《仪器分析》PPT课件.ppt

尿微量清蛋白（MAU）P205 2微球蛋白（2 MG）P2091微球蛋白（1 MG）P212 BJP P202 N-乙酰-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)溶菌酶 尿淀粉酶(AMY)HCG,目前常见的临床检查模式,参考值,尿流式沉渣检查/L 尿红细胞数 U-RBC 0-25尿白细胞数 U-WBC 0-30 尿上皮细胞数 U-EC 0-15尿管型数 U-CAST 0-0.7尿细菌数 U-BACT 0-6000 病理管型 U-Path.CAST 0.0小圆上皮细胞 U-SRC 0.0 类酵母样菌 U-YLC 0.0 结晶U-XTAL 0.0红细胞信息 U-RBC info 非溶血红细胞数量 U-Nlysed#非溶血红细胞百分比 U-Nlysed%,尿干化学检查pH 4.68.0蛋白质 PRO 葡萄糖GLU 酮体KET 尿胆原UBG+胆红素BIL 亚硝酸盐NIT 红细胞ERY 白细胞LEU 比密SG 1.0151.025VitC 0.6mmol,镜检结果红细胞RBC:03/HP 白细胞WBC:05/HP 上皮细胞EC:少 结晶CRYSTAL:少管型CAST:0偶见/LP,尿比重 尿酸碱度 尿白细胞 尿蛋白质 尿亚硝酸盐,尿葡萄糖尿酮体尿胆原尿胆红素尿红细胞,尿液干化学分析,尿液的酸度(PH)比密(SG)蛋白质(PRO)葡萄糖(GLU)酮体(KET)胆红素(BIL)尿胆原(UBG)亚硝酸盐(NIT)白细胞(LEU)红细胞/隐血(Hb)维生素C(Vitc),反应模块,尼龙膜：防止大分子物质对反应的污染；绒制层：包括碘酸盐层和试剂层：碘酸盐层可以破坏维生素C等干扰物质，试剂层含有试剂成分，主要与尿液中测定物质发生化学反应，产生颜色变化；吸水层：可使尿液均匀快速的浸入，并能抑制尿液流到相邻的反应区；塑料底层：作支持体。,尼龙膜 碘酸盐层 试剂层 吸水层 塑料底层,空白块：用于消除尿自身颜色在试剂块上产生颜色的干扰。,尿液分析试纸,项目 缩写符号 反应原理酸碱度 pH pH指示剂蛋白质 PRO pH指示剂的蛋白质误差法葡萄糖 GLU 葡萄糖氧化酶法隐血 BLD Hb类过氧化物酶法胆红素 BIL 偶氮反应法尿胆原 URO 醛反应法酮体 KET 硝基铁氰化钠法亚硝酸 NIT 亚硝酸盐还原法白细胞 LEU 酯酶法比密 d（SG）多聚电解质离子解离法抗坏血酸 ASG 吲哚酚法,尿干化学试纸按功能分组,模块组合1：比密、蛋白质、红细胞、白细胞：与肾脏疾病相关模块组合2：白细胞、红细胞、亚硝酸盐：与泌尿系感染性疾病有关模块组合3：比密、葡萄糖、酮体：与内分泌系统疾病有关模块组合4：胆红素、尿胆原：与肝胆系统疾病有关模块组合5：pH、比密、维生素C：对干化学实验的影响监测。,按检测项目分 8项：pH、PRO、GLU、KET、BIL、URO、BLD、NIT9项：8项+LEU10项：9项+SG11项：10项+VitC12项：11项+颜色或透明度,组合型试带,肾病型四联试带：pH、蛋白、隐血、比密糖尿病型五联试带：pH、蛋白、葡萄糖、酮体、比密肝脏病型二联试带：胆红素、尿胆原,浸渍试带条 将多联试带完全浸入尿液12s，然后立即取出。沥去多余尿液 沿试管壁将试带上多于尿液去尽。检测标本 将试带置于仪器检测槽内，直至仪器自动打印出报告。,尿干化学分析试带及结果判断,各种尿干化学分析仪,一、尿液分析仪仪器检测原理 仪器采用球面积分仪接受双波长反射光，测定试剂带上的颜色变化进行半定量测定。试剂带上有数个含各种试剂的试剂垫，各自与尿中相应成分进行独立反应，而显示不同颜色，颜色的深浅与尿液中某种成分的含量成比例关系。试剂带中还有另一个“补偿垫”，作为尿液本底颜色，对有色尿液所产生的误差进行补偿。