《林木病理学》PPT课件.ppt
二.林木病原细菌,林木病原细菌的一般性状细菌形态和结构形态大多杆状,个别丝状细菌大多单生大小一般为微米，要在苯酚品红染色后在x的油镜下才能观察到,大多有鞭毛极鞭着生在菌体的一端或两端周鞭着生在菌体的四周鞭毛着生的位置是分类的依据一般要对鞭毛染色后再镜检,菌体结构,黏质层(较厚而固定的称作荚膜)-细胞壁(多糖，拟脂类和甲壳质组成)-质膜（质膜下的小粒状鞭毛穿过细胞壁和黏质层延伸到体外）-胞质（异染粒中性体气泡液泡核糖体）-核区（DNA，无核膜）无芽孢,用革兰氏染色法可反映细胞壁的差异,革兰氏阴性菌壁厚，肽聚糖为主革兰氏阳性菌壁薄，有脂多糖和脂蛋白革兰氏染色是用结晶紫草酸铵对细菌染色，经酒精脱色后再用番红复染以便观察未能脱色的为阳性（紫色），脱色的为阴性（红色）,革兰氏染色阳性大肠杆菌革兰氏染色阴性枯草杆菌,植物病原细菌对链霉素敏感，可用于防治细菌病害,培养性状，繁殖，遗传和变异,培养性状：固定培养基上菌落液体培养基上混浊，絮状物，菌膜，菌环等繁殖繁殖方式为裂殖，繁殖速度为次分钟，S形生长曲线,遗传,遗传裂殖时细胞内物质均等分配到子细胞质粒染色体DNA之外的可自我复制的环状双链DNA，常带有与抗药性，致病性，性结合有关的基因,变异,类有性作用接合：一个细胞的遗传物质可以部分进入另一个细胞，接受遗传物质的细菌在分裂繁殖时体内的两种遗传物质重新组合突变频率低但次数多转化：由于菌体破裂，一个细胞的遗传物质释放出来，进入另一个有亲和力的同种或近似种的菌体内，并作为后者遗传物质的一部分,转导：噬菌体侵染和在消解一种细菌时，其DNA可以携带寄主细胞的部分遗传物质，在侵染另一个细菌时，就可以将遗传物质带到第二个细菌体内作为它的遗传物质的一部分,噬菌体：细菌的病毒，专性寄生，一般蝌蚪状，在细菌液体培养时使培养液变清，在细菌培养平板上形成透明斑（噬菌斑）,寄生性：绝大多数非专性寄生,极少数专性寄生鉴定方法:症状观察:染色镜检鉴定法(革兰氏染色法和鞭毛染色法)培养性状鉴定法(菌落性状观察,生理生化性状观察)致病性测定:血清学鉴定法:核酸技术:,植物病原细菌的主要类群,薄壁菌门重要属:野杆菌属Agrobacterium,也叫脓杆菌杆菌属,革兰氏阴性菌，鞭毛周生，引起植物组织肿瘤或畸形假单胞杆菌属Pseudomonas革兰氏阴性菌，鞭毛数根，菌落白色，能产生荧光性色素，引起叶斑，溃疡，果斑,黄单胞杆菌属Xanthomonas革兰氏阴性菌，鞭毛根，菌落黄色，能产生非水溶性黄色色素，柑橘溃疡病,核桃黑斑病欧氏杆菌属Erwina革兰氏阴性菌，鞭毛周生，引起植物组织腐烂或萎焉,厚壁菌门棒杆菌属Gorynebacterium（Clavibacter）革兰氏阳性菌，多数无鞭毛,软壁菌门,植原体属（Phytomonas）引起的病状很象病毒病的症状，主要是黄化丛枝症状以前放在病毒病中，后来发现有些病可用四环素治疗，在电镜下可看到哑铃状类似于菌原体的生物体，改成类菌原体，近年来将其归到植原体属中，引起桑的萎缩病，造成节尖缩短，丛枝，缩叶，黄化；泡桐丛枝病：丛枝，花果变枝叶，黄化，有传染性,螺原体属（Spiroplasma）菌体的基本形态为螺旋形繁殖时可产生分支，分支也螺旋形引起柑橘僵化病（S.citri）节间变短，缩小，丛生枝或丛芽树皮增厚，植株矮化，并且全年可开花，但结果小而少，多畸形，易脱落可以人工培养，在培养基上形成“荷包蛋”状菌落,油橄榄肿瘤病Pseudomonas假单胞杆菌属,杨属柳属山楂属果树冠瘿病Agrobacterium（野杆菌属）根瘤,根部小木瘤,病原细菌,柑橘溃疡病Xanthomonas campestri