《活性测定》PPT课件.ppt

实验八,血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）活性测定 改良赖氏法,【实验目的】,掌握改良赖氏法测定ALT的原理、注意事项和临床意义，熟悉标准曲线的绘制。,【实验原理】,1、催化反应 ALT催化谷氨酸与丙酮酸间的氨基移换反应：,2、显色反应,草黄色,棕红色,注意：-酮戊二酸也与2，4-二硝基苯肼反应产生苯腙，但两种苯腙的吸收光谱曲线有差别，在500520nm差异最大，以等摩尔浓度计算，丙酮酸苯腙的呈色强度约为-酮戊二酸苯腙的3倍。据此特点，可计算出丙酮酸的生成量。,【操作步骤】,（一）样品准备：样品为空腹血清、血浆（肝素抗凝，0.1mg肝素可抗凝1.0ml血液；EDTA抗凝，1.8mgEDTA可抗凝1.0ml血液）。样品应在低温条件下运输保存，样品中ALT在28可稳定7天。,（二）标准曲线绘制：,混匀，置37恒温20分钟,混匀后，室温10分钟，505nm波长，以蒸馏水校正零点，读取各管的吸光度值，制作工作曲线。,（三）血清酶活性测定 取2支试管，按下表操作,混匀，置37恒温30分钟,混匀，置37恒温20分钟,混匀后，室温10分钟，505nm波长，以蒸馏水调零点，读取测定管的吸光度值。,【实验结果】,（一）绘制标准曲线图 以A为纵坐标，以相当于酶活力（KarU）为横坐标，利用标准曲线绘制的数值在坐标纸上制作标准曲线。先描散点图，然后用光滑的细线连接各点。,（二）待测血清结果读取 1、求AU值：AU=AU-AB 2、结果读取：在标准曲线上找到相应的点，读取横坐标的数值，即为待测血清ALT酶活性。,（三）卡门氏单位（KarU）定义：KarU单位为分光光度单位，lml血清在25、反应液总体积3ml、波长340 nm、光径1.0cm时，每分钟吸光度下降0.001A为1个单位。,【参考值】,025 KarU或040UL（37）,【注意事项】1酶活力大于150KarU或406UL(37)，应将样品用蒸馏水 适当稀释后测定，结果乘以稀释倍数。2反应温度和时间必须严格按照操作规程进行控制。3如遇黄疸、溶血或乳糜标本时应作样品空白。4试剂变混浊或空白吸光度值超出0.2200.290范围应弃去。5试剂在28密闭避光贮存可稳定12个月。6.加入2，4 二硝基苯肼溶液的作用：终止酶促反应。显色反应。,【临床意义】,1ALT活性在下列疾病可见增高：（1）肝胆疾病：传染性肝炎、肝癌、肝硬变活动期、中毒性肝炎、脂肪肝、胆管炎和胆囊炎等。（2）心血管疾病：心肌梗塞、心肌炎、心力衰竭时的肝脏淤血、脑出血等。（3）骨骼疾病、多发性肌炎、肌营养不良等。2一些药物和毒物可引起ALT活性升高：如氯丙嗪、异菸肼、奎宁、水扬酸制剂及酒精、铅、汞、四氯化碳或有机磷等。,【方法学评价】本法重复性、准确性、试剂稳定性较差，但操作简便，实验条件要求不高，便于基层医疗单位开展。,