,测定波长：是被测试剂块的敏感特征波长；参考波长：是被测试剂块的不敏感的波长，用以消除背景光和其它杂散光的影响。照射光波长的选择由检测项目决定。亚硝酸盐、酮体、胆红素、尿胆原的测定波长为550nm；PH、葡萄糖、蛋白质、维生素C、潜血的测定波长为620nm；参考波长为720nm。,计 算 原 理 R(%):反射率Tm:试剂垫对测定波长的反射强度Ts:试剂垫对参考波长的反射强度Cs:标准垫对参考波长的反射强度 Cm:标准垫对测定波长的反射强度,尿液自动分析仪结构图,CPU,尿液分析仪由：机械系统、光学系统、电路系统三部分组成。,（二）光电系统结构图,四、尿液分析仪结构,返回本节目录,尿液试纸条urinary reagent strip,光源,接收器,(二)试带使用注意事项,1.严格按操作说明书要求进行操作；2.试带要在有效期内使用；3.试带从冷藏变成室温前不要打开瓶盖，用后盖紧瓶盖；开过盖的试带瓶不建议放在冷藏温度，可放阴凉、干燥、避光处。4.禁止用手触摸试剂区，5.不同厂家的同类试纸，其原理、方法、结果不相同，不可混用。,尿干化学方法学评价,优点：操作简便、快速、同时获得多项结果。缺点：影响因素多，必须结合尿理学检查、显微镜 检查，互相验证、综合分析目前国内采用方法：干化学法LEU、BLD、PRO、NIT四项皆（-），可不镜检。其中任一项出现异常时，则必须镜检。注意事项：以尿沉渣作为诊断依据或观察疗效时，不宜用干化学过筛（肾脏病、内分泌病、免疫病等）临床医生要求的；,(三)试纸分析的假阳性和假阴性,1.尿中含高浓度VC,可使试纸法葡萄糖和隐血结果呈假(一);2.尿蛋白试纸是利用PH指示剂的蛋白质误差原理,白蛋白的反应性最强,球蛋白的反应性弱。3.某些药物（如氯丙嗪、酚噻嗪、吩嗪类药物）可使尿BIL、URO等呈假（+）；4.尿PH超过8.0以上，PRO呈假(+)；,三、干化学分析仪的局限性,1.试剂条的因素 2.尿本身的因素：如标本采集不不合 格等 3.操作原因：如仪器的校准、维护、环境温度。4.皆为定性分析，只能做过筛试验。其次是不能检测尿有形成分，因而不能代替尿沉渣检查。,尿液结果分析：,尿沉渣分析仪,尿沉渣分析仪,尿沉渣分析仪是用显微镜或专用设备对尿液有形成分检查的仪器，摆脱了繁琐和费时的操作程序，做到尿沉渣分析的标准化、自动化。目前使用的尿沉渣分析仪，主要有：图像识别法、流式细胞仪法，以及尿液分析工作站等几种类型。,运用流式细胞术及特殊荧光染色的原理，将尿标本染色后进入鞘液流动池时，每个有形成分单个纵列通过流动池中心轴线，每个粒子均被氩激光光束照射，并各自发出不同的荧光强度(信号)。信号表达为3类：即前向散射光、荧光和电阻抗。,（一）流式细胞式尿沉渣分析仪,流式细胞式尿沉渣分析仪原理,激光束(=488m),荧光强度fl：,前向散射光强度：细胞大小,RND、DNA强度,前向散射光脉冲宽度：细胞长度,荧光脉冲宽度(F1w)：细胞染色质长度,电阻抗：反映细胞体积,流式细胞式尿沉渣分析仪原理,前向散射光强度(Fsc)：细胞大小 前向散射光脉冲宽度(Fscw)：细胞长度荧光信号 荧光强度(Fl)：细胞染色质(DNA/RNA)的强度 荧光脉冲宽度(Flw)：细胞大小电阻抗：反映细胞体积,前向散射光信号,仪器将这种荧光，散射光和电阻抗的信号转变为电信号，综合分析这些电信号，得出细胞大小、长度、染色强度和染色部分长度以及细胞的体积资料，并给出每类细胞的散射图和直方图，并计算出每微升尿中各种细胞的数量进行报告。