欢迎来到三一办公! | 帮助中心 三一办公31ppt.com(应用文档模板下载平台)
三一办公
全部分类
  • 办公文档>
  • PPT模板>
  • 建筑/施工/环境>
  • 毕业设计>
  • 工程图纸>
  • 教育教学>
  • 素材源码>
  • 生活休闲>
  • 临时分类>
  • ImageVerifierCode 换一换
    首页 三一办公 > 资源分类 > PPT文档下载  

    《分子荧光分析法》PPT课件.ppt

    • 资源ID:5470069       资源大小:878.50KB        全文页数:71页
    • 资源格式: PPT        下载积分:15金币
    快捷下载 游客一键下载
    会员登录下载
    三方登录下载: 微信开放平台登录 QQ登录  
    下载资源需要15金币
    邮箱/手机:
    温馨提示:
    用户名和密码都是您填写的邮箱或者手机号,方便查询和重复下载(系统自动生成)
    支付方式: 支付宝    微信支付   
    验证码:   换一换

    加入VIP免费专享
     
    账号:
    密码:
    验证码:   换一换
      忘记密码?
        
    友情提示
    2、PDF文件下载后,可能会被浏览器默认打开,此种情况可以点击浏览器菜单,保存网页到桌面,就可以正常下载了。
    3、本站不支持迅雷下载,请使用电脑自带的IE浏览器,或者360浏览器、谷歌浏览器下载即可。
    4、本站资源下载后的文档和图纸-无水印,预览文档经过压缩,下载后原文更清晰。
    5、试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓。

