《动物矿物药》PPT课件.ppt

第六章 动物药、矿物药的分析,第一节 含动物药中药制剂的分析,二、动物药化学成分 1、蛋白质及其水解产物 2、生物碱类3、甾类化合物4、酮类、酸类成分5、萜类、前列腺素、无机化合物、卤素,牛黄及其制剂的分析,一、来源 牛黄为牛科动物黄牛或水牛的胆囊、胆管或肝管中的结石，称为天然牛黄。具有清心、开窍、镇惊、熄风、解毒等功效。临床上用于热病的神昏谵语、烦躁不安、中风窍闭等，著名中成药有牛黄安宫丸、牛黄解毒丸、牛黄清心丸等。,组成 牛黄主要含有胆汁酸，胆汁酸主要为胆酸、去氧胆酸及其盐类，并含有胆色素及其钙盐、脂类、蛋白质、肽、氨基酸及无机元素等。,人工牛黄是按照天然牛黄的主要成分胆红素、胆酸、胆固醇、无机盐等，人工配制的一种牛黄代用品，其制作工艺简单，价格还不到天然牛黄的0.5，在一定程度上满足了普通百姓的用药需求。目前，人工牛黄占据了98的市场份额，成为天然牛黄的主要替代品。但是，人工牛黄与天然牛黄相比，无论在成分、结构还是药效上都存在着一定差距。,天然牛黄、人工牛黄成分对比,天然牛黄：人工牛黄：胆红素 胆红素去氧胆酸 猪去氧胆酸胆酸 胆酸去氧胆酸 胆固醇结合型胆甾酸盐 磷酸三钙牛黄酸 硫酸镁胆固醇 硫酸亚铁粘蛋白 淀粉氨基酸肽类、脂肪酸卵磷脂钙盐、无机盐,人工牛黄的质量标准人工牛黄为胆酸、胆红素、胆固醇与无机盐等配合而成，要求胆酸的含量限度应为标示量的90%以上，总胆酸含量应不得少于25%，胆红素含量应为标示量的90%以上，人工牛黄应为黄色疏松的粉末、味苦、微甘。,胆汁酸的化学反应,胆汁酸的主要成分是胆酸(cholic acid,CA)和去氧胆酸(deoxycholic acid,DCA)，较易溶于丙酮与乙醇中，其钠盐易溶于水。,1、Pettenkofer反应原理：蔗糖经浓硫酸作用生成羟甲基糠醛，可与胆汁酸结合生成紫色物质。,2、Gregory Pascoe反应取胆汁1ml加入0.3%糠醛溶液1ml，加45%硫酸6ml，振摇后在65度水浴中放置30分钟，胆酸存在的溶液显蓝色,Hammarsten 反应,20%铬酸溶液溶解少量样品，温热，胆酸显紫色，鹅去氧胆酸不显色。可区别胆酸同系物如胆酸、阿朴胆酸呈阳性反应，去氧胆酸和鹅去氧胆酸呈阴性反应。,胆红素的化学反应,胆红素不溶于水，溶于苯、氯仿、氯苯、二硫化碳及碱液中，微溶于乙醇、乙醚。钠盐易溶于水。,1、Gmelin反应加浓硝酸产生绿、蓝、紫等色环，机制是胆色素被氧化成三烯胆素（蓝绿色）,2、Van den bergh反应与重氮化的对氨基苯磺酸偶合成偶氮染料，此染料在强酸中呈蓝紫色，时呈红色，pH5.5以上呈绿色。,定性鉴别,理化鉴别1、胆红素反应加硫酸与过氧化氢各2滴，显绿色2、胆酸反应Gregory Pascoe反应3、取牛黄少许，水合氯醛装片，不加热，置显微镜下观察，由黄棕色或棕红色小颗粒组成不规则团块，加水合氯醛色素迅速溶解，显金黄色，久置变绿色。,薄层色谱法,吸附剂：常用硅胶,分离游离胆汁酸的展开剂,异辛烷：异戊醚：冰乙酸：正丁醇：水（10：5：5：3：1）异辛烷：乙酸乙酯：乙酸（5：5：1）甲苯：冰醋酸：水（10：10：1）氯仿：甲酸：水（65：25：4）异戊醇：冰醋酸：水（18：5：3）正丁醇：冰醋酸：水（17：2：1）异辛烷：异丙醇：醋酸（40：10：1）,分离结合胆汁酸的展开剂,氯仿：异丙醇：醋酸：水（30：30：4：1）正丁醇：醋酸：水（20：4：3）醋酸乙酯：甲醇：醋酸：水（35：12：2：2）正丁醇：水（20：3）醋酸乙酯：甲醇：水（35：12：2）正丁醇：吡啶：水（20：4：3）甲苯：冰醋酸：水（10：10：0.8）,显色剂,30%硫酸试剂、硫酸乙醇紫外灯下观察10%磷钼酸乙醇试剂、苯甲酸试剂、茴香醛试剂、三氯化铁试剂、三氯化锑试剂、重铬酸钾饱和的80%硫酸试剂等。