,UF-100尿沉渣分析系统散点图,细胞大小,细胞长度,荧光脉冲宽度,前向散射光脉冲宽度,UF-100尿沉渣分析系统散点图,细胞大小,染色质强度,前向散射光强度,荧光强度,流式细胞术尿沉渣分析仪检测参数,红细胞(RBC)均一性红细胞（Isomorphic RBC）%非均一性红细胞（Dysmorphic RBC）%非溶血性红细胞数量（Non-Lysed RBC#）非溶血性红细胞百分比（Non-Lysed RBC%）白细胞（WBC）上皮细胞（EC）、小圆上皮（SRC）管型（CAST）,病理管型（Path.CAST）细菌（BACT）酵母细胞（YLC）精子细胞（SPERM）结晶（XTAL）尿液电导率（conductivity）,RBCP70 70%红细胞位置 提示：以未溶解的RBC为100%时，70%红细胞的平均体积。NLRBC%未溶解RBC百分比 提示：完整RBC的百分比（不包含影形RBC，RBC碎片，皱缩红细胞）。,RBC INF 红细胞信息 提示：RBC来源。,Microcytic(不均一小红细胞)?提示红细胞源于肾小球Normocytic(正常均一红细胞)?提示红细胞非来源于肾小球Non classified(未分类型)?提示混合型红细胞细胞 Negative 提示红细胞计数正常,病例1：男，29岁，,尿干化学检查pH 5.0蛋白质 PRO 葡萄糖GLU 酮体KET 尿胆原UBG 胆红素BIL 亚硝酸盐NIT 红细胞ERY+白细胞LEU 比密SG 1.015VitC 0.6mmol,尿流式沉渣检查U-RBC 1440.2 U-WBC 5.9U-EC 1.5 U-CAST 0.13U-BACT 132.6U-Path.CAST 0.0U-SRC 0.0 U-YLC 0.0U-XTAL 171.6 U-RBC info Isomorphic?U-Nlysed#1431.3/L U-Nlysed%99.3%,镜检结果WBC:03/HP RBC:满视野/HP,肾结石,病例2：男，81岁，,镜检结果WBC:满视野/HP RBC:1020/HP EC:28/HP,急性膀胱炎,尿干化学检查pH 7.0蛋白质 PRO+葡萄糖GLU 酮体KET 尿胆原UBG+胆红素BIL 亚硝酸盐NIT+红细胞ERY+白细胞LEU+比密SG 1.010VitC 0.6mmol,尿流式沉渣检查U-RBC 195.9 U-WBC 1509.8U-EC 74.3 U-CAST 1.15U-BACT 1025.0U-Path.CAST 0.2U-SRC 2.0 U-YLC 0.0U-XTAL 7.6 U-RBC info Isomorphic?U-Nlysed#177.9/L U-Nlysed%90.8%,病例3.男，25岁，,镜检结果WBC:510/HP RBC:1020/HP EC:满视野/HP 透明管型:满视野/LP 颗粒管型:满视野/LP,肾小球肾炎,尿干化学检查pH 6.5蛋白质 PRO+葡萄糖GLU 酮体KET 尿胆原UBG+胆红素BIL 亚硝酸盐NIT 红细胞ERY+白细胞LEU+比密SG 1.010VitC 0.6mmol,尿流式沉渣检查U-RBC 141.5 U-WBC 97.0U-EC 602.3 U-CAST 118.39U-BACT 2090.7U-Path.CAST 38.9U-SRC 18.2 U-YLC 0.0U-XTAL 0.0 U-RBC info Isomorphic?U-Nlysed#14.8/L U-Nlysed%10.4%,治疗前后散点图对比,病 例,张某，男，39岁，急性肾小球肾炎。图示该患者尿液标本UF-100分析仪测试结果。尿干化学分析结果：SG：1.025 KET：neg NIT：negLEU：25/l BIL：neg GLU：norm PRO：5.0g/L pH：7.0 UBG：norm ERY：250/l 镜检结果：WBC：5-10/HP RBC：满视野/HP EC：0-2/HP尿蛋白定量：2.20g/24h尿沉渣分析仪结果：红细胞位于散射图的左下方,非均一 性红细胞占99.7%;经相差显微镜检查证实为多形性红细胞,急性肾小球肾炎,Dysmorphic RBC%99.7%,方法学评价,1.