《小动物采血法》PPT课件.ppt

小 动 物 采 血 法,预防兽医学系助教 杜崇涛,国家重点学科预防兽医学系,Company Logo,实验动物抓取保定方法,Company Logo,一、小鼠的抓取保定 小鼠性情较温顺，挣扎力小，比较容易抓取和保定。抓取时，用左手拇指和食指捏住小鼠尾巴中部放在铁笼上。趁着小鼠试图挣脱的瞬间，迅速用另外三个手指压住小鼠的尾巴根部握入手掌；放松拇指和食指，用另外三个手指控制小鼠，然后用食指和拇指捏住小鼠头部两边疏松的皮肤提起小鼠完成抓取保定。注意，抓小鼠尾巴应抓住尾巴中部或根部，不能仅捏住小鼠尾巴的尾端，因为这时小鼠的重量全部集中到尾端，如果小鼠挣扎，有可能弄破尾端。,Company Logo,在进行解剖、手术、心脏采血、尾静脉注射时，可将小鼠用线绳捆绑在木版上，或固定在尾静脉注射架及粗试管中。,Company Logo,二、大鼠的抓取保定抓取大鼠前最好戴上防护手套，右手轻轻抓住大鼠尾巴的中部并提起，迅速放在笼盖上或其他粗糙面上，左手顺势按、卡在大鼠躯干背部，稍加压力向头颈部滑行，以左手拇指和食指捏住大鼠两耳后部的头颈皮肤，其余三指和手掌握住大鼠背部皮肤，完成抓取保定。,Company Logo,对大鼠在进行解剖、手术、心脏采血、尾静脉注射时，可用线绳加木版、尾静脉注射架等装置进行固定,Company Logo,三、豚鼠的抓取保定豚鼠性情温顺，胆小易惊，一般不易伤人。捉拿时，实验人员可先用手轻轻扣、按住豚鼠背部，顺势抓紧其肩胛上方皮肤，拇指和食指环 其颈部，用另一只手轻轻托住其臀部，即可将豚鼠抓取保定,Company Logo,四、兔的抓取保定家兔驯服不咬人，但四肢的爪尖锐，挣扎时容易抓伤人。抓取保定方法是用右手把两耳拿在手心并抓住颈后部皮肤，提起家兔，然后用左手托住臀部。另一种方法是使用家兔保定栏,Company Logo,五、犬的抓取保定犬性情凶猛、咬人，但通人性。如果犬在动物实验前曾与实验人员有接触，受过驯养调教，抓取保定就比较容易。受过驯养的犬或比格犬的抓取保定，实验人员应弯下膝盖，一只胳膊绕着它的胸部，另一只胳膊绕着后肢的大腿，两只胳膊一起绕着将犬抱起。,Company Logo,Company Logo,六、猴的抓取保定（一）猴房内或露天大笼内捕捉采用捕猴网进行捕捉，捕猴网是用尼龙绳编织成的网袋，捕猴网连有1.5米长的木柄。捕捉时动作要迅速准确，不要损伤头部及其他要害部位。猴入网后，将圈网按在地上，紧紧压住猴头或抓住颈后部（以防回头咬人），再将猴双前肢反背于猴的身后，捉住后将猴由网中取出，在捕捉凶猛的雄猴时应戴上防护皮手套，并有23个人紧密配合。,Company Logo,（二）笼内捕捉指单笼饲养的实验猴在笼内的捕捉法，猴笼设计成笼的后壁可向前滑动捕捉时拉动杠杆，使笼的后壁向前滑动，将猴夹在笼的前后壁之间，随即将猴的双前肢从笼隙拉出笼外并紧紧握住，使猴更加固定，另一人戴上防护手套推开笼门，抓住猴头，然后小心地将双前肢反背于猴的身后，由笼中提出猴子。,Company Logo,（三）固定椅固定猴固定椅基本上是由头枷和坐椅构成，坐椅可升降，头枷可固定猴头。固定椅可根据猴体型的大小随意旋转升降杠调整椅子的高低；猴头枷上颈孔的大小可根据猴脖子的粗细作调整。固定后猴的头部与身体以枷板分开，操作者可避免被咬伤和抓伤，枷板同时又是工作台，可放少量器械。,Company Logo,材料与试剂 1抗凝剂（1）肝素：肝素是含硫酸基的粘多糖，常用其钠盐或钾盐，它能阻止凝血酶原转化为凝血酶，进而抑制纤维蛋白原形成纤维蛋白，从而阻止血液凝固。常用的肝素溶液浓度为1 000U/ml，市售肝素多为100U126Umg。（2）乙二胺四乙酸（EDTA）：是一种螯合剂。用生理盐水配制成4的溶液备用。,Company Logo,（3）阿氏液（Alsever液），配方如下：枸橼酸钠（Na3C6H5O75H2O）0.80g 枸橼酸 0.0325g 葡萄糖 2.05g 氯化钠 0.42g H2O 加至 100.00ml 混匀溶解后，114.3高压蒸汽灭菌10min备用。阿氏液中既含有枸橼酸钠抗凝剂，又含有细胞生存的营养，所以它既可做抗凝剂，又可做血细胞的保存液。,Company Logo,采血法 各种动物采血方法不一。马、牛、羊等大动物一般从颈静脉采血猪从颈静脉、前腔静脉或耳静脉采血，家禽由翼下静脉或心脏采血，兔由心脏或耳静脉采血，犬由颈静脉或四肢静脉采血，豚鼠由心脏采血，小白鼠则可断尾或剪断腋下血管或剪断眼球采血。