《柱色谱法分离》PPT课件.ppt

1,实验十、柱色谱法分离,柱色谱的原理跟薄层色谱、纸色谱、气相色谱及高效液相色谱等一样，即是利用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解性能（即分配）的不同或其它亲和作用性能的差异，使混合物的溶液流经该种物质，进行反复的吸附或分配等作用，从而将组分分开。流动的混合物称为流动相，固定的物质称为固定相。,2,柱色谱（柱上层析）常用的有吸附柱色谱和分配柱色谱两类。吸附柱色谱常用氧化铝和硅胶作固定相。在分配柱色谱中以硅胶、硅藻土和纤维素作为支持剂，以吸收较大量的液体作固定相，而支持剂本身不起分离作用。,吸附柱色谱通常在玻璃管中填入表面积很大，经过活化的多孔性或粉状固体吸附剂。当待分离的混合物溶液流过吸附柱时，各种成分同时被吸附在柱的上端。当洗脱剂流下时，由于不同化合物吸附能力不同，往下洗脱的速度也不同，于是形成了不同层次，即溶质在柱中自上而下按对吸附剂亲和力大小分别形成若干色带，再用溶剂洗脱时,3,常用的吸附剂有氧化铝、硅胶、氧化镁、碳酸钙和活性炭等，一般要经过纯化和活性处理。颗粒大小均匀，粒小，表面积大吸附能力就高，但过小，溶剂流速太慢。氧化铝有：酸性PH为4，中性PH=7.5，碱性PH=10，3种，大多数吸附剂都能强烈吸水，使活性降低，通常用加热方法使吸附剂活化。活性等级可用勃劳克曼标准测定法，分五级。I级活性最高，V级吸附力最弱。,已经分开的溶质可以从柱上分别洗出收集；或者将柱吸干，挤出后按色带分割开，在用溶剂将各色带中的溶质萃取出来。对于柱上不显色的化合物分离时，可用紫外光照射后所呈现的荧光来检查，或在用溶剂洗脱时，分别收集洗脱液逐个加以鉴定。,4,色层的展开首先使用极性较小的溶剂，使最容易脱附的组分分离。然后加入不同比例的极性溶剂配成的洗脱剂，将极性较大的化合物自色谱柱中洗脱下来。所用溶剂必须纯粹、干燥。吸附剂用量为被分离样品量的3040倍，需要时可增至100倍。柱高与直径之比是75：1。（利用相似相溶原理）本实验采用干法装柱。,化合物的吸附性与它们的极性成正比。,5,一、实验目的,1、了解掌握柱色谱原理和方法2、进一步掌握旋转蒸发仪的使用方法。,二、试剂,5g氧化铝，自制乙酰二茂铁（溶于1.5ml正己烷），石英砂。洗脱剂：正己烷，1：1=二氯甲烷：正己烷，9：1=二氯甲烷：正己烷，9：1=二氯甲烷：甲醇。,6,三、装置图,溶剂,石英砂,氧化铝,砂芯,柱色谱装置,7,四、操作规程,收集黄色产物于一已知重量烧瓶中,8,9,五、操作要点,1、色谱柱一定要干燥，若潮湿可用吹风机吹干或用无水有机溶剂（甘油等）清洗。2、装柱要紧密均匀，无裂缝，无气泡，是分离效果好坏的关键。但装填时过分敲击，又会太紧密而流速太慢。3、加入砂子的目的是在加料时不致把吸附剂冲起，而影响分离效果。,10,4、在整个洗脱过程中，为了保持色谱柱的均一性，应使柱中洗脱剂液面始终保持不低于石英砂面。否则柱中溶剂流干时，就会使柱身干裂，影响渗滤和显色的均一性。5、最好用移液管或滴管将分离溶液转移至柱中。6、可以每次倒入10ml洗脱剂进行洗脱。,