实验四X染色质标本制备与观察.ppt

实验四 X染色质标本制备与观察,目的要求（1）掌握X染色质标本制备方法及其原理。（2）掌握X染色质的形态特征及其临床意义。,实验原理,一个个体不论其细胞中有几条X染色体，均只有一条具有转录活性，其余的X染色体均失活形成异固缩的X染色质。正常女性间期细胞核中X染色质阳性率一般约为10一30，有的可高达50以上。其出现率的高低与个体不同生理状态、染色方法、染色技术以及X染色体在细胞核中的位置不同有关。在男性间期细胞核中则平均低于1。一般检查X染色质确定性别时，观察200个细胞，X染色质出现5以上者为女性。现在，X染色质检查已广泛应用于临床，作为性别测定和性染色体数目异常的一种辅助诊断方法。,实验用品,(1)器材：显微镜、载玻片、牙签。(2)试剂：Giemsa染液、0.2甲苯胺蓝染液、5mol/L HCl溶液、95乙醇、pH 6.8 PBS(3)材料：人口腔黏膜上皮细胞。,方法与步骤,（一）Giemsa染色法(1)取材制片：先让受检者用水漱口数次，然后用牙签钝头部刮取口腔下唇内侧面，弃去第一次刮到的细胞，在同一部位连刮几次，将刮取物均匀涂在干净的载玻片上晾干。(2)固定：将带有标本的载玻片置入装有新配置的甲醇-冰醋酸固定液（3：1）的染色缸中固定10min后取出，空气干燥。(3)水解：玻片标本置于5mol/L HCl中，室温水解20 min。用新鲜蒸馏水冲洗四次，充分洗去残留的HCl。(4)染色：置Giemsa染液中染色10min，蒸馏水冲洗后晾干，酒精灯上过火脱水，以二甲苯透明，树胶封片。,（二）甲苯胺蓝染色法,(1)取材制片：先让受检者用水漱口数次，然后用牙签钝头部刮取口腔下唇内侧面，弃去第一次刮到的细胞，在同一部位连刮几次，将刮取物均匀涂在干净的载玻片上晾干。(2)固定：用95%乙醇固定30分钟。(3)水解：玻片标本置于5mol/L HCl中，室温水解20 min。用新鲜蒸馏水冲洗四次，充分洗去残留的HCl。(4)染色：0.2甲苯胺蓝染液染色510min。(5)镜检：自来水漂洗，空气干燥后油镜下观察。,观察与结果,高倍镜下可见许多染成蓝色的细胞核，细胞质不着色或不明显。选择核较大，染色清晰，轮廓完整，核质呈均匀细网状的细胞进行观察。找到核膜内侧缘有蓝色浓染小体的细胞核后，换油镜进一步观察。油镜下X染色质为蓝色平凸形、三角形、扁平形的浓染小体。,注意事项,(1)取材前要漱口，以免口腔中的杂质影响观察效果。(2)HCl水解要充分，使X染色质易于显现。(3)临床检查时要选择形态好的细胞观察，计算100个细胞中X染色质出现的频率。,作业,书写实验报告，绘制X染色质图。,思考题,1间期核内出现X染色质有何生理意义?2X染色质检测有何临床用途?,