《红细胞检验》PPT课件.ppt

1,第二章红细胞手工检验,-红细胞检验,主讲人：丁肖华 医学技术学院,红细胞检查,红细胞计数 血红蛋白测定 血细胞比容 红细胞平均指数计算 网织红细胞计数 嗜碱性点彩红细胞计数 红细胞沉降率测定,3,红细胞检查,红细胞的发育过程,造血干细胞 早幼红细胞中幼红细胞晚幼红细胞网织红细胞成熟红细胞,上一页,下一页,返 回,红系祖细胞原始红细胞,成熟红细胞120天,上一页,下一页,返 回,铁 铁代谢原卟啉 胆色素代谢珠蛋白 蛋白质代谢,衰老红细胞,红细胞的发育过程,6,检测方法1.手工显微镜法：2.血液分析仪法：,一、红细胞计数,手工显微镜法,7,定义：用等渗稀释液将血液稀释一定倍数后，滴入改良Neubauer计数板，在显微镜下计数一定范围内的红细胞数，经换算即可求得每升血液中的红细胞数。,8,改良牛鲍计数板,计数板,9,10,红细胞稀释液组成与作用,稀释液 组成 作用 备注,Hayem液 NaCl、Na2SO4、HgCl2 调节渗透压、增加红细 胞悬浮性和防腐作用,高球蛋白血症时，蛋白质沉淀致红细胞凝集,枸橼酸钠稀释液 NaCl、枸橼酸钠、甲醛 NaCl和枸橼酸钠调 节渗透压，枸橼酸钠 具抗凝，甲醛防腐,生理盐水 生理盐水 急诊时用1%甲醛生理盐水 甲醛、生理盐水 急诊时用,11,【操作】1.准备计数板2.加稀释液：2ml3.加血：10l混匀4.充池5.计数6.计算：红细胞数=N/5*25*10*200*106/L,12,1.分析前质量控制患者准备、标本采集、存储温度和时间2.分析中质量控制 计数误差（技术误差和固有误差）、白细胞影响 3.分析后质量控制结合临床资料,质量控制,13,1.手工显微镜法（1）血液分析仪的校正（2）白细胞减少时的对照核实。（3）血小板计数受小红细胞干扰时的校正 2血液分析仪法 方法精确，且操作简便、快速，已广泛应用。,方法学评价,14,成年：男性（45.5）1012/L 女性（3.55.0）1012/L新生儿：（6.07.0）1012/L,参考值,15,1生理性变化,(1)年龄与性别的 差异(2)精神因素(3)剧烈体力运动和劳动(4)气压降低(5)妊娠中、后期,临床意义,16,2病理性变化,(2)红细胞增多 1)原发性红细胞增多 2)继发性红细胞增多3)相对性红细胞增多,(1)红细胞和血红蛋白量减少1）红细胞生成障碍2）造血原料缺乏3）利用障碍红细胞4）破坏过多和失血,临床意义,17,医学决定水平,高于6.8l012/L，应采取相应的治疗措施。低于3.51012/L为诊断贫血的界限，应继续寻找原因。低于1.5l012L应考虑输血,指该项目结果如高于或低于某一个值时就应该采取一定的措施，为患者处理起提供依据的作用。,临床意义,血红蛋白(血色素，Hb 或 HGB)组成,二、血红蛋白测定,珠蛋白：4条，种属特异性亚铁血红素：4个，无种属特异性,19,每个 Hb 分子由 2 条类肽链和 2 条类肽链组成，每条珠蛋白肽链含有 1 个亚铁血红素。,在人体不同生长时期，Hb 种类与比例不同：,21,定义：血红蛋白测定是测定外周血液中各种血红蛋白的总浓度，用g/L表示,血红蛋白测定,22,1氰化高铁血红蛋白(HiCN)测定法 2其他测定法 十二烷基硫酸钠血红蛋白（SDS-Hb）法叠氮高铁血红蛋白(HiN3)法碱羟血红蛋白法沙利(Sahli)酸化血红蛋白法溴代十六烷基三甲胺血红蛋白测定法（CTAB）等,检测原理,23,HiCN转化液：即文齐氏液540 nm 处有一吸收波峰，用分光光度计测定换算成每升血液中的血红蛋白浓度，或制备标准曲线供查阅。