《活体染色实验》PPT课件.ppt

人体组织学与解剖学实验,南昌大学生命科学与食品工程学院,活体染色法显示巨噬细胞,定义：活体染色(vital staining)一般是指用无毒或毒性很小的染料,在不影响细胞的正常生命活动的前提下而使活细胞的某些结构着色的一种实验方法。最早进行活体染色的是Paul Ehrlich(1885)他把刚切下的新鲜组织浸泡在亚甲基蓝(美蓝)溶液中,再用显微镜来观察尚处在生活状态下的活细胞结构。,实验目的,1、练习并掌握动物组织活体染色方法。2、学习大鼠肠系膜铺片制作方法。3、学习大鼠皮下结缔组织铺片制作方法。4、了解大鼠肝脏石蜡切片制片方法，观察Kupffer细胞。,实验原理 要显示巨噬细胞多采用活体染色法，即将一种对动物无毒害或毒性很小的染料，用注射器注入动物体的腹膜腔或血管内，体内有吞噬能力的细胞会将注入的活体染料吞噬入细胞内。然后将动物杀死取材，经固定、浸洗、复染、脱水、透明、封固等手续制成玻片标本。活体染色一般选用的燃料有台盼蓝、中性红、锂洋红、墨汁等。,实验材料与器材,实验动物：成年大白鼠实验试剂与器材：1%台盼蓝染液，乙醚，福尔马林，酒精（梯度），harris苏木精染液、曙红染液，二甲苯，中性树胶；手术器械一套，5ml注射器，载玻片，盖玻片，卧式染缸，单面刀片。,实验步骤,1、活体注射 大白鼠麻醉、称重，按8ml每千克体重动物，注射1%的台盼蓝溶液。每天注射一次，注射45天。,注射前大鼠,注射后大鼠,2、取材 动物断头处死，取皮下结缔组织、肠系膜、肝脏或大网膜为材料。取小块结缔组织或肠系膜，置于载玻片上，用解剖针尽量将其铺平，干燥后浸入10%福尔马林中固定。3、固定 用10%福尔马林固定1224h。,4、浸洗 用70%酒精浸洗数小时，中间更换数次新液，再用蒸馏水浸洗片刻，即可进行染色。也可直接进入70%酒精中保存。5、染色 固定好的铺片进行常规HE染色（详细过程见石蜡切片制作介绍）。注意：盐酸酒精分色要适度，过量会导致巨噬细胞脱色。,