实验四细菌及其所致病害.ppt

实验四 细菌病原及其所致病害,中国农业大学植物病理学系张力群 教授Tel：62731464；Email：2012.10.16,试验目的：,了解细菌病原及其所致病害特点；学习病原细菌分离纯化技术；学习植物病原细菌的接种方法，了解植物病原细菌的侵入方式；证明细菌的致病性（柯赫氏法则）。,细菌在植物上引起的症状,坏死：叶枯和叶斑（水渍状）腐烂：果蔬、块茎/根的软腐萎蔫：全株性，青枯 畸形：肿瘤、发根，丛枝 变色：黄化,-Xanthomonas,Pseudomonas-Erwinia,Pantoea-Ralstonia,Clavibacter,Pantoea-Agrobacterium,Phytoplasma,Spiroplasma-Phytoplasma,Spiroplasma,Pseudomonas sp.引起菜豆豆叶斑,坏死 necrosis,Pseudomonas sp.在番茄上造成的叶斑和果斑,Erwinia sp.引起苹果火疫病,Xanthomonas sp.引起青椒叶斑,腐烂 rot,Erwinia spp.引起多种作物软腐,萎蔫 wilt,Ralstonia spp.引起多种作物萎蔫病,维管束变色,畸形 malformation,Phytoplasma sp.引起枣疯病（丛枝）,Agrobacterium sp.引起根癌,Phytoplasma sp.引起番茄黄化,Phytoplasma sp.引起椰树死黄病,变色 discoloration,Liberibacter sp.引起柑桔黄龙病,Pseudomonas sp.引起大豆细菌性疫病,菌溢（bacterial ooze）：发病（萎蔫）植物组织放入盛有水的试管或平皿中排出云雾状扩散物；高湿条件下，发病植物组织泌出的脓状物。,细菌性病害的鉴定性病征：,室内镜检喷菌（菌溢）现象细菌病害特有,分离培养选择性培养基,致病性检测过敏性坏死反应具有病原性的细菌接种到植物组织（烟草）后，接种位点附近组织迅速坏死。Kochs法则,实验内容,大白菜 软腐病菌的分离：系列稀释法；大白菜 软腐病菌的接种：伤口接种；,实验材料和用具,植物病原细菌：胡萝卜软腐欧文氏菌（Erwinia carotovora）植物材料：大白菜；牛肉膏蛋白胨培养基；70%乙醇溶液；灭菌水、移液器、震荡器、接种针、镊子、剪刀、玻棒、涂布器、灭菌塑料离心管、试管架、保湿盒、记号笔、吸水纸、酒精灯、打火机等,细菌分离纯化的方法：平板划线法；系列稀释法；,大白菜软腐病菌的分离,选取新鲜发病的大白菜叶片，健康叶片；对待分离部位进行表面消毒（70乙醇）；用灭菌刀片切取0.50.5 cm病健交界处植物组织，置于灭菌离心管中；加入0.5mL灭菌水，用玻璃棒充分碾碎，震荡；系列稀释4次；取第2，3，4次稀释液各50 L，均匀涂板；菌液被培养基吸收后，反转放置，28培养。,胡罗卜软腐欧文氏菌的接种,挑取培养好细菌置于灭菌试管中，加入少量灭菌生理盐水；将试管置于震荡器上震荡使细菌充分悬浮；利用浊度计或分光光度计确定细菌悬液浓度（106-108 cells/mL）；用无菌的接种针在大白菜叶片中部刺伤（扎孔3-5个）；用移液器滴加细菌悬液5-10微升；大白菜接种在刺伤处；等量灭菌水接种作为对照。接种后植物材料置于消毒容器中，25-28 C下保湿培养24-48 h观察并记录结果。,作业：,撰写实验报告详细记录病原细菌分离和接种方法；纯化所得单菌落数量、种类和菌落特征；计算所分离植物材料中的活菌数（CFU）；CFU：colony forming unit记录接种试验各处理的白菜叶片上的病斑大小；试验中出现问题的分析。,两天后观察记录试验的结果，下周实验课上交实验报告。,The End,