    《分子荧光分析法》PPT课件.ppt

    1,化学分析(),第十一章 荧光分析法,2,基本要求,掌握分子荧光的发生过程,激发光谱和发射光谱,荧光光谱的特征,分子结构与荧光的关系;影响荧光强度的因素,荧光定量分析方法。熟悉分子从激发态返回基态的各种途径,荧光寿命与荧光效率。了解荧光分光光度计与其他荧光分析技术。,3,处于基态的分子吸收能量被激发至激发态,然后从不稳定的激发态释放能量返回至基态。如果通过碰撞以热能或动能的形式释放能量回到基态,称为无辐射跃迁;如果是以辐射(发射光子)的形式回到基态,此种现象称为光致发光。常见的光致发光包括荧光和磷光。,概 念,4,荧光分析法,定义:根据物质的荧光谱线位置及其强度进行物质鉴定和含量测定的方法。,待测物质,分子荧光,原子荧光,激发光的波长范围,紫外-可见荧光,红外荧光,X射线荧光,分类:,5,荧光分析法的特点,灵敏度高:检测限0.0001 g/mL,比分光光度法高24个数量级。(在黑背景下检测;光源的强度大)选择性高:适当选择激发光的波长和荧光测定的波长;应用荧光寿命的差别 时间分辨技术。,6,MFS与UV/Vis 法比较:,原理UV/Vis 吸收MFS 发射,7,1575年,西班牙医生N.Monardes发现。1852年,Sir George Stokes对荧光产生的机理作了解释,并提出了“荧光”。1867年,首次用于分析测定。1928年,Jette和West提出第一台光电荧光计。1952年,商品荧光分光光度计出现。,8,第一节 荧光分析法的基本原理,一、分子荧光二、荧光与分子结构三、影响荧光强度的外部因素,9,一、分子荧光,(一)分子荧光的产生,1、分子的电子能级与激发过程,分子的多重性M:M=2s+1,s表示总自旋量子数,s=0时分子所处的电子能态为单重态,用S来表示;s=1时分子所处的电子能态为三重态,用T来表示;,10,2.荧光的产生,11,荧光寿命:109107 s磷光寿命:10410 s,图11-2 荧光和磷光产生示意图,12,辐射跃迁发光失活荧光:激发态分子从第一激发单线态S1的最低振动能级回到基态S0所发出的辐射。磷光:激发态分子从第一激发三重态T1的最低振动能级回到基态S0所发出的辐射。波长关系:激发光荧光磷光。,13,无辐射失活a.振动弛豫:激发态分子由同一电子能级中的较高振动能级转至较低振动能级的过程,其效率较高b.内转换:当两个电子能级非常接近以致其振动能级有重叠时,电子由高能级回到低能级的过程。,14,无辐射失活c.外转换:激发态分子与溶剂、溶质分子之间发生相互碰撞而失去能量的过程。d.系间跨越:激发态分子的电子自旋发生倒转而使分子的多重态发生变化的过程。,15,荧光寿命:109107 s磷光寿命:10410 s,图11-2 荧光和磷光产生示意图,16,结论:,荧光是来自最低激发单重态的辐射跃迁过程所伴随的发光现象,发光过程的速率常数大,激发寿命短;磷光是来自最低激发三重态的辐射跃迁过程所伴随的发光现象,发光过程的速率常数小,激发寿命相对比较长。,17,复习:荧光的产生,hv,回到基态,如何回去?,18,S2,分子的吸收情况,19,S2,振动弛豫:在同一电子能级(激发态),特点:无辐射;速率快(10-1410-12 s内完成),20,S2,内转移(internal conversion):相同多重性的两个电子能级之间的非辐射跃迁,21,S2,l3,荧光发射,Fluorescence,22,l1,l2,l3,l3 l1 l2 Only l3,23,S2,系间跨跃,磷光发射,l4,Intersystem Crossing,Phosphorescence,24,外转移 External Conversion,25,复习,分子荧光的发生过程基态分子 概念:基态、激发态(激发单重态S*、激发三重态T*)能量传递过程:1、无辐射跃迁(振动弛豫、内转换、外转换、系间跨越)2、辐射跃迁(荧光、磷光),26,荧光寿命:109107 s磷光寿命:10410 s,图11-2 荧光和磷光产生示意图,27,(二)荧光的激发光谱和发射光谱,荧光物质分子都具有两个特征光谱:激发光谱和发射光谱(荧光光谱)。激发光谱:不同激发波长的辐射引起物质发射某一波长荧光的相对效率。荧光光谱:在所发射的荧光中各种波长组分的相对强度。,图11-3 蒽的激发光谱和荧光光谱,28,激发光谱和发射光谱具有三个特点:斯托克斯位移,波长:荧光激发光;荧光发射光谱的形状与激发光波长无关;荧光光谱和激发光谱大致成镜像关系。