pv.citri(Hasse)黄单胞杆菌属X.citri同物异名,症状,病原,细菌病害的症状 侵染循环和防治,症状,斑点溃疡萎焉,侵染循环,植物病原细菌从伤口侵入,有的从自然孔口侵入寄生性弱的细菌一般都是从伤口侵入寄生性强的细菌从伤口和自然孔口都能侵入假单胞杆菌属和黄单胞杆菌属的细菌引致叶斑病,一般是从自然孔口侵入,棒形杆菌属、欧氏杆菌属和土壤杆菌属的细菌引致萎蔫、腐烂和瘤肿,多半是从伤口侵入有多次再侵染的机会在自然条件,传播靠雨水溅洒作用,故传播距离不会很远带菌的种苗是细菌病害传染的重要来源昆虫介体也可传播细菌工具传播,侵染来源,细菌在受害苗木内越冬,成为初侵染来源种子和无性繁殖器官：带菌种苗是最重要的初侵入来源，带菌种苗调运可远距离传播病残体：植物病原细菌可以在病株残余组织中长期存活，也是重要的初侵染来源,土壤：主要存活于土壤中的作物残余组织杂草和其他作物：相同寄主范围的作物昆虫介体：玉米细菌性萎蔫病菌可以在玉米叶甲体内越冬，成为初侵染来源,防治方法,作好种苗消毒和清除植物病死残体用抗生素效果较好防止造成伤口和及时保护伤口,在防治上特别重要,寄生性种子植物,寄生性种子植物的种类主要有桑寄生科(Loranthaceae)菟丝子科(Cuscutaceae)列当科(Orobanchaceae)野菰蛇菰科（Balanophoraceae）其中菟丝子和列当是对外检疫对象,寄生性种子植物的寄生特点,寄生部位:茎寄生(地上部分的茎):桑寄生和菟丝子根寄生(地下部分的根):列当和野菰,对寄主的依赖程度,半寄生:含叶绿素,其吸盘的导管与寄主导管相连,如桑寄生全寄生:不含叶绿素,其吸盘的导管和筛管分别与寄主的导管和筛管相连,如菟丝子,列当和野菰,菟丝子害,种子萌发到缠绕寄主的过程菟丝子的茎和果实枝条被害状寄主和菟丝子茎切面,示菟丝子吸器伸入寄主皮层,槲寄生,油杉寄生害 列当危害番茄,蛇菰科Balanophoraceae 双子叶植物，19属，约120种，分布于热带和亚热带地区，中国只有 蛇菰属Balanophora 锁阳属Cynomorium 双柱蛇菰属 Rhopalocemis 3属17种，产中南部至西南 一年生或多年生、肉质草本，寄生于根上 无叶绿素和气孔，花单性，很少两性，密集成一个单性或两性的花序,野菰,野菰，又名蔗寄生一年生寄生草本植物，整个列当科都是营寄生的植物，南方最常见的是这种茎基部分枝，地上不分枝。叶退化成鳞片状，全株肉色枝顶开花，萼佛焰苞状，冠二唇形，紫红色，黄白色地下根常附于禾本科寄生植物全株药用，具清热解毒，消肿功效,油杉矮槲寄生发育循环图,越冬场所,菟丝子种子比寄主植物的种子成熟早、萌发晚种子在土内或与寄主种子一起越冬列当靠寄主根部分泌物刺激而萌发桑寄生直接在寄主上越冬,传播,小的种子靠风传播(菟丝子,列当)大的种子靠鸟类传播(桑寄生),防治方法:,检疫轮作手工拔除(砍除)喷洒除草剂,植物病原线虫,线虫的形态和结构低等动物，属线虫动物门，数量多，分布广，受线虫危害的症状与一般的病害症状相似，称为线虫病350-1000 x15-35微米，虫体细长，蠕虫形，虫体半透明,生活史寄生性,卵幼虫（龄）成虫受精卵专性寄生，去食时排出唾液，起到致病作用，刺激细胞分裂，肿瘤，枯萎症状：根结，丛根，根腐，地上部分似缺素症松材线虫是松褐天牛传播,线虫症状,雄虫,雌虫,检验及鉴定,检验方法对应施检疫物首先直接观察是否存在本质干枯、木质部蓝变和媒介昆虫或它的栖居痕迹等症状，然后进行室内检验,(1)抽样和取样,抽取有上述症状的部分检疫物，数量为每批次总件数的0.5%-5.0%，但最低不得少于5件。