父本。在正常的细胞分裂中，一对同源染色体总是能忠诚地复制，然后分配到新分裂的细胞中,FLP是一个来自酵母的染色体重组酶FRT则是FLP催化的一段DNA序列,同源重组产生会两个子细胞中，一个含有双份正常染色体，令一个含有双份突变染色体。如果我们在正常染色体上添加标示（GFP），那么，可以在果蝇组织中观察突变细胞的表型变化,如果两条染色体中的一条是正常的，而另一条基因被突变掉，那么对于绝大部分没有重组的细胞来说，它们是“杂合体”。,FLP/FRT 系统,MARCM 技术(mosaic analysis with a repressible cell marker),同源染色体重组,非同源染色体组合,GAL80,UAS/GFP/mutation,突变细胞,TUNEL法 DNA片段化与检测,细胞凋亡中染色体DNA的断裂是个渐进的过程，染色体DNA首先在核酸内切酶作用下，随机切断；在核小体单位之间被随机切断。形成180-200bp核小体式片段；DNA双链断裂出现缺口即可产生一系列DNA的3-OH末端，被染色。,增加细胞膜通透性,TdT 酶和荧光素标记 的dUTP进入细胞,在TdT酶的辅助下dUTP与凋亡细胞中断裂DNA的3-OH末端结合,HRP标记的抗荧光 素抗体特异结合,HRP底物，H2O2发生氧化、环化反应，形成棕褐色,显微镜下观察,TUNEL法 DNA片段化与检测,TUNEL法 DNA片段化与检测,谢,谢,大,家,