《细胞生物学实验》PPT课件.ppt

实验一、几种光学显微镜的使用,一、实验目的：,了解几种光学显微镜的结构、使用方法、工作原理等。掌握使用普通光学显微镜提高分辨率的方法。,二、实验原理,1、基本原理,一般光学显微镜主要是由目镜、物镜、聚光器以及反光镜等构成。各种光学显微镜的放大原理基本相同，各种特殊用途的显微镜只是在主要器件上进行了稍微改动而已。,2、几种光学显微镜,1、普通复式光学显微镜：其重要的性能参数是分辨率。,2、暗视野显微镜：具有特殊的聚光器。光源中心束不直入物镜，所以视野灰暗。而被检测细胞由于光的衍射及反射而较亮,3、相差显微镜：利用光的干涉原理。在物镜与聚光器上做了改动。把肉眼看不见的相位差改为可见的振幅差，使人能够看清楚。4、荧光显微镜：是在光镜水平上对细胞内特异的蛋白质、核酸、糖类、脂质以及某些离子等组分进行定性定位研究的有利工具。,普通复氏显微镜,暗视野显微镜,相差显微镜,荧光显微镜,3、如何提高显微镜分辨率,1、数片孔径：孔径愈大，显微镜能力俞强。2、分辨率：分辨率以分辨俩点之间的最小距离表示。目镜与显微镜的分辨率无关，物镜的分辨率即为显微镜的分辨率，照明光线波长越短，物镜的数值孔径越大显微镜的分辨率的越大。3、放大率：总放大率超过物镜数值孔径的1000倍时，细微结构分辨不清，为空的放大，低于500倍时由于放大率过低，肉眼难以分辨。4、焦点深度：焦深加大，总放大率提高。,三、实验器材,观察材料（草履虫，洋葱内表皮，紫鸭趾草等花粉，菠菜叶），普通光学显微镜，暗视野显微镜，相差显微镜，荧光显微镜，载玻片，盖玻片，吸管，镊子，剪刀等。,四、实验方法,1观察草履虫的外形、运动、纤毛、食物泡等。取少许棉花纤维或擦镜纸纤维，放于载玻片上，在其上滴一滴草履虫悬液，然后加盖玻片观察。2洋葱表皮细胞和菠菜叶的细胞核、叶绿体的观察在载玻片上滴一滴水，撕洋葱鳞茎内表皮或菠菜下表皮一小块放于其中，使其展开，然后加盖玻片观察。3紫鸭趾草花粉外形、表面突起的观察在载玻片上滴一滴水，取紫鸭趾草雄蕊在其中沾几下，然后盖片观察。,