《实验实验》PPT课件.ppt

动物生理学实验课的要求,遵守学习纪律，准时上、下课。人员及分组，组长负责制.必须严肃认真地进行实验操作、观察实验结果。各组的仪器和用品，由本组使用，不得与别组调换，以免混乱。爱护公共财物，注意节约各种实验用品。实验结果存在固定的盘上，每组上课时记住带一张盘，实验结束后立即将结果拷出。切勿在电脑上设置密码，带的盘要干净，免得电脑被感染病毒。保持实验室清洁整齐，随时清除污物。实验前必须仔细预习实验指导，了解实验的目的要求、基本原理以及简要的操作步骤。实验报告,动物生理学实验基本操作技术,一、常用手术器械蛙类实验手术器械：哺乳动物手术器械：,止血钳,手术刀,手术剪和手术镊,二、手术器械的消毒方法,煮沸消毒法：水沸35min后，将器械放入消毒锅内，等第二次水沸后15min。高压蒸汽灭菌法：高压灭菌锅，蒸汽压1520lb/in2，温度121.6126.6C，30min左右。不宜于橡胶制品和锐利器械的灭菌。化学药品消毒法：常用消毒剂有：LJ-强化戊二醛、70%乙醇（不适于金属器械的消毒）、0.1%新洁尔灭、酶皂溶液、甲醛溶液等，金属器械应浸泡30min以上。（见下表）烧灼灭菌法，适用于金属器械,三、常用实验动物,青蛙和蟾蜍家兔大白鼠和小白鼠鱼类鸟类等,实验动物的抓取固定方法,蟾蜍蛙类抓取方法宜用左手将动物背部贴紧手掌固定，以中指、无名指、小指压住其左腹侧和后肢，拇指和食指分别压住左、右前肢、右手进行操作。在抓取是蟾蜍时，注意勿挤压其两则耳部突起之毒腺，以免毒液射进眼中。实验如需长时间观察，可破坏其脑脊髓（观察神经系统反应时不应破坏脑脊髓）或麻醉后用大头针固定在蛙板上。依实验需要采取俯卧位或仰卧位固定。,家兔,抓取：实验家兔多数饲养在笼内，所以抓取较为方便，一般以右手抓住兔颈部的毛皮提起，然后左手托其臀部或腹部，让其体重重量的大部分集中在左手上，这样就避免了抓取过程中的动物损伤。不能采用抓双耳或抓提腹部。,1、2、3均为不正确的抓取方法（1可损伤两肾，2可造成皮下出血，3可伤两耳），4、5为正确的抓取方法。颈后部的皮厚可以抓，并用手托兔体。,台式固定：做血压测量、呼吸等实验和手术时，则需将兔固定在兔台上（图11-7），四肢用粗棉绳活结绑住，拉直四肢，将绳绑在兔台四周的固定木块上，头以固定夹固定或用一根粗棉绳挑过兔门齿绑在兔台铁柱上。,几种常用生理盐溶液的配制,生理性溶液为代体液，用于维持离体的组织、器官及细胞的正常生命活动。它必须具备下列条件：渗透压与组织也相等；应含有组织、器官维持正常机能所必需的比例适宜的各种盐类离子；酸碱度应与血浆相同，并具有充分的缓冲能力；应含有氧气和营养物质。动物实验中常用的生理盐溶液有生理盐水、任氏（Ringer）溶液、乐氏（Locke）溶液和台氏（Tyrode）溶液四种，其成分各异，如下表所示。,各种生理盐溶液的用途：,生理盐水：即与血清等渗之NaCl溶液，在冷血动物应用0.6%-0.65%，在温血动物应用0.85%-0.9%。任氏溶液：用于青蛙及其他冷血动物。乐氏溶液：用于温血动物之心脏、子宫及其它离体脏器。用作灌注液者须于用前通入氧气泡15分钟。低钙乐氏液（含无水氯化钙0.05g）用于离体小肠及豚鼠的离体支气管灌注。台氏溶液：用于温血动物之离体小肠。,动物的麻醉,在急、慢性动物实验中，手术前均应将动物麻醉，以减轻或消除动物的痛苦，保持安静状态,从而保证实验顺利进行。由于麻醉药品的作用特点不同，动物的药物耐受性有种属或个体间差异及实验内容及要求不同，因此正确选择麻醉药品的种类、用药剂量及给药途径十分重要。理想的麻醉药品应当是对动物麻醉完善，其毒性和对生理功能干扰最小，使用方便。1常用麻醉剂的种类和用法局部麻醉剂：0.5%-1.0%盐酸普鲁卡因或2%盐酸可卡因用作皮肤或黏膜表面麻醉。