优点：不需离心尿液，可自动进样；所需标本量少；检测速度快，效率高，可报告多项参数；检测过程计数的粒子数040000，提高了准确性；操作程序同一，易于标准化和质量控制。2.局限性:对尿液中的某些成分不能准确辨认，仍需显微镜进行 分类和确认。应用时间短，普及面窄，临床实际应用经验欠缺；尚未建立公认的参考范围；,仪器采用流式细胞术、高速频闪光源和电视摄相的光学系统，计算机对图像进行分析等技术。,图像识别尿沉渣分析仪,图像识别尿沉渣分析仪,AVE-763尿沉渣智能分析仪,尿沉渣定量计数池,图像识别尿沉渣分析仪方法学评价,国内进入较晚，尚未普及，应用经验少，试剂应用效果尚待进一步探讨。使用光学流动计数池，体积准确恒定，视野清晰，由于是密闭的管道，标本不污染工作环境，安全性好。由于尿液有形成分复杂，且易发生变形，有时图像识别软件难以识别。不能识别的成分如何处理，是否删除处理。如细胞管型、细胞重叠、模糊的图像和碎片等其误差如何评估，如何去除干扰如何合理的组合尿干化学与影像学的结果,尿干化学分析仪+UF-100尿沉渣分析仪+显微镜检查 尿干化学分析仪+图像识别尿沉渣分析仪,（三）尿液自动化分析工作站,急性膀胱炎（治疗前）RBC：195.9 LWBC：1509.5 LEC：74.3 LBACT:1025.0 L,急性膀胱炎（治疗中）RBC：33.3 LWBC：284.8 LEC：76.4 LBACT:544 L,肾结石病人RBC：1440.2 LWBC：5.9 LBACT:132.6 LDysmorphic RBC%：8.8%,透明度颜色SG 1.010PH 5.5NIT+LEU+150/uLPRO+1.0g/LGLU+5.5mmol/LKET negBIL negUBG normERY+150/uL,CONDCT 21.1 mS/cmPCASTF 0.3/uLN-WBC 50/uLBACT 8000/uLCAST 0.5/uLSRC 0.8/uLEC 82/uLN-RBC 50/uLRBC70 88.6NLRBC%58.4RBCINF MicroyticYLC 0.0/uLXTAC,结果分析,NIT+BACT 8000/uL WBC 10/uL尿细菌感染可能性大，尿培养阳性率高。ERY+150/uL N-RBC 50/uL，ERY检测的是Hb，而UF-100检测的是完整的细胞，可能溶血，RBCINF 为Microytic，提示红细胞源于肾小球。LEU+250/uL N-WBC 50/uL，LE尿白细胞检测的是粒细胞酯酶，而N-WBC检测的是完整的细胞，影响因素细菌、渗透压等。,颜色透明度SG 1.015PH 6.0LEU+25/uLNIT neg PRO+1.0g/LGLU normKET negBIL negUBG normERY+10/uL,CONDCT 21.1 mS/cmPCASTF 0.3/uLN-WBC 100/uLBACT 6500/uLCAST 0.5/uLSRC 0.38/uLEC 0.3/uLN-RBC 200/uLRBC70 78.6NLRBC%58.4RBCINF MicroyticYLC 450/uLXTAC,结果分析,ERY+25/uL N-RBC 200/uL ERY检测的是Hb，而UF-100检测的是微粒（RBC体积大小），类酵母菌、结晶可干扰。LEU+25/uL N-WBC 100/uL 化学法LE尿白细胞检测的仅仅是粒细胞，而N-WBC还包括淋巴、单核细胞。YLC 为450/uL提示可能有真菌感染,再见,