,Company Logo,采集血液最关键的问题是抗凝，采用什么方法进行抗凝，则根据实验的要求和条件而定。最常用的方法如下：（1）肝素抗凝：采血时，使每ml血液含15U20U肝素即可。计算采集的血液量，按1 000U/ml的量加入肝素，直接放入采血容器中，采血时，边采血边轻轻摇动，使抗凝剂和血液混匀。对于采少量的血液或小动物采血，可直接用注射器抽取一定量的肝素液，再采血直接抗凝。,Company Logo,（2）EDTA抗凝：采血前，用灭菌生理盐水将EDTA配制成4溶液，然后按预采血液的量，以每ml血液加入1mg2mg的EDTA的液体量于采血容器内。采血，并不断摇动采血容器，使之混匀。（3）玻璃珠法：预先将适量的玻璃珠（根据采血量多少而定）清洗后，装入采血容器中，灭菌后备用。采血过程中，边采边摇采血瓶，以使小玻璃珠在血液中滚动，以机械地除去纤维蛋白，使血液不能凝固。本法虽较麻烦，但对淋巴细胞的活性影响最小，且可减少血小板的混杂。,Company Logo,（4）阿氏液采血：以阿氏液和采血量以11比例采集血液，边采边轻轻摇动采血瓶，使之混匀。用阿氏液采血，除了抗凝外，多用于红细胞的保存。一般在4条件下，阿氏液中保存的红细胞2周其活性和特性不变。,Company Logo,2针头:根据不同动物和采血部位，采用不同型 号的针头，用前必须灭菌或消毒。3采血容器:注射器或三角瓶等。4采血动物。,Company Logo,采血方法的选择，决定于实验的目的所需血量以及动物种类。凡用血量较少的检验如红、白细胞计数、血液涂片以及酶活性微量分析法等，可刺破组织取毛细血管的血。当需血量较多时可作静脉采血。静脉采血时，若需反复多次，应自远离心脏端开始，以免发生栓塞而影响整条静脉。例如，研究毒物对肺功能的影响、血液酸碱平衡、水盐代谢紊乱，需要比较动、动脉血氧分压、二氧化碳分压和血液pH值以及 K+、Na+、CI-离子浓度，必须采取动脉血液。,Company Logo,采血时要注意：采血场所有充足的光线；室温夏季最好保持在25-28，冬季，15-20为宜；采血用具有采用部位一般需要进行消毒；采血用的注射器和试管必须保持清洁干燥若需抗凝全血，在注射器或试管内需预先加入抗凝剂.,Company Logo,取少量血 尾静脉:大鼠、小鼠 耳静脉:兔、狗、猫、猪、山羊、绵羊 眼底静脉丛:兔、大鼠、小鼠 d舌下静脉:兔 e腹壁静脉:青蛙、蟾蜍 f冠、脚蹼皮下静脉:鸡、鸭、鹅,Company Logo,取中量血 后肢外侧皮下小隐静脉:狗、猴、猫 前肢内侧皮下头静脉:狗、猴、猫 耳中央动脉:兔 颈静脉:狗、猫、兔 心脏:豚鼠、大鼠、小鼠 断头:大鼠、小鼠 翼下静脉:鸡、鸭、鸽、鹅 颈动脉:鸡、鸭、鸽、鹅,Company Logo,取大量血 股动脉、颈动脉:狗、猴、猫、兔 心脏:狗、猴、猫、兔 颈静脉:马、牛、山羊、绵羊 摘眼球:大鼠、小鼠,Company Logo,采动物品种 最大安全采血量(ml)最小致死采血量(ml)小 鼠 0.2 0.3 大 鼠 1 2 豚 鼠 5 10 兔 10 40 狼 狗 100 500 猎 狗 50 200 猴 15 60,Company Logo,1.割(剪)尾采血 当所需血量很少时采用本法。固定动物并露出鼠尾。将尾部毛剪去后消毒，然后浸在45左右的温水中数分钟，使尾部血管充盈。再将尾擦干，用锐器(刀或剪刀)割去尾尖，让血液自由滴入盛器，采血结束，伤口消毒并压迫止血。也可在尾部作一横切口，割破尾动脉或静脉，收集血液的方法同上。每鼠一般可采血10余次以上。小鼠每次可取血0.1ml，大鼠0.30.5ml。,Company Logo,2.鼠尾刺血法 大鼠用血量不多时(仅做白细胞计数或血红蛋白检查)，可采用本法。先将鼠尾用温水擦拭，再用酒精消毒和擦拭，使鼠尾充血。用7号或8号注射针头，刺入鼠尾静脉，拔出针头时即有血滴出。如果长期反复取血，应先靠近鼠尾末端穿刺，以后再逐渐向近心端穿刺。,Company Logo,3、摘眼球采血：此法常用于鼠类大量采血。用左手固定动物，压迫眼球，尽量使眼球突出，右手用无钩弯镊子或弯止血钳迅速摘除眼球，立即将鼠倒置，头朝下，眼眶内很快流出血液。一般只适用于一次采血。大部动物采血后可以存活，可采另一侧眼球取血。,Company Logo,4.心脏采血 鼠类的心脏较小，且心率较快，心脏采血比较困难，故少用。活体采血方法与豚鼠相同。若做开胸一次死亡采血，先将动物作深麻醉，打开胸腔，暴露心脏，用针头刺入右心室，吸取血液。小鼠约0.5-0.6ml；大鼠约0.8-1.2ml。,Thank You!,