维生素EVitaminE.ppt
维生素 EVitamin E,王巧群01药剂,化学名称：（）-2,5,7,8-四甲基-2-(4,8,12-三甲基十三烷基）-6-苯并二氢吡喃醇 分子式：C31H52O3 472.75,维生素E,维生素E为-生育酚及其各种酯类。分天然品（右旋体）和合成品（消旋体）。一般药用品为合成品，即消旋体。中国药典（2000）收录：Vitamin E Injection;Vitamin E PowderVitamin E Soft Capsules;Vitamin E Tablets,维生素的结构,维生素E为苯并二氢吡喃醇衍生物，苯环上有一个乙酰化的酚羟基，故又称为生育酚。化学名称为：（）-2,5,7,8-四甲基-2-(4,8,12-三甲基十三烷基）-6-苯并二氢吡喃醇醋酸酯。主要有、和 等多种异构体，其中以-异构体的生理活性最强。,维生素E的性质,溶解性：黄色或黄色透明的粘稠液体，在无水乙醇、丙酮、乙醚、石油醚中易溶，在水中不溶。水解性：苯环上含有乙酰化的酚羟基，在酸性或碱性溶液中加热可水解生成游离生育酚，故常作为特殊杂质进行检查。,维生素E的性质,氧化性：维生素E在无氧条件下对热稳定，加热200 也不破坏，但对氧十分敏感，遇光、空气可被氧化。其氧化产物为-生育醌和-生育酚二聚体。紫外吸收特性 维生素E中苯环上有酚羟基，固有紫外吸收，其无水乙醇液在284nm的波长处有最大吸收，其吸收系数为41.045.0。,鉴别实验,维生素E,生育红（橙红色）,硝酸反应：维生素E在硝酸条件下，水解生成生育酚，生育酚被硝酸氧化为邻醌结构的生育红而显橙红色。,三氯化铁反应,原理：维生素E在碱性条件下，水解生成游离的生育酚，生育酚经乙醚提取后，可被Fecl3 氧化成对-生育醌；同时Fe3+被还原为 Fe2+，Fe2+与联吡啶生成红色的配位离子。方法：取本品约10mg，加乙醇制KOH 试液2ml,煮沸5min,放冷，加水4ml与乙醚10ml，振摇，静置使分层；取乙醚液2ml，加2-2-联吡啶的乙醇溶液(0.5 100）数滴，应显血红色。,三氯化铁反应,对-生育酚,三氯化铁反应,血红色,紫外光谱法,维生素E的0.01无水乙醇液，在284nm的波长有最大吸收；在254nm的波长处有最小吸收，可供鉴别。,薄层色谱法,将供试品点于硅胶G薄层板上，以环己烷乙醚（4：1）为展开剂，展开10cm15cm后，取出，于空气中晾干，喷以浓硫酸，在105 加热5min，-生育酚醋酸酯和-生育醌的Rf值分别为0.5、0.7和0.9。,其他方法（鉴别）,气相色谱法 USP(24)红外光谱法 BP(2000),JP(14),三、杂质检查,一、酸度目的：检查维生素E制备过程中引入的游离醋酸。方法：取乙醇与乙醚各15ml，置锥形瓶中，加酚酞指示液0.5ml，滴加NaOH滴定液（0.1ml/L)至微显粉红色，加本品1.0g，溶解后，用NaOH滴定液（0.1ml/L)滴定，不得超过0.5ml。（CH.P),二、生育酚,来源：制备过程中未酯化原理：利用游离生育酚的还原性，可被硫酸铈定量氧化。故在一定条件下以消耗硫酸铈滴定液（0.01mol/L)的体积来控制游离生育酚的限量。方法：（硫酸铈滴定法）取本品0.10g,加无水乙醇5ml溶解后，加二苯胺试液一滴，用硫酸铈滴定液（0.01mol/L）滴定，消耗硫酸铈滴定液（0.01mol/L)不得过0.5ml.,生育酚的检查,生育酚：Ce4+1：2生育酚的分子量为430.7中国药典规定维生素E中所含的游离生育酚 2.15每1ml硫酸铈滴定液（0.01mol/L）相当于0.002154g的游离生育酚。计算L=（TV）/S100%=0.0021541.0/0.101002.15,含量测定：,气相色谱法 CH.P（2000）BP(2000)USP(24)高效液相色谱法 JP(14)（外标法）荧光分光光度法,鉴别测定方法选择,鉴别：气相色谱法 USP(24)红外光谱法 BP(2000),JP(14)含量测定：气相色谱法 CH.P（2000）BP(2000)USP(24)高效液相色谱法 JP(14)（外标法）荧光分光光度法,气相色谱法Ch.p(2000）,色谱条件与系统适用性实验 以硅酮(OV-17)为固定相，涂布浓度为2；柱温为265。理论板数按维生素E计算应不低于500，维生素E峰与内标物质峰的分离度应大于2。校正因子测定：取正三十二烷适量，加正己烷溶解并稀释成每1ml中含1.0ml的溶液，摇匀，作为内标溶液。另取维生素E对照品约20mg，精密称定，置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液10ml，密塞，振摇使溶解，取13ul注入气相色谱仪，计算校正因子。测定法：取本品约20mg，精密称定，置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液10ml密塞，振摇使溶解，取13ul注入气相色谱仪，测定，计算，即得。,气相色谱法,BP(2000)虽采用正三十二烷为内标，但Rf 1.4;USP(24)采用十六酸十六醇酯为内标，Rf 1.0,高效液相色谱法（JP(14)外标法）,色谱条件色谱柱：内径4mm，长15cm30cm的不锈钢柱固定相：填充粒经5um10um的十八烷基硅烷键合硅胶流动相：甲醇-水（49：1）检测波长：292nm,高效液相色谱法,方法：取维生素E供试品和生育酚对照品各约0.05g，精密称定，分别溶于无水乙醇中，并准确稀释至50.0ml，即得供试品溶液和对照品溶液；精密吸取两种溶液各20ul注入高效液相色谱仪，记录色谱图，分别测量维生素E的峰高Hx和Hr供试品中生育酚的量（mg)mr Hx/Hrmr为生育酚对照品的量（mg）；Hx和 Hr分别为供试品和对照品中生育酚的峰高。,同步荧光扫描技术,在同时扫描两个两个单色器波长的情况下，由测得的荧光强度信号与对应的激发波光或发射波长构成光谱图，与通常的荧光法比较具有以下优点：1、使光谱简化；2、使谱带窄化；3、减小光谱的重叠现象；4、减少散射光的影响。,同步荧光,荧光法 维生素E的荧光峰和溶剂的拉曼光谱重叠，影响荧光法的灵敏度及准确性。同步荧光扫描法 选择适当的，可有效地消除溶剂拉曼光谱的干扰，提高测定方法的灵敏度及准确性。,同步荧光扫描法,仪器：日立F-4010型光谱分光光度计。维生素E对照品溶液：dl-生育酚用正己烷配成1mg/ml，放4 冰箱保存，临用时再用无水乙醇稀释成4.0mg/L。,方法,在荧光分光光度计上以发射、激发波长间隔为40nm，在220nm400nm扫描同步荧光光谱，测定同步荧光峰（337nm）的荧光强度信号值。荧光光度计的工作条件为双狭缝10nm，响应时间2s，扫描速度600nm/min。计算VE=(FU-FB)/(FS-FB)4.0(mg/L)FU、FB、FS分别为测定、标准和空白管在VE同步荧光峰337nm处的荧光强度。,取上清液置1cm石英比色池,谢谢！,