,图11-3 蒽的激发光谱和荧光光谱,29,蒽的激发光谱(吸收光谱)和发射光谱(荧光光谱),激发光谱:Excitation Spectrum,激发波长:ex,发射光谱 Emission Spectrum,发射波长:em,图11-3 蒽的激发光谱和荧光光谱,b0,b1,b2,b3,c3,c2,c1,c0,30,二、荧光与分子结构,(一)荧光寿命和荧光效率,荧光寿命(f):除去激发光源后,分子的荧光强度降低到激发时最大荧光强度的 1/e 所需的时间称为荧光寿命(10-810-10s)。荧光物质受到一个极短时间的脉冲光激发后,荧光强度从激发态到基态的变化,可用指数衰减定律表示 Ft=F0 e-Kt,推导得 ln F0/Ft=t/f F0、Ft:开始时和t时的荧光强度,K为衰减常数。,31,荧光效率(f):又称为荧光量子产率 或荧光产率。,32,(二)有机化合物分子结构与荧光的关系,1.共轭效应*跃迁 芳香族化合物、五元杂环上取代苯基.共轭体系越大,越易产生荧光,荧光效率也增大.,33,2.刚性结构和共平面效应,酚酞(无荧光),8羟基喹啉(弱荧光),红色荧光,荧光黄,34,联二苯=0.2,芴=1.0,3,4-苯并芘,(强荧光物质),35,Ff0.75,Ff0.03,扭转离开了平面构型,影响了p-p共轭作用,36,顺式二苯乙烯无荧光,反式二苯乙烯强荧光,37,3.取代基的作用,给电子基增强荧光:OH,OR,NH2,NHR,NR2,CN吸电子基减弱荧光:COOH,C=O,NO2,NN,Cl,Br,I 与体系作用小的取代基影响不明显:SO3R,NH3,SH,F,R。,38,取代基之间若发生氢键,增强分子平面性和刚性会加强荧光:,39,(三)荧光试剂,荧光胺邻苯二甲醛(OPA)1-二甲氨基-5-氯化磺酰萘(Dansyl-Cl,丹酰氯)测定无机离子的荧光试剂,40,有机化合物的荧光分析(1)荧光胺(2)邻苯二甲醛(3)丹酰氯,荧光胺及其水解产物不显荧光,荧光胺与脂肪族或芳香族伯胺类形成的衍生物有高强度荧光,41,N,OH,8羟基喹啉(Al,Be等),茜素紫酱R(Al,F-等),用于测定无机离子的有机试剂,黄酮醇(Zr,Sn等),42,三、影响荧光强度的主要因素,内部因素:分子结构对荧光效率的影响外部因素:外界条件对荧光效率的影响,43,内部因素:分子结构对荧光效率的影响。物质分子有强的紫外吸收和一定的荧光产率是发射荧光的两个必备条件。分子结构中有跃迁(K带强吸收)或n跃迁(R带弱吸收)。长共轭结构:分子中必须具有大的共轭键结构。共轭度越大,发射波长长移,发光强度增加。分子的刚性和共平面性:具有刚性平面性结构的分子荧光量子产率高。取代基的影响:给电子取代基使荧光强度增大;而吸电子取代基则使荧光强度降低。,1.内部因素,44,长共轭结构示例,苯205/278/0.11,萘286/321/0.29,蒽356/404/0.36,维生素A ex327nm;em510nm,45,刚性和共平面结构示例,形成络合物后,如果分子的刚性和共平面性增强,可使荧光增强。,联苯f0.2 芴f1.0,8-羟基喹啉,8-羟基喹啉镁,46,空间位阻使分子共平面性下降,荧光减弱。,顺反异构体:反式分子有荧光,而顺式分子没有荧光(位阻原因)。例如:1,2二苯乙烯反式有强烈荧光,而顺式无荧光。,1-二甲胺基萘-7-磺酸盐 1-二甲胺基萘-8-磺酸盐 f0.75 f0.03,47,取代基作用第一类取代基是给电子基团,能增加分子的电子共轭程度,使荧光效率提高,荧光波长长移。如:NH2、OH、OCH3、NHR、CN等。第二类取代基是吸电子基团,会妨碍分子的电子共轭性,使荧光减弱甚至熄灭。如:COOH、NO2、CO、NO、SH、NHCOCH3、X(卤素原子序数,荧光效率)等。第三类取代基对电子共轭体系作用较小,对荧光的影响不明显。如:R、SO3H、NH3等。,48,49,外部因素:外界条件对荧光强度的影响 温度的影响:温度降低会使荧光强度增大;温度升高荧光强度减小。溶剂的影响:溶剂极性增加有时会使荧光强度增加,荧光波长长移;溶剂的黏度减小,荧光强度减弱。pH的影响:对于弱酸或弱碱性荧光物质,溶液的pH值改变,影响其解离平衡,使荧光强度发生变化。荧光熄灭的影响:荧光物质与荧光熄灭剂相互作用,引起荧光强度降低。散射光的干扰:瑞利光和拉曼光。,2.外部因素,50,温度:T 低,f增加。荧光素钠的乙醇溶液,T0时,每降低10,增加3%,-80 时=100%.,51,溶剂的极性:电子激发态比基态的极性大,溶剂的极性增强,荧光强度增大,荧光波长红移。