全身麻醉剂：发挥性的乙醚，非挥发性的巴比妥类、氨基甲酸乙酯等，在生理学实验中，多采用全身麻醉剂。,2.麻醉前的准备工作,熟悉麻醉药品的特点 根据实验内容合理选用麻醉药。麻醉前应核对药物名称；检查药品有无变质或过期失效。狗、猫等手术前应禁食12小时，以减轻呕吐反应。需在全麻下进行手术的慢性实验动物，可适当给予麻醉辅助药。例如，皮下注射吗啡镇静止痛，注射阿托品减少呼吸道分泌物的产生等。,3.给药方法,1）全身性麻醉：吸入麻醉：乙醚注射麻醉：常用乌拉坦、戊巴比妥钠及氯醛糖等。主要给药途径有：静脉注射、腹腔注射、肌肉注射、皮下注射、皮下淋巴囊注射等2）局部麻醉：表面麻醉：药物通过点眼、喷雾或涂布作用于粘膜表面，转而透过粘膜接触粘膜下神经末梢而发挥作用。该药物除具有麻醉作用外，还有较强的穿透力，如的卡因、利多卡因；浸润麻醉：用注射的方法将药物送到神经纤维旁。此类药物只需有局部麻醉作用，不一定要求有强大的穿透力，如普鲁卡因(对氨苯甲酸酯)、可卡因、利多卡因（其效力是普鲁卡因的2倍）。用作局部麻醉的药物的浓度一般为1%2%，通常用0.5%1%.,4.麻醉效果的观察,呼吸：深慢而平稳角膜反射：明显迟钝肌张力：全身肌肉松弛皮肤夹捏反射消失。,5.兔耳缘静脉注射时的注意事项,麻醉前应正确选用麻醉药品、用药剂量及给药途径；进行静脉麻醉时，先将总用药量的三分之一快速注入，使动物迅速渡过兴奋期，余下的三分之二量则应缓慢注射，并密切观察动物麻醉状态及反应，以便准确判断麻醉深度；如麻醉较浅，动物出现挣扎或呼吸急促等，需补充麻醉药以维持适当的麻醉。一次补充药量不宜超过原总用药量的五分之一；麻醉过程中，应随时保持呼吸道通畅，并注意保温；,手术中，若遇到出血，常用的止血方法有:钳夹止血法，压迫止血法，结扎止血法，烧烙止血法兔的采（取）血方法有耳中央动脉取血，股动脉取血，耳缘静脉取血，心脏穿刺取血。,实验一 生理机能系统的使用血型测定,一、生理机能系统的使用,开机顺序：贵重仪器先关后开熟悉系统操作仪器使用,二、血型测定,实验原理：一、血型 血型：指的是红细胞膜上特异性抗原的类型。所以，所谓的血型，主要指红细胞血型。红细胞凝集：红细胞凝集反应是一种抗原抗体反应，它是免疫反应的一种形式。凝集原（agglutinogen）：红细胞膜上存在着特异的抗原凝集素（agglutinogen）：血液中与红细胞膜上的凝集原起反应的特异抗体,血型的分类:目前已知人类的RBC除ABO血型系统外,还有Rh、P等23个血型系统。ABO血型是根据红细胞表面存在的凝集原（A或B）决定的，分为A、B、AB、O四型。,1.输血型相合的血液,最好成分输血;2.输血前必须进行血型交叉配血试验,二、输血的原则,*两侧均不凝:配血相合,可以输血;*主侧凝集,配血不合,绝对不能输！*主侧不凝次侧凝集,配血基本相合，紧急时考虑少量输。,总结：输血的原则,1、准备输血时，首先必须鉴定血型2、保证供血者与受血者ABO血型相合，且必须进行交叉配血试验 配血相合：可进行输血 配血不合：不可输血 基本相合：原则同O型血输给其他血型者或AB型血接受其他型血3、紧急情况无同型血：少量、缓慢、紧密观察。,实验方法,取双凹玻片一块，用干净纱布轻拭使之洁净，在玻片两端用腊笔标明A及B，并分别各滴入A及B标准血清一滴。取血：采左手无名指血。70%酒精消毒风干用一次性针头扎手指滴血（血量：血清约为1:1用牙签迅速混匀（切勿将两种血清混到一起）观察结果。,ABO血型的鉴定,实验结果的观察,实验报告：主要写结果及其分析，实验中遇到的问题及解决方法，思考题。预习下次实验：血细胞计数,思考题,在无标准A及B血清的情况下，已知某人为A型血，能否用他的血将其他人的血型检查出来？在ABO血型中，同型血互输也要做交叉配血试验吗？为什么？,