实验十目的基因的诱导性表达.ppt

实验十,目的基因的诱导性表达,一、实验目的,了解学习目的基因诱导性表达过程以及表达产物的活性检测方法,二、实验原理,诱导性表达方法表达产物的检测,诱导性表达方法,IPTG诱导目的基因高效表达原理乳糖操纵子模型表达载体,表达产物的检测,产量高低活性高低不同,三、实验器材,转化的Ecoli、LB培养基、Amp、IPTG、1XPBS、离心管、指形管、移液器、超声波裂解仪等。,四、实验步骤,将新鲜菌种液（已含有目的基因）以1:100接种于LB（Amp）培养基中，37振荡培养至OD600=0.4-0.6；加IPTG至终浓度为0.5mM,30振荡培养5h;4,8000rpm离,10min离心收集细菌；,PBS充分洗涤2次后进行超声波裂解菌体，分别收集裂解上清和沉淀进行SDS-PAGE，分析蛋白表达情况并确定诱导表达的最佳条件。,