,含量测定1、胆酸的含量测定 化学法、比色法、TLC、HPLC,2、胆红素的含量测定分光光度法：重氮化试剂显色HPLC,麝香及其制剂的分析,麝香是鹿科动物林麝、马麝、原麝中成熟雄体香囊中的干燥分泌物。具有抗炎、强心、雄性激素样作用，是多种中成药的组成成分之一，如牛黄安宫丸、六神丸、苏合香丸、再造丸等。,（一）化学成分及性质,1、大环化合物 麝香酮（含量2%以上，是天然麝香的主要有效成分之一，也是麝香的香味成分，有特异强烈的香气，对冠心病有如同硝酸甘油一样的作用）、降麝香酮、麝香醇、麝香吡啶和羟基麝香吡啶A、B 等。,2、甾族化合物 含十多种雄甾烷衍生物，如雄性酮、表雄酮等，麝香的雄性激素样作用是与麝香所含的雄甾烷衍生物有关。,3、胆固醇、酯和蜡,4、蛋白质、肽、氨基酸 MP（musk peptide fraction）是麝香中含有的一种分子量为1000的多肽，有很强的抗炎活性，至少是氢化可的松的40倍，另有一种分子量约为5000-6000的多肽，抗炎活性为氢化可的松的20倍。5、无机盐6、其他成分尿囊素（消肿有效成分）、胆酸和胆红素样物质、尿素、纤维素等,（二）定性鉴别,1、化学法取麝香细粉，加五氯化锑共研，香气消失，再加少许氨水共研，香气恢复。,2、气相色谱法3、紫外光谱法乙醇提取液：220nm附近有最大吸收、270nm附近有肩峰乙醚提取液：231nm附近有最大吸收、265nm附近有肩峰正已烷提取液：220nm附近有最大吸收、265nm附近有肩峰,4、薄层色谱法取麝香2g，加入硅藻土5g，研磨均匀，置索氏提取器中，用200ml无水乙醚提取。吸附剂：硅胶常用展开剂：甲苯-丙酮-乙醇（8：1：0.1）二氯甲烷-乙醚，苯：乙醚，二氯甲烷-丙酮等显色剂：30%硫酸乙醇、紫外灯下检视。,（三）含量测定,1、气相色谱法2、薄层扫描法3、高效液相色谱法,熊胆及其制剂的分析,熊胆：是指棕熊或黑熊的干燥胆汁。具有清热、解痉、平肝、明目的功效。,（一）熊胆的化学成分及性质主要为胆汁酸，胆汁酸的成分为牛磺熊去氧胆酸，经碱水解后得熊去氧胆酸，并含有鹅去氧胆酸、胆酸及去氧胆酸等，这些胆酸通常与牛磺酸、甘氨酸结合并形成钠或钙盐而存在。熊胆的解痉作用主要有效成分就是熊去氧胆酸，它也是熊胆特有的成分牛磺熊去氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸是差向异构体同时存在。,（二）熊胆的定性鉴别,化学法：取胆仁粉未在紫外灯下应显黄白色荧光，而不是显棕黄色荧光；另取粉末约0.2g溶于7%冰醋酸溶液20ml中，溶液不应显浅蓝色乳浊荧光（与牛、羊胆区别）,TLC,吸附剂：硅胶展开剂：游离胆酸分离：异辛烷-醋酸乙酯-醋酸（5：5：1）、异辛烷-异戊醚-冰醋酸-正丁醇-水（15：5：5：3：1）分离结合胆酸：甲苯-冰醋酸-水（10：10：1）、氯仿-甲醇-水（65：25：4）显色剂：30%硫酸乙醇、碘蒸气,（三）熊胆定量分析,比色法：取胆或胆浓缩液于旋转蒸发器中干燥，再真空干燥，残渣溶于水，取水溶液0.1ml(约含0.2mg胆酸）加lml0.9%糠醛溶液及6ml6N硫酸溶液。