《碱性磷酸酶Km值》PPT课件.ppt

碱性磷酸酶Km值的测定,底物浓度酶浓度pH温度激活剂抑制剂,研究一种因素的影响时，其余各因素均恒定。,影响 酶促反应的因素,底物浓度对反应速率影响,在其他因素不变的情况下，底物浓度对反应速率的影响呈矩形双曲线关系。,S：底物浓度V：不同S时的反应初速度Vmax：最大反应速度(maximum velocity)m：米氏常数(Michaelis constant),Km值 Km等于酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度。意义：a)Km是酶的特征性常数之一；b)Km可近似表示酶对底物的亲和力；c)同一酶对于不同底物有不同的Km值。,Km,KmS,Vmax,V,S,Km,Vmax/2,双倒数作图法,m值与max值的测定,注意事项,1 底物和酶取样准确2 保温时间准确,9:00:00,9:00:30,9:01:30,9:02:00,9:02:30,9:03:00,9:01:00,9:15:00,9:15:30,9:16:00,9:16:30,9:17:00,9:17:30,9:18:00,保证每个试管的反应时间为15分钟,实验报告,1 绘制矩形双曲线图2 绘制双倒数图，并通过双倒数图读出碱性磷酸酶对磷酸本二钠的Km值,注意事项,1 做如下表格2 可电脑作图3 若人工作图，在坐标轴上禁止出现分数(1/2,1/16)4 实验的最终目的是测得Km值，因此实验报告最终必须得出结论：Km值等于多少,