,CN-,血红蛋白,高铁血红蛋白,氰化高铁血红蛋白,高铁氰化钾,540nm,血红蛋白浓度,吸光度,24,血红蛋白浓度计算公式：Hb(g/L)=A540HiCN/4464458/1000251=A367.7A540HiCN：测定管吸光度44：毫摩尔消光系数64458/1000：1mmol/L Hb溶液中所含Hb克数251为稀释倍数,25,血红蛋白,SDS-Hb,SDS,540nm,血红蛋白浓度,吸光度,十二烷基硫酸钠血红蛋白（SDS-Hb）法,26,27,分析前质量控制：同红细胞计数分析中质量控制技术误差：稀释倍数、分光光度计波长、光缝、比色杯光径需校正HiCN转化液：棕色玻璃瓶HiCN参考液：关键质控物：室内质控分析后质量控制：同红细胞计数,质量控制,28,成年：男性：120160gL；女性：llO150gL。新生儿：170200gL。老年(70岁以上)：男性：94122gL；女性87112gL。,参考值,29,轻度贫血，成年男性Hb120g/L，成年女性110g/L；中度贫血90g/L；重度贫血60g/L；极度贫血30g/L。,临床意义,31,血细胞比容(HCT)，以前称为红细胞压积，是指在一定条件下经离心沉淀压紧的红细胞在全血标本中所占体积的比值。测定目的：1.诊断贫血、真性红细胞增多症和红细胞增多 2.测定血液稀释和血液浓缩的变化 3.计算MCV和MCHC,三、血细胞比容测定,1.常量法(Wintrobe法)和微量法(microhematocrit)将抗凝血液标本置于孔径统一的温氏管或毛细玻璃管中，以一定转速离心一定时间后，计算红细胞层占全血的体积比。5层：血浆层、血小板层、白细胞和有核红细胞层、还原红细胞层和氧合红细胞层。2.血液分析仪法 由红细胞平均体积和红细胞计数两项指标后导出，Hct红细胞计数红细胞平均体积。,检测原理,34,1.操作规范化 避免操作误差，如抗凝量不准，混匀不充分，离心速度不均等。2注意干扰因素 假性增高：红细胞形态异常和红细胞增多时应注明，(细胞变形性减低和数量增多 血浆残留量增加)；高网织红细胞或高白细胞等 假性降低：体外溶血、自身凝集等。,质量保证,参考值,男性：0.420.49；女性：0.370.48,临床意义,HCT的临床意义与红细胞计数相似。HCT减低是诊断贫血的指标，HCT的高低与红细胞数量及平均体积、血浆量有关主要用于贫血、真性红细胞增多症和红细胞增多的诊断、血液稀释和血液浓缩变化的测定、计算红细胞平均体积和红细胞平均血红蛋白浓度等。,临床意义,1临床补液量的参考 各种原因导致脱水时，HCT都会增高，补液时可监测HCT，HCT恢复正常表示血容量得到纠正。2真性红细胞增多症诊断指标 当HCT大于0.7，RBC为(7-10)X1012L,Hb大于180gL，即可诊断。,临床意义,3红细胞平均指数计算的基础数据 红细胞平均值(MCV、MCHC)可用于贫血的形态学分类。4血液流变学指标 HCT增高表明红细胞数量偏高，全血黏度增加，严重者表现为高黏滞综合征，微循环障碍、组织缺氧。HCT与其他血液流变学指标联合应用，可对一些血栓前状态进行监测。