《抗核抗体测定》PPT课件.ppt

抗核抗体的测定,（antinuclear antibody，ANA）又称抗核酸抗原抗体，是一组将自身真核细胞的各种成分脱氧核糖核蛋白（DNP）、DNA、可提取的核抗原（ENA）和RNA等作为靶抗原的自身抗体的总称，能与所有动物的细胞核发生反应，主要存在于血清中，也可存在于胸水、关节滑膜液和尿液中。在某些因素作用下改变细胞核某些成分性质，激发机体产生许多抗不同核成分的抗体；,抗核抗体在多种自身免疫病中均呈不同程度的阳性率,如系统性红斑狼疮（SLE，95%100%）、类风湿性关节炎（RA，10%20%）、混合性结缔组织病（MCTD，80%100%）、干燥综合症（SS,10%40%）、全身性硬皮病（85%90%）、狼疮性肝炎（95%100%）、原发性胆汁性肝硬化（95%100%）等，,ANA主要是IgG，也有IgM、IgA、IgD和IgE；ANA无器官特异性和种属特异性；ANA主要存在于血清中；将检出ANA作为AID存在的依据。,抗DNA抗体：抗dsDNA/抗nDNA、抗ssDNA/抗dDNA等 抗组蛋白抗体(AHA)：抗H1、抗H2A、抗H2B、抗H3、抗H4抗体等 抗非组蛋白抗体：抗nRNP/抗U1RNP、抗Scl-70、抗SSA、抗Sm、抗SSB、抗Jo-1、抗Rib抗体、AnuA、抗DNP、抗DE多肽抗体、抗DM53抗体 抗RANA抗体、抗着丝点、抗Ku抗体等 抗核仁抗体：抗PM-Scl抗体、抗Th/To抗体、抗U3-RNP、抗4-6-S-RNA抗体等,（一）ANA的类型和临床意义,ANA谱,抗天然DNA(native DNA,nDNA)抗体，又称抗双链DNA(double stranded DNA,dsDNA)抗体。,抗变性DNA(denatured DNA,dDNA)抗体，又称抗单链DNA(single stranded DNA,ssDNA)抗体。,对SLE有高特异性;SLE诊断标准之一。,缓解期降低,70%90%SLE活动期增高,药物疗效,抗dsDNA抗体,抗DNA抗体,抗组蛋白抗体（anti-histonic antibody,AHA）：由H1、H2A、H2B、H3和H4五个亚单位，各自都 有特异性抗体；,AHA,检出百分率,抗dsDNA,50,70,90,100,药物诱导性狼疮只能检出此,SLE,AHA,AHA,抗组蛋白抗体,可提取性核抗原(extractable nuclear antigen,ENA)是盐水或磷酸盐缓冲液可提取性核抗原的总称，是非组蛋白的核蛋白，属酸性核蛋白抗原，由许多小分子量的RNA和多肽组成。,抗ENA抗体,有特异诊断价值的有以下七种：抗nRNP(nuclear RNP,nRNP)抗体；抗Sm抗体；抗SSA抗体；抗SSB抗体；抗Scl-70抗体；抗Jo-1抗体；抗核糖体抗体。,抗Sm抗体：SLE标记性抗体（20%40%）抗U1-RNP抗体：MCTD 95%100%（高滴度）抗SSA抗体：SS 40%95%，其它CTD 抗SSB抗体：SS 40%90%，其它CTD 抗Scl-70抗体：PSS25%70%,标记性抗体 抗Jo-1抗体：PM/DM 25%，标记性抗体 抗rRNP（Rib）抗体：SLE特异性抗体（10%20%）,抗DNP抗体（抗核蛋白抗体）：核蛋白(DNP)抗原由DNA和蛋白质组成。DNP抗原有不溶性和可溶性两种，可分别产生相应的抗体。,检出百分率,抗DNP,20,40,60,80,SLE非活动期,SLE活动期,抗不溶性DNP抗体,抗DNP,抗DNP,100,RA滑膜液中,抗DNP,抗可溶性DNP抗体,抗DNP抗体,抗核小体抗体（anti-nucleosome antibody，AnuA)是细胞核染色质的基本单位;细胞凋亡而致核小体大量蓄积，诱导B细胞产生的AnuA是SLE 特异性的标志抗体。,抗dsDNA抗体,抗核小体抗体,抗dsDNA和抗Sm阴性的SLE阳性率为60%80%，特异性97%。,抗核小体抗体,（二）ANA的检测方法,将患者血清先进行稀释，可以做定量试验，在1:80稀释仍呈阳性时，对SLE的诊断有较大的参考价值。,形成胞核基质ANA抗人Ig FITC,1.荧光免疫法,间接法：第一步：荧光素标记抗抗体 第二步：已知Ag固定待测Ab洗涤 再加入抗Ab*洗涤镜检。,特点：1.制备一种荧光抗体，可检测多种Ag或Ab。2.既可检测Ag，又可检测Ab。3.灵敏度高，但易产生非特异性荧光,Ag,Ab（？）,抗Ab*,周边型,可见于胶原病、PBC、CAH等患者,用ELISA间接法检测抗dsDNA抗体、抗组蛋白抗体和抗核小体抗体。,2.ELISA法,3.免疫印记法,Thank you!,