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江香薷乙酸乙酯提取物对-葡萄糖苷酶的抑制作用,班级：学生：xxx学号：指导教师：,概述,江香薷 江香薷(Mosla chinensis Maxmi.cv.jiangxiangru CV.nov.)为唇形科一年生草本植物,以干燥地上部分入药,用于暑湿感冒、恶寒发热、头痛无汗、腹痛吐泻、小便不利、水肿等症,是江西省的地道药材之一,主产于江西省新余市渝水区、分宜县等地。但目前的研究大部分集中在江香薷挥发油总成分的抗菌、抗炎、抗病毒、对神经系统的抑制作用等，而对于非挥发性成分尤其是多糖及黄酮类化合物这些具有广泛生物活性的物质的研究很少。因此，我们认为，从江香薷的非挥发性成分中分离出新的生物活性物质并深入研究其生物活性作用具有重要的研究意义。,实验材料,材料：江香薷购自江西省南昌市黄庆仁栈华氏大药房。试剂：-葡萄糖苷酶(-Glucosidase)；4-硝基苯-D-吡喃葡萄糖苷(4-N-trophenyl-D-glucopyranosodide，pNPG)及还原型谷胱甘肽均系美国Sigma公司产品；拜唐苹（阿卡波糖，每片含50mg），拜耳医药保健有限公司；PH7.4磷酸盐缓冲液（Na2HPO412H2O、NaH2PO42H2O）；无水碳酸钠（Na2CO3）；二甲亚砜(DMSO)；无水乙醇；石油醚；乙酸乙酯；正丁醇及超纯水均为国产分析纯。仪器：Uv-2550紫外分光光度计（日本岛津公司），智能恒温电热套及加热回流装置；RE-52A旋转蒸发仪；分液漏斗；圆底烧瓶；sarorius BP211D电子天平；JJ200精密电子天平；HH-4数显恒温水浴箱；各种规格移液器及枪头；KQ-300DE型数控超声波清洗器；JC101型电鼓风干燥箱；冻干机等。,实验流程,提取,浓缩,萃取,测定,冻干,将乙酸乙酯萃取液浓缩后进行冷冻干燥,分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,用10倍量80%乙醇、水各提取2小时,用旋转蒸发仪浓缩至100200ml,测定乙酸乙酯提取物对-葡萄糖苷酶抑制作用,实验方案,江香薷提取物抑制-葡萄糖苷酶的纯酶活性测定方案原理：在适宜的条件下，底物pNPG在-葡萄糖苷酶的催化作用下生成pNP和葡萄糖，可表示为:pNP-Glu-Glucosidase pNP+葡萄糖 其中pNP在410nm下有特征吸收峰，而pNPG、葡萄糖在410nm下的紫外吸收很小，对结果影响可以忽略不计。通过酶与底物反应进行实验，对-葡萄糖苷酶与底物反应的底物浓度与反应时间进行优化。江香薷提取物抑酶活性筛选方案（1）测定江香薷石油醚提取物及萃取剩余物各需五支微型离心管，分别为A管、B管、C管、D 管、E管（2）各管作用如下：,A管,B管,E管,C管,D管,江香薷提取物测定管,阳性对照管,调零管,测定提取物吸光度,未被抑制酶活性反应管,测定方法,磷酸钾缓冲液 谷胱甘肽溶液+相应提取液-葡萄糖苷酶溶液,磷酸钾缓冲液 谷胱甘肽溶液+蒸馏水-葡萄糖苷酶溶液,磷酸钾缓冲液 谷胱甘肽溶液+蒸馏水-葡萄糖苷酶溶液,磷酸钾缓冲液 谷胱甘肽溶液+阿卡波糖-葡萄糖苷酶溶液,磷酸钾缓冲液 谷胱甘肽溶液+相应提取液-葡萄糖苷酶溶液,加入PNPG反应10min,加入Na2CO3溶液终止反应,A管,B管,C管,D管,E管,加入PNPG反应10min,加入PNPG反应10min,加入Na2CO3溶液终止反应,加入Na2CO3溶液终止反应,加入Na2CO3溶液终止反应,加入蒸馏水反应10min,加入Na2CO3溶液终止反应,加入蒸馏水反应10min,结果与讨论,实验条件优化结果（1）底物浓度优化-葡萄糖苷酶与底物反应对底物浓度进行优化的结果见表1与图1。,表1,图1,（2）反应时间优化-葡萄糖苷酶与底物反应对反应时间进行优化的结果见表2与图2。,表2,图2,由以上实验确定最佳底物浓度确定为为0.200mg/mL；最佳反应时间确定为10min。,江香薷提取物抑酶活性筛选结果 根据优化结果进行实验。E管（酶+底物）pNP吸光度平均值为0.63；在平行条件下测得阳性对照阿卡波糖在浓度为5.0mg/mL时抑制率为47.51%。-葡萄糖苷酶抑制率计算公式如下:酶活性抑制率=AE-(AA-AC)/AE100%采用几个浓度梯度测定乙酸乙酯萃取组分对-葡萄糖苷酶的体外抑制活性，各萃取组分在各浓度下对-葡萄糖苷酶的体外抑制活性见表3。根据表3作图，得图3。,表3,图3,实验结果表明，江香薷乙酸乙酯提取物具有较高的抑制活性，浓度为4.0mg/mL呈现66.30%的抑制率，浓度为8.0mg/mL呈现108.41%的抑制率，强于阳性对照市售-葡萄糖苷酶抑制剂阿卡波糖（浓度5.0mg/mL抑制率为47.51%），浓度2.0mg/mL时具有较好的抑制活性，但其抑制率已经低于阳性对照市售-葡萄糖苷酶抑制剂阿卡波糖。,大学本科的学习生活即将结束。在此，我要感谢所有曾经教导过我的老师和关心过我的同学，他们在我成长过程中给予了我很大的帮助。本文能够顺利完成，要特别感谢我的指导老师xxx老师和xx副教授，感谢各位系的老师的关心和帮助。最后向所有关心和帮助过我的人表示真心的感谢。,致谢,
