《原核细胞DNA复制》PPT课件.ppt
真核细胞DNA复制及其应用,真核细胞DNA复制与原核细胞的异同,真核细胞复制过程与原核细胞基本相同但有以下不同1.真核细胞DNA有多个复制原点2.真核细胞中的DNA聚合酶和是主要复制酶3.真核细胞染色体为线性，末端具端粒结构4.真核细胞的染色体复制涉及核小体结构。,真核细胞中的DNA聚合酶,线性DNA末端复制过程,3端的延伸3端回折成环,3端的延伸：,嗜热四膜虫端粒G 链上带有一个13 个碱基的悬突。(1)端粒酶识别端粒底物末端的TTGGGG 重复序列,并与端粒酶RNA上的5-CAACCCCAA-3 模板序列配对;(2)合成TTG 序列;(3)端粒酶移位使末端的TTGGGGTTG 重新与模板序列配对;(4)继续延伸端粒,复制模板序列完TTGGGGTTG 序列的合成。,四膜虫染色体DNA复制时,5端引物切除后,由于端粒DNA 有一段约50 个拷贝的5-TTGGGG-3寡核苷酸链,它突出的3端可回折成环，其3-OH 就像引物的3端能引起互补5-CCCCAA-3寡核苷酸的合成而使5端空缺填补,并由连结酶将缺口连上,当内切酶将拐弯处一些未成对的核苷酸切除后,便可形成两个完整的DNA 分子.,3端回折成环：,3端再回折后，两个DNA 分子间可形成正方形平面排列的G-四联体,中间配位结合一个一价金属离子。端粒DNA序列富含G。每个四联体含4个鸟嘌呤彼此通过氢键形成平面结构。每个鸟嘌呤来自连续的TTAGGG重复单位中的相应位点。一系列四联体可按这种方式堆叠成螺旋状。,G-四联体结构：,成环后3端的3-OH 就像引物的3端能引起互补5-CCCCAA-3寡核苷酸的合成而使5端空缺填补,并由连结酶将缺口连上,当内切酶将拐弯处一些未成对的核苷酸切除后,便可形成两个完整的DNA 分子.,端粒能保护染色体末端，维持染色体末端的稳定性。端粒酶合成端粒DNA，催化端粒延伸,保证染色体复制完整。,抗恶性肿瘤药物 烷化剂,烷化剂（alkylating agents）又称烃化剂，是一类化学性质很活泼的化合物。它们具有活泼的烷化基团，能与细胞中DNA或蛋白质中的氨基、颈基、羟基和磷酸基等起作用，常可形成交叉联结或引起脱嘌呤作用，使DNA链断裂，在下一次复制时，又可使核碱酸对错码，造成DNA结构和功能的损害，重者可致细胞死亡。,环磷酰胺,环磷酰胺（cyclophosphamide,endoxan,cytoxan,CTX）为氮芥与磷酰胺基结合而成的化合物。,【药理作用】环磷酰胺在体外无活性，在体内经肝细胞色素P-450氧化、裂环生成中间产物醛磷酰胺（aldophosphamide）,它在肿瘤细胞内，分解出有强效的磷酰胺氮芥（phosphamide mustard）,才与DNA发生烷化，形成交叉联结，抑制肿瘤细胞的生长繁殖。环磷酰胺抗瘤谱较广，对恶性淋巴瘤疗效显著。对多发性骨髓瘤、急性淋巴细胞白血病、卵巢癌、乳腺癌等也有效。,【体内过程】口服吸收良好，1小时后血中药物达峰浓度，17%31%的药物以原形由粪排出。30%以活性型由尿排出，对肾和膀胱有刺激性。静脉注射68mg/kg后，血浆t1/2约为6.5小时。在肝及肝癌组织中分布较多。【不良反应】环磷酰胺可口服或注射；呕吐、恶心反应较轻，静脉注射大剂量时仍多见；脱发发生率较其他烷化剂为高约30%60%，多发生于服药34周后；抑制骨髓，对粒细胞的影响更明显；对膀胱粘膜刺激可致血尿、蛋白尿；偶可影响肝功能，导致黄疸；还致凝血酶原减少；久用可致闭经或精子减少。,参考文献：,White L K,Wright W E,Shay J W.Telomerase inhibitors J.Trend Biotech,2001,19(3):114 120.Van Steensel B,Smogorzewska A,De lang T.TRF2 protects human telomeres from endtoend fusions J.Cell,1998,92(3):401 413.Nakamura T M,Cech T R.Reversing time:origin of telomerase J.Cell,1998,93(5):587 590.Shore D.Telomeric chromatin:replicating and wrapping up chromosome end J.Curr Opinion Genet Der,2001,11(2):189 198.Yu GL,Bradley JD,Attard i LD,et a.l Invivo alteration of te-lomere sequences and senescence caused by muta ted Tetra-hymena te lom erase RNAs.Nature,1990,344%126 132.Griffith JD,Com eau L,Rosen field S,et a.l Mammalian telo-meres end in a large duplex loop.Cell 1999,97%503 514.Walne AJ,Dokal L.Advances in the understanding of dy skeratosis congenita.Br J H aem ato,l 2009,145%164-172.Ca lado RT,Young NS.Te lom ere m a intenance and hum anbone m arrow fa ilure.B lood,2008,111%4446 4455.A rm an iosMY,Chen JJ,Cogan JD,et a.l Te lome rase muta-tions in fam ilies w ith idiopath ic pulm ona ry fibrosis.N Eng l JM ed,2007,356%1317 1326.,