,40,四、红细胞平均值,红细胞平均体积(mean corpuscular volume，MCV)，指红细胞群体中单个红细胞体积的平均值，以飞升(f1)为单位；平均红细胞血红蛋白含量(mean corpuscular he-moglobin，MCH)，指红细胞群体中单个红细胞血红蛋白含量的平均值，以皮克(pg)为单位；平均红细胞血红蛋白浓度(mean corpuscular Hemoglobin concentration，MCHC)，指测定红细胞比容时被压紧的红细胞血红蛋白浓度(gL)。,(1)MCV=每升血液中红细胞体积/每升血液中红细胞个数=Hct/RB(f1)(2)MCH=每升血液中血红蛋白含量/每升血液中红细胞个数=Hb/RBC(pg)(3)MCHC=每升血液中血红蛋白含量/每升血液中红细胞比容=Hb/Hct,41,检测原理 1手工法 同时计数红细胞，测定血红蛋白和血细胞比容，计算出红细胞3个平均指数。例：RBC为3.50X1012L，Hct为0.36，Hb为120g/L Hct 0.36MCV（fl）103（fl）RBC 3.50X1012L Hb HbMCH（pg），MCHC（gL）RBC Hct,检测原理2血液分析仪 能直接导出MCV的值，再结合仪器直接测定的RBC和Hb，计算出MCH和MCHC MCHHbRBC，MCHCHb(RBCMCV)。,44,参考值,临床意义,作为贫血的红细胞形态学分类,47,五、网织红细胞计数,网织红细胞(reticulocyte，Ret)是晚幼红细胞脱核后到完全成熟红细胞间的过渡细胞胞质中残存嗜碱性物质核糖核酸(RNA)，经煌焦油蓝等活体染色后，嗜碱性物质凝聚成蓝黑色颗粒，连缀成线，线连接成网。属于尚未完全成熟的红细胞(当嗜碱性物质消耗殆尽后才被视为成熟红细胞)，一般为89.5m。,48,49,检测原理 1.普通光学显微镜法 活体染色（新亚甲蓝或煌焦油蓝)的碱性着色基团 网织红细胞RNA的磷酸基(带负电荷)RNA胶体间的负电荷减少而发生凝缩，蓝色的点状、线状或网状结构，显微镜下计数1000个红细胞中所占的网织红细胞数，以百分比或分数数表示。,检测原理 流式细胞仪法2仪器法 网织红细胞计数仪 血液分析仪法。荧光染料与网织红细胞中RNA结合，发出特定颜色的荧光进行RNA定量精确计数网织红细胞占成熟红细胞的百分数(Ret)。将网织红细胞分成高、中、低荧光强度网织红细胞 比率(HFR、MFR、LFR)并计算网织红细胞其他参数。,血液分析仪法 提供与网织红细胞相关的多个参数，网织红细胞绝对值、网织红细胞百分比、网织红细胞平均体积、网织红细胞血红蛋白分布宽度、网织红细胞血红蛋白浓度、网织红细胞平均血红蛋白浓度、LFR、MFR、HFR、网织红细胞成熟指数。,53,【质量保证】以手工计数法为重点。1染料选择,【质量保证】2正确辨认网织红细胞 外周血中网织红细胞主要为型，凡含有2个以上网织颗粒的红细胞均应计为网织红细胞。3网织红细胞计数方法(1)Miller窥盘：(2)显微成像系统：计算机和细胞形态分析软件，HFR：粗颗粒堆积成网状。MFR：粗颗粒在10个以上，或细小颗粒超过15个。LFR：细胞内含15个以下细小颗粒,网织红细胞百分数：成人和儿童:0.0050.025 新生儿:0.020.06网织红细胞绝对数：成人和儿童:(2484)X109L,参考值,临床意义,1评价骨髓增生能力，判断贫血类型。