《百合的组织培养》PPT课件.ppt
百合的组织培养,种子生产与经营11001班制作人：闫重阳,百合花的简介,种类：百合科属多年生草本鳞茎植物原产地：澳洲它是著名的球根花卉主要分布在北半球的温带和寒带地区，少数种类分布在热带高海拔地区。,形态特征,多年生球根草本花卉，株高4060cm，还有高达1m以上的。茎直立，不分枝，草绿色 茎秆基部带红色或紫褐色斑点。地下具鳞茎，鳞茎由阔卵形或披针形，白色或淡黄色，直径由68cm的肉质鳞片抱合成球形，外有膜质层。多数须根生于球基部。单叶，互生，狭线形，无叶柄，直接包生于茎秆上，叶脉平行。有的品种在叶腋间生出紫色或绿色颗粒状珠芽，其珠芽可繁殖成小植株。花着生于茎秆顶端，呈总状花序，簇生或单生，花冠较大，花筒较长，呈漏斗形喇叭状，六裂无萼片，因茎秆纤细，花朵大，开放时常下垂或平伸；花色，因品种不同而色彩多样，多为黄色、白色、粉红、橙红，有的具紫色或黑色斑点，也有一朵花具多种颜色的，极美丽。花瓣有平展的，有向外翻卷的，故有“卷丹”美名。有的花味浓香，故有“麝香百合”之称。花落结长椭圆形蒴果。,生长习性,性喜湿润、光照、要求肥沃、富含腐殖质、土层深厚、排水性极为良好的砂质土壤，多数品种宜在微酸性至中性土壤中生长。百合喜凉爽潮湿环境，日光充足的地方、略荫蔽的环境对百合更为适合。忌干旱、忌酷暑，它的耐寒性稍差些。百合生长、开花温度为1624，低于5或高于30生长几乎停止，10以上植株才正常生长，超过25时生长又停滞，如果冬季夜间温度低于5持续57天，花芽分化、花蕾发育会受到严重影响，推迟开花甚至盲花、花裂。百合喜肥沃、腐殖质多深厚土壤，最忌硬粘土；排水良好的微酸性土壤为好，土壤pH值为5.56.5。,关于百合的组织培养,最早是Dobreaux等人（1950）首次用纯白百合（Liliumcandidum）的花蕾成功地诱导出小鳞茎。黄济明（19791984）对25个种或品种进行了组培试验，证明百合的珠芽、鳞片、鳞茎盘、根、茎、叶、茎尖、花梗、花柱和未成熟胚等外植体均能被促进形态发生。新美芳二（1980）对百合鳞片、花被片、花丝、花柄等也组培成功，认为开花时各花器官和茎所形成小鳞茎的能力最高。程治英等人（19912001）对30多种或品种的百合进行组培证实的结果如下：（1）用百合根、叶作为外植体，也与鳞片一样，不同部位分化丛芽的能力都是近轴端大于远轴端。（2）鳞茎鳞片分化能力（分化苗的频率和速度）都是外部大于内部。杂种品种的分化能力大于野生种，低海拔种大于高海拔种。鳞片组培得到小鳞茎的试管鳞片其分化能力大于原始培养鳞片的分化能力。,有效的组培方法,1、培养基配方 诱导培养基：MS+BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L 增殖培养基：MS+BA0.5mg/L+NAA0.5mg/L 生根培养基：1/2MS+NAA0.1mg/L,培养的前处理,2、培养程序 取材及灭菌优选生长健壮、开花性状好的种球作为外植体。在取材前，最好将准备接种的鳞茎在45的低温下处理68周，然后经洗衣粉常规清洗后，剥去鳞茎外皮及外部23层鳞片，切去少许顶部及基部，先用75%的酒精浸泡3060S，然后在0.1%升汞溶液中处理1520分钟，次氯酸钠处理1015分钟，无菌水洗34次，即可进行无菌操作切块（段）接种。,温度：20-25光照：800-1200lx每天9-14h照明培养基：,培养条件,培养条件,根的培养,以毛百合为材料，在培养基上，形成肿胀的粗根，将其切成小段MS+B2mg/L+NAA0.2mg/L的培养基上进行培养，便能分化出苗。毛百合试管苗5-6个月，能形成直径17mm左右的鳞茎，移栽后成活情况良好。,胚培养,在杂交育种工作中，为防止杂种胚和母体胚乳间不亲和，有可能造成胚败育的情况下，可采取胚培养，以克服不亲和现象，有利于育种工作的顺利进行。,培养时仍以MS培养基较好，糖浓度是种类而异常在20-40之间pH5.0较为适宜，NAA用量只宜在之间。加入适量BA有利于幼胚成活，高BA会抑制胚根的产生，并促进胚组织愈伤组织化，通常MS+BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L培养促进愈伤组织生长，然后将长大的愈伤组织转移到1/2MS不加任何激素的培养基上，约2个月后，可形成大量的不定芽，延长培养时间，就会生根，产生出完整的杂交后代。,影响百合小鳞茎形成的因素,季节（春、夏、秋、冬）鳞片不同部位的影响（上、中、下）小鳞片培养后形成小鳞茎的大小分布小鳞茎形成的重量与培养及用量的关系（成反比）,试管鳞茎休眠现象,百合30下的小鳞茎不休眠，而25下的绝大部分鳞茎休眠；低盐低糖和高氮培养基上的小鳞茎不休眠，而高糖（9%）培养基上的小鳞茎会出现休眠现象。不同的品种在36的温度下39120D可打破休眠。休眠现象还与培养小鳞茎时所用的糖浓度有关（Takayama等1982）；3%糖浓度培养下得到的小鳞茎在5下约2个月可打破休眠，而9%糖浓度下培养得到的小鳞茎要冷藏约4个月。我们在培养过程中发现，蔗糖浓度较高（40g/L）对小鳞茎的形成和长大有利。如糖浓度降到20g/L，小鳞茎很快能长成幼苗。因此，可用糖浓度控制小鳞茎的生长，使幼苗生长健壮，提高成活率。也有人在组培前用4的低温处理鳞片120D，在经组培所得到的小鳞茎不发生休眠现象。,快速繁殖的实例,把最初培养得到的小鳞茎，每两个月用20 x90mm的培养皿，加入MS+NAA0.1+蔗糖9%+活性炭0.5%的琼脂培养基，继代一次。2个月后奖得到的小鳞片切割，转移到MS+KT10的培养基上培养，给予25和2.5w/的连续光照。在经过2 个月在原小鳞片的表面再生出无数成堆的、新的小鳞片。再将这些成堆的小鳞片转移到加100mLMS液体培养基的300mL锥形瓶中，25,0.5w/连续光照的条件下，用180r/min的旋转摇床摇动培养1个月。这种条件证明最适宜小鳞片的快速增长，所得的小鳞片用于培养形成小鳞茎。,参考文献：观赏植物组织培养技术,谢谢观看,
