维生素C的提取及含量测定.ppt
维生素C的提取及含量测定,一、实验目的,学习维生素C的重要性质 掌握2,6-二氯酚靛酚法测定维生素C的原理和方法,二、实验原理,维生素C的结构与性质维生素定量测定,结构与性质,维生素C/L-抗坏血酸(ascorbic acid)多羟基，内酯；酸性；易被氧化：中、碱性，热，光，重金属破坏,L-抗坏血酸,脱氢抗坏血酸,*若脱氢维生素C进一步氧化，则失去活性,维生素C的功能,维生素C是重要的供氢体促进胶原合成坏血病,来源,新鲜水果及蔬菜:橙类、番茄、辣椒,富含维生素C量高的食物（毫克/100克食物),酸 枣830-1170猕猴桃568枣 549辣 椒185山 楂89柿子椒89菜 花88金花菜85苦 瓜84雪里红83,豌豆苗53油 菜51橙 49柚 41柠 檬40柑 橘34水萝卜34大白菜19西红柿12芥菜头80青 蒜77,2,6-二氯酚靛酚 氧化还原指示剂,三、实验内容,样品处理：2.0g猕猴桃510ml 2%的草酸研磨成浆状 50ml的容量瓶定容过滤,标准液滴定：5ml 1草酸+5ml 0.001molL维生素C(176.13)2,6-D滴定到浅红色，30s；3次（10 x2,6-D)计算1ml 2,6-D相当于维生素C的mg数T,C：抗坏血酸的浓度（mg/ml）V1：抗坏血酸的量（ml）V2：消耗染料溶液的量（ml）,样品滴定：50ml 锥形瓶：滤液5ml（移液管）2,6-D滴定到浅红色，30s；3次空白滴定：50ml 锥形瓶：5ml l草酸2,6-D滴定到浅红色，30s；3次,计算结果,100g 样品含维生素C的mg数=Bx(A-E)xTx100/CxDA滴定样品所消耗的2,6-二氯酚靛酚钠的平均 毫升数；E滴定空白所消耗的2,6-二氯酚靛酚钠的平均毫升数；B样品提取液的总体积（50ml）；C每次滴定所用的提取液的毫升数（5ml）；D提取所用的样品重量（2g）；T 1ml 2,6-D相当于维生素C的mg数。,四、操作要点,定容,过滤,移液管使用,滴定管的使用,滴定,思考题,为什么维生素C标准溶液要用新鲜配制的？为准确测得维生素C的含量，实验时要注意那些操作步骤？,多酚氧化酶的制备和性质研究,一、实验目的,了解植物组织褐变和多酚氧化酶的关系。学习多酚氧化酶的提取和活力测定方法了解影响酶促反应速度的各种因素,二、实验原理,酶的分离纯化：材料的选择（新鲜、目的蛋白含量高）分离过程中避免一切可能引起变性的条件蛋白质的纯化一般在低温下进行（4oC）细胞破碎：机械破碎分离目的蛋白：盐析法,多酚氧化酶催化的反应,邻苯二酚,邻苯醌,三、实验内容,多酚氧化酶的制备：50g小块土豆+50ml氟化钠（600g/班）捣碎机中研磨30s 3-5层纱布过滤（40-45ml滤液/组）等体积饱和硫酸铵，4，30min 离心4，4000r/min，20min沉淀+15ml柠檬酸缓冲液离心4，4000r/min，15min上清多酚氧化酶粗制品,多酚氧化酶的性质,多酚氧化酶的作用：催化的反应多酚氧化酶的化学性质：稳定性底物专一性（邻苯二酚，对苯二酚，间苯二酚）底物浓度酶浓度氢离子浓度（移液管）,四、操作要点,公用试剂的使用、玻璃器皿清洁、定量、定时,离心机及其使用,离心机是利用离心力对混合液（含有固形物）进行分离和沉淀的一种专用仪器。普通（非冷冻）离心机：转速小于4000rpm(Rotate Per Minute)，台式高速离心机最大转速可18000rpm。低速冷冻离心机：转速一般不超过4000rpm 高速冷冻离心机：转速可达20000rpm，收集微生物、细胞碎片、细胞、大的细胞器、硫酸沉淀物以及免疫沉淀物等。超速离心机：转速可达50000rpm，能使亚细胞器分级分离，并用于蛋白质、核酸分子量的测定等。,转 头,离心管,开启离心机控制电闸,打开离心机电源开关,选择转头,将转头放入离心机内预冷,平衡离心管,离心管放入转头、拧紧转头盖,关闭离心机盖,设定离心转头速度、温度、时间，开始离心,离心结束后,取出离心样品管 取出转头，擦干、清洁转头 关闭离心机电源开关 关闭离心机控制电闸,五、思考题,为什么滤液为红色时应重新取材提取多酚氧化酶？怎样可以使切好的土豆丝不变色？怎样配制1000ml柠檬酸缓冲液（0.05mol/L，pH4.8）,