(1)网织红细胞增多：表示骨髓造血功能旺盛，各种增生性贫血(2)网织红细胞减少：常见于再生障碍性贫血(3)鉴别贫血：,临床意义,2评价疗效(1)观察贫血疗效：贫血随访缺铁贫或巨幼贫有效治疗后，23d后Ret开始上升，710d达到最高峰(约10)，2周后渐降至正常。(2)骨髓移植后监测骨髓造血恢复：骨髓移植后第21天，如Ret大于15X109L，常表示无移植并发症；若骨髓开始恢复造血功能，首先HFR和MFR上升，其次为网织红细胞计数值上升。,临床意义,3放疗和化疗的监测 指导临床适时调整治疗方案，避免造成严重的骨髓抑制。机体接受放、化疗后，如出现骨髓抑制，早期HFR和MFR降低，而后网织红细胞数值降低；停止放、化疗，骨髓功能恢复后，这些指标依次上升。,临床意义,65,六、嗜碱性点彩红细胞计数,定义:嗜碱性点彩红细胞(basophilicstipplingcell)是不完全成熟的红细胞胞质内残存的核酸变性、聚集形成颗粒，经碱性染料(如美蓝)染色后，细胞内可见到深染的颗粒；若以瑞氏染色，则在粉红色的胞质中见到大小，形状不一紫红色或蓝黑色颗粒，故名嗜碱性点彩红细胞。,检测原理 嗜碱性点彩红细胞计数(basiphilic stippling count)，用碱性美蓝液作血涂片染色，红细胞呈淡蓝绿色，颗粒显深蓝色；用瑞氏染色，颗粒呈蓝黑色。通常在油镜下计数1 000个红细胞中的嗜碱性点彩红细胞数，换算成百分率。,方法学评价 嗜碱性点彩红细胞计数操作目前仍用显微镜血涂片染色的传统检查法。必要时可扩大红细胞计数的数量。例如，先计数50个视野中嗜碱性点彩红细胞数，同时计数5个视野内红细胞总数，再按下式求出点彩红细胞的百分比。50个视野中嗜碱性点彩红细胞数嗜碱性点彩红细胞 5个视野内红细胞总数10,质量控制 计数时必须选择红细胞分布均匀的区域计数。参考值 0.03%临床意义 嗜碱性点彩红细胞计数增高主要见于：1中毒患者 如铅、汞、银、铋等金属中毒及硝 基苯、苯胺等中毒时，点彩红细胞显著增高。2各类贫血 如溶血性贫血、巨幼细胞性贫血、恶性贫血、恶性肿瘤等，此时网织红细胞增加 常表示造血旺盛。,红细胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate，ESR)简称血沉，指在规定条件下，离体抗凝全血中的红细胞自然下沉的速率。血沉过程一般分为3期：缗钱状红细胞形成期，一般要经过数分钟至10min。快速沉降期，形成缗钱状红细胞以等速下降，约40min。细胞堆积期，又称缓慢沉积期或挤紧期，此时红细胞 堆积在试管底部。,七、红细胞沉降率测定,检测原理 1魏氏法(Westergren法)将离体抗凝血液置于特制刻度测定管内，垂直立于室温中，记录1h时红细胞层下沉的距离(上层血浆的高度)，用毫米(mm)数值报告。,检测原理2血沉仪法 血液经抗凝静置后，红细胞下降，红细胞与血浆分离，其界面随时间而下移，血沉仪用发光二极管和光电管检测此界面的透光度改变，得到血沉值并显示红细胞沉降高度H与对应时间t相关的Ht曲线。,74,方法学评价 1手工法 魏氏法：为传统方法，为国内规范方法.EDTA或枸橼酸钠抗凝血液标本充分混合后，吸入魏氏血沉管200mm刻度处，将血沉管垂直室温放置至少60min，应避免振动、风吹、阳光直射，然后读取柱中红细胞沉淀上透明血浆层约lmm处结果。ICSH方法:参考方法,用于验证其他方法的可靠性。,方法学评价2仪器法血沉仪可动态记录整个血沉过程的变化，描绘出红细胞沉降的曲线，ESR测定在30min或lmin内得到检测结果，大大缩短了临床等候报告的时间。