混合液于70度加热8min，在冰水中冷却，于610nm测量吸收度，于标准品（胆酸，符合比尔定律）比较计算胆中胆酸的含量。,薄层扫描法HPLC：常用反相高效液相色谱法流动相：常用甲醇-酸水或乙腈-酸水检测：紫外未端检测GC：衍生化法,蟾酥及其制剂的分析,蟾酥为蟾蜍科动物中华大蟾酥或黑眶蟾酥的耳下腺及皮肤腺的干燥分泌物，具强心、升压、抗肿瘤、麻醉、抗炎镇痛等作用，是中成药六神丸、救心丸、牛黄消炎丸的组成之一。,（一）化学成分及性质,主要含蟾酥甾二烯，具24个碳原子。蟾酥甾二烯类又分为游离型和结合型，其游离型称蟾毒配基，其结合型多为脂溶性的蟾酥毒素类，蟾酥配基类和精氨酸等结合的酯类。,（二）定性鉴别,P2081、显色反应 对二甲氨基苯甲醛、硫酸醋酐、硫酸酒石酸、对二甲氨基苯甲醛（蟾酥碱、蟾酥甲碱中吲哚基反应）,2、纸色谱法 常用甲酰胺为固定相、苯-氯仿为展开剂、三氯化锑显色,TLC法展开剂：环己烷-氯仿-丙酮（4：3：3）环己烷-丙酮（7：3）正己烷-乙酸乙酯（1：9）乙醚-乙酸乙酯（6：4）显色剂：硫酸乙醇溶液,4、紫外光谱法5、红外光谱法,（三）定量分析,方法主要有分光光度法、比色法、薄层扫描法、气相色谱法、高效液相色谱法,第二节 含矿物药中药制剂的分析,（二）矿物药的分析方法,取样试样分解定性定量,其中试样的分解是将待测组分转入溶液中的重要步骤，要求试样要分解完全，分解过程中待测组分不应损失，分解过程中不能引入被测组分或干扰组分。,常用的分解方法有溶解法（湿法）、熔融法（干法）：溶解法：水、稀酸、浓酸、混合酸熔融法：熔剂 碱性熔剂（碳酸钠、氢氧化钠）酸性熔剂（硫酸氢钾、焦硫酸钾）氧化性熔剂（过氧化钠）还原性熔剂（碳酸钠加硫）,A、容量法 配位滴定法：EDTA（乙二胺四乙酸）法应用最广，多用于测定含钙、铝等的矿物药，方法用标准溶液乙二胺四醋酸二钠液直接滴定，也有加过量乙二胺四醋酸二钠溶液用锌液回滴。酸碱滴定法：适用于含碳酸盐类矿物药。氧化还原滴定法：适用于含汞、砷、铁类矿物药。,1、化学分析法,B、重量法,重量法实验要求,（1）被测组分要沉淀完全，且沉淀溶解度要很小。为促使沉淀完全，一般以超过20-50%为宜，过多可能产生配合反应，使沉淀溶解度加大。,（2）沉淀要纯净，主要是避免“共沉淀”。共沉淀的来源有A：表面吸附。B：吸留，是由于沉淀速度过快，杂质包入其中。C：后沉淀，是指在放置过程中其它物质沉淀。,（3）要求沉淀颗粒大，易于洗涤与过滤，加大颗粒的办法有A：减少沉淀物质的浓度，即在稀溶液中，慢慢加入沉淀剂，并不断搅拌，防止局部浓度过大。B：增加沉淀过程中沉淀的溶解度，在热溶液中进行沉淀。C：陈化，可放一段时间。,一、雄黄及其制剂的分析（砷类药）,雄黄主要成分为AS2S2 其毒性较小，但也有蓄积性，既不溶于水、也不溶于稀盐酸。有燥湿、杀虫、解毒之功效。在含砷化合物中比较重要的有雄黄、雌黄（As2S3）、砒石（As2O3）。由于砷化合物多数具有挥发性，因此测定砷的试样时不应任意的灼烧。雄黄、雌黄等含砷的化合物常用硝酸、硫酸等酸性溶剂分解，也可用碱熔分解法。,朱砂及其制剂的分析（汞类药）,朱砂系天然的辰砂砂石，主要成分是硫化汞（HgS），含量约占96%。具有镇惊安神的作用。朱砂的毒性主要来源于朱砂中的游离汞。汞类药材一般以酸分解。,