,巯基喹啉在不同溶剂中的荧光峰和荧光效率,52,pH值影响荧光强度示例,pH值:13存在形式:离子 分子 离子有无荧光:无 蓝色荧光 无,53,熄灭剂:卤素离子、重金属离子、溶解氧分子、硝基化合物、重氮化合物、羰基和羧基化合物。瑞利光(Reyleigh scattering light):光子与分子发生弹性碰撞时,仅改变光子运动方向,不发生能量交换,这种散射光称为瑞利光。特点:波长与入射光相同。,54,拉曼光(Raman scattering light):光子与物质分子发生非弹性碰撞时,不仅改变光子运动方向,而且发生能量交换,这种散射光称为拉曼光。特点:当光子失去部分能量时,波长比入射光长,干扰最大;当光子多得到部分能量时,波长比入射光短。消除方法:选择适当的激发光波长可消除拉曼光干扰。,55,例如:硫酸奎宁在不同波长激发下的荧光光谱和散射光谱,56,57,荧光是物质吸收光子之后发出的光,荧光强度(F)与荧光物质吸收光的程度以及发射荧光的能力有关。测试荧光的方向与激发光入射方向垂直,吸收池是四面透光的。,荧光分析定量依据:荧光强度F与浓度c成线性关系。,第二节 荧光定量分析方法,58,一般当b c 0.05 时,F 与c呈线性关系,高浓度时,荧光物质发生自熄灭和自吸收现象,使F与c不呈线性关系,F,c,59,二、定量分析方法,1.校正曲线法2.比例法3.联立方程式法,60,1、标准曲线法,1)确定ex和em(激发光谱和发射光谱);2)确定适宜的条件:试剂浓度、pH、T、t 等;3)以标准溶液做工作曲线;4)测未知样的荧光强度(F),根据工作曲线计算荧光物质的浓度.,61,2、比例法:若标准曲线通过原点,在线性范围内可采用比例法(只需1个标准溶液);若标准曲线不通过原点,则应扣除空白溶液的荧光强度后再计算:3、联立方程式法:多组分混合物的荧光分析,62,第三节 荧光分光光度计及其他荧光分析技术,图11-7 荧光分光光度计示意图,63,荧光仪部件,激发光源:能够在紫外-可见光区连续发光,常用氙灯、高压汞灯或激光光源.样品池:石英池,四壁透明.单色器:两个光栅单色器,分置于样品池前后.检测器:光电池或光电倍增管,与激发光成直角的 方向检测荧光.,64,荧光光度计光路图,65,仪器的校正,灵敏度校正波长校正激发光谱和荧光光谱校正,66,二、其他荧光分析技术简介(自学),激光分析技术时间分辨荧光分析同步荧光分析胶束增敏荧光分析,67,荧光光度法的应用,生物化学分析,生理医学研究,临床检测.直接测定能产生荧光的物质.带苯环的氨基酸:色氨酸、酪氨酸、苯基丙氨酸.测定能与荧光试剂反应生成荧光化合物的物质.荧光生色团标记蛋白质,研究蛋白质的结构;致癌物同核酸结合常引起显著的荧光;无机离子(Mg2+、Al3+、Zn2+、Be+等)可同试剂形成荧光络合物。荧光熄灭法测定猝灭剂 Ni2+对Al-PAN络合物有荧光猝灭作用,可测Ni2+(610-5 610-3 gmL-1),68,举例 痕量3,4-苯并芘的测定:,萃取(环己酮或石油醚)浓缩层析以H2SO4 溶解苯并芘荧光分析,荧光测定:ex=520 nmem=545 nm,69,复习,分子荧光的发生过程 激发光谱和发射光谱 荧光光谱的特征 分子结构与荧光的关系 影响荧光强度的因素 荧光定量分析方法。,70,课堂复习,(1)下列叙述中正确的是()。a.荧光光谱的形状与激发波长无关。b.受激分子从激发态的各个振动能级返回至基态时所发出的光称为荧光。c.荧光波长短于激发光波长。d.磷光波长短于荧光波长。(2)荧光分光光度法是属于:()a.发射光谱法;b.吸收光谱法;c.拉曼光谱法;d.荧光光谱法;(3)从化合物的分子结构,推断荧光最强的是:()a.苯 b.萘 c.1-氯萘 d.蒽(4)荧光定量分析中,测定的是()a.拉曼光 b.发射光 c.瑞丽光 d.磷光,a,a,d,b,71,作业:,p-225:1、5,

    注意事项

    本文(《分子荧光分析法》PPT课件.ppt)为本站会员(牧羊曲112)主动上传,三一办公仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容本身不做任何修改或编辑。 若此文所含内容侵犯了您的版权或隐私,请立即通知三一办公(点击联系客服),我们立即给予删除!

    温馨提示:如果因为网速或其他原因下载失败请重新下载,重复下载不扣分。




    备案号:宁ICP备20000045号-2

    经营许可证:宁B2-20210002

    宁公网安备 64010402000987号

    三一办公
    收起
    展开