若无明显症状时可随机抽样在所抽取的样木(或样品)上取部分样品，或钻取少量木屑(不得少于20g)，每样3个重复标号后带回实验室检验。必要时可将整件样木(或样品)带回备检取样时注意选取靠近蛀道、蛹室的部位，所取样品不得带有树皮,(2)分离线虫,将各标号样品分别进行线虫分离分离线虫可采用贝尔曼漏斗法或浅盘法对媒介昆虫进行线虫分离时，可将其用剪刀或尖头镊子、解剖针等剪碎或撕碎后同样采用上述方法进行分离时若室温较低(不得低于7 oC)可根据室温将分离用水调至20-40 oC(不得超过40 oC)浸泡分离材料3-4h线虫游离出一定数量后即可镜检(一般需经24小时后镜检),贝尔曼(Baermann)漏斗法,将漏斗末端接一段长约10cm乳胶管在乳胶管上装一止水夹剪大小适当纱布两层铺在漏斗上将样段去皮劈成长约3-4cm细条,约取10 g(或木屑)置于漏斗上的纱布中，纱布四角向中间盖上分离材料，然后注入清水浸没注入清水后要注意使水充满漏斗和下面的乳胶管，不要产生空隙 用培养皿在漏斗末端接取线虫分离液10ml镜检,贝尔曼漏斗法线虫分离装置图,浅盘法,浅盘分离装置由两只不锈钢浅盘组成口径略小的一只底部为粗网筛，放在另一只浅盘上面将两层纱布打湿铺于筛盘上，把样品劈碎(或钻取的木屑)置于筛盘的纱布上慢馒注人清水，使水浸没样品,分离结束后,移去筛盘，把大盘内的分离液集中于小烧杯内小烧杯内的线虫分离液可通过自然沉降或离心机(1500转/min，离心2-3min)浓缩至适宜的量，以便镜检,(3)镜检,将各标号盛有线虫分离液的培养皿置于解剖镜下观察，先确认有无线虫对有线虫的样品进行活体镜检，观察它的一般形态结构选择几条成熟、特征易观察的线虫，用针或吸管移至载玻片上的水滴中使之沉底,将此载玻片在酒精灯火焰上方往返几次约5-6秒至虫体突然伸直时停止加盖玻片后在显微镜下观察根据形态特征予以初步鉴别，以确定是否需作进一步的鉴定,1.病原鉴定,线虫培养:鉴定需要相当数量的雌、雄成虫，但在检验时分离到的线虫多是处于休眠阶段的分散型3龄虫（L）;有时虽可见雌雄成虫，但数量较少从媒介昆虫分离到的线虫则只能是被称为休眠幼虫(DL)的分散型4龄虫，因此，需将上述情况的线虫进行培养，以获得大量雌雄成虫供鉴定,真菌上的单异活体培养,通常用于培养松材线虫的真菌为灰葡萄孢(Botrytis cinerea)多毛孢(Pestalotia sp.)镰刀菌(Fusarium sp.)培养松材线虫,将真菌菌种接至马铃薯琼脂培养基(PDA)平板或试管斜面上在25 oC条件下经过4-5d待菌丝铺满平板或斜面后将经过表面消毒的线虫用吸管接到菌丝上28 oC条件下培养10-15d即可繁殖出大量线虫用少量清水将线虫充分洗至小烧杯内备用,样木保温、保湿培养,将样木劈开、锯成小段，置于烧杯中加少量清水，使木段下端浸在水中，木段上端用湿纱布覆盖在26 oC培养箱中培养3-4d倒取杯底水液，亦可获得较多的雌、雄成虫,接种线虫的表面消毒,经分离后获得的线虫悬浮液用1500转/min离心2-3min浓缩至离心管底部吸去上清液，用无菌滴管将底部线虫液约2ml移至另一无菌离心管内加 入2ml双倍浓度的消毒液，轻轻振荡混匀一定时间后再离心浓缩，重复消毒1次再用无菌水换洗2次,消毒剂,松材线虫表面消毒常用的消毒剂有3%双氧水，处理10min1%升汞，处理5min0.002%放线菌酮0.1%硫酸链霉素混合液，处理5min硫酸链酶素(1000g/g)、金霉素(30g/g)和匹玛霉素(pimafucin,0.63g/g)混合液处理5min,2.临时玻片制作,杀死和固定:将盛有线虫悬浮液的小烧杯置于65oC水浴中2min杀死线虫经离心浓缩后即用三烃基乙胺福尔马林固定液(TAF)固定,
