Hela细胞的传代培养.ppt

HeLa细胞的传代培养,教学目标,1.理解细胞传代培养的概念和原理2.能按照操作规程进行细胞传代培养的操作,细胞传代培养的概念,概念：指细胞从一个培养瓶以1:2或其他比率转移，接种到另外的培养瓶中的培养，也叫做继代培养。HeLa细胞是一种贴壁生长的细胞，在进行传代时通常是采用胰蛋白酶消化，把细胞分散成单细胞再传代。,培养细胞一代生长过程,实验前准备,1、材料：HeLa细胞 2、试剂：0.25胰蛋白酶、1640培养基（含10 小牛血清）、PBS,实验前准备,超净工作台,CO2培养箱,倒置显微镜,3.仪器设备,离心机,恒温水浴锅,3.仪器设备,实验前准备,培养瓶，移液管，酒精灯，酒精棉球，试管架，记号笔等。,3.仪器设备,实验前准备,（1）细胞培养用的器材和试剂灭菌；（2）超净工作台准备（75%酒精擦拭台面，紫外灯照射30min）；（3）试剂预热（37水浴锅）；（4）操作人员准备（75%酒精擦拭双手等）。,4.实验前准备工作,实验前准备,细胞生存环境：无菌、无毒,细胞传代操作,1、倒去培养瓶中的旧培养液，加入2-3mL预热的PBS液，轻轻振荡漂洗细胞，以除去悬浮在细胞表面的碎片。,吸除培养液,细胞传代操作,2、胰蛋白酶消化：加入适量0.25胰蛋白酶消化液，37消化，注意消化液的量以盖住细胞最好。,加消化液,细胞传代操作,3、盖紧瓶盖，放在倒置镜下观察细胞。随着时间的推移，原贴壁的细胞逐渐趋于圆形，在还未漂起时将消化液弃去，加入适量预热后的培养液终止消化。（一般消化时间约为2-3分钟）。,消化前细胞,消化后细胞（适度状态）,吸除消化液,细胞传代操作,4、用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液。,吹打成细胞悬液,分装,细胞传代操作,5、以1：2或1：3进行分装，补充新鲜培养基，并在培养瓶上做好标记，注明代号、日期，轻轻摇匀，置于37 CO2培养箱培养（如果瓶盖不带通气孔，则需将瓶盖旋开半圈）。24h后即可对细胞的生长情况进行观察记录。当细胞长成单层后即可用于接种或冻存。,实验操作注意事项,1.用电安全 2.操作仪器安全 3.及时规范记录,HeLa细胞传代培养实验原理,细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。贴壁细胞需经消化后才能分瓶。,Thankyou,