,79,质量保证 红细胞数量、表面积、厚度、直径、血红蛋白量和血浆中各种蛋白比例。影响红细胞缗钱状形成的主要因素有：1.血浆中各种蛋白的比例，与总蛋白浓度无关。清蛋白带负电荷，球蛋白与纤维蛋白原带正电荷，红细胞因唾液酸而带负电荷，彼此排斥。促缗钱状聚集的物质：纤维蛋白原球蛋白球蛋白、胆固醇、甘油三酯等；清蛋白及卵磷脂则抑制红细胞缗钱状的形成。,影响因素,2红细胞数量和形状 红细胞数量：一般情况下，红细胞沉降率和血浆逆阻力保持一定的平衡状态，如红细胞数量减少，其总面积减少，所承受的血浆逆阻力也减少，因此血沉加快；但如红细胞数量太少，则影响红细胞缗钱状形成，血沉也减慢；反之，红细胞增多时，血沉减慢。红细胞直径和形状：直径愈大血沉愈快，球形红细胞、镰形红细胞不易聚集，因而血沉减慢。,影响因素,3血沉管与血沉架 血沉管与血沉架规格必须符合标准。血沉管置血沉架上应完全垂直，倾斜时，会加速沉降。4.血标本 避免脂肪血；抗凝剂浓度增加使血沉减慢，每周配制1次，置冰箱血与抗凝剂比例要准确。抽血应在30s内完成，不得混入消毒剂，避免形成凝块。,影响因素,5温度 1825C的室温下测定。室温过高时血沉加快，可以按温度系数校正。6其他 注射器、试管、血沉管要干燥洁净，以避免溶血。7及时测定 采血后应尽快进行测定，室温下，标本置放时间不应超过4h，置4冰箱时枸橼酸钠抗凝血可6h,EDTA抗凝血可24h。,影响因素,质量保证,参考值50岁：男性85岁：男性 30mmh，女性 42mmh。儿童 10mmh。,1血沉增快(1)生理性：女性高于男性。妇女月经期由于子宫内膜破损及出血，血沉略有增快；妊娠3个月以上可因生理性贫血及血浆纤维蛋白原增加使血沉增快；老年人，特别是70岁以上的高龄者，多因纤维蛋白原增高而血沉增快。,临床意义,(2)病理性 1)各种炎症：感染是血沉加快最常见的原因。急性细菌性炎症时，由于血中急性时相反应蛋白增多，包括1胰蛋白酶、2巨球蛋白、C反应蛋白、转铁蛋白、纤维蛋白原等。在炎症发生后23d可出现血沉增快；慢性炎症，如结核病、结缔组织炎症、风湿热等，于活动期常见血沉增快，病情好转时血沉减慢，非活动期血沉可正常。,临床意义,2)组织损伤及坏死：范围较大的组织损伤或手术创伤常致血沉增快，若无合并症，一般23周内恢复正常；心肌梗死时，于发病后34d可见血沉增快(急性时相反应蛋白)，并持续1 3周，而心绞痛时血沉多正常。,3)恶性肿瘤：血沉可作为恶性肿瘤的普查筛选的辅助指标，通常迅速增长的恶性肿瘤血沉均增快，良性肿瘤血沉多正常。恶性肿瘤手术切除后或治疗较彻底，血沉可趋于正常，复发或转移时又可增快。,4)高球蛋白血症：多种因素导致的免疫球蛋白增高可见血沉增快，如系统性红斑狼疮、多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、恶性淋巴瘤、亚急性感染性心内膜炎、肝硬化、慢性肾炎等。高粘滞性综合征时，血沉可不增快甚至减慢。,5)贫血：贫血患者血红蛋白低于90gL时，血沉可轻度增快，并随贫血加重而增快。6)高胆固醇血症：如动脉粥样硬化、糖尿病、肾病综合征、粘液性水肿、原发性家族性高胆固醇血症等，血沉常常增快。,2血沉减慢 一般临床意义较小，主要见于真红、低纤维蛋白原血症、充血性心力衰竭、红细胞形态异常(如异形红细胞、球形红细胞、镰形红细胞)。,