dd第四次实验血钙血磷测定.ppt

第四次实验 钙、磷、试剂空白测定,目的与要求1.掌握钙、磷的测定原理和操作方法 2.掌握试剂空白测定的应用 3.了解钙、磷的测定的临床意义,一、血清钙离子测定,甲基麝香草酚蓝比色法邻甲酚酞络合酮法（临检中心推荐）原子吸收光谱法离子选择电极法,(一)实验原理,血清中钙离子在碱性溶液中能与甲基麝香草酚蓝染料结合，生成有色复合物。,(二)试剂,工作液：显色试剂与碱性试剂等量混合,(三)操作,1.检测参数主波长：612nm 温度：室温。2.空白管 标准管 样本管,3.分别混匀各管，室温放5分钟，以空白管校零，记录各管吸光度。,4.结果 钙(mmol/L)=,(四)临床意义,1.参考值：2.12.9mmol/L。生命危急值：1.7mmol/L，3.3mmol/L。2.增高：甲旁亢、多发性骨髓瘤、VitD增多症、代酸等3.降低：甲旁减、尿毒症、佝偻病等。,(五)方法评价,1.重复性、准确度较好、简便、易于自动化。2.线性：在样本浓度0-3.75mmol/L范围内,线性良好。3.精密度：批内 CV5。批间相对误差54.易受干扰。,三、无机磷的测定,磷钼酸还原法临检中心推荐染料结合法氧化酶法同位素质谱法决定性方法原子吸收光谱法,(一)实验原理：,血清中无机磷在酸性溶液中与钼酸铵反应生成在340nm处有吸收峰的磷钼酸铵，其吸光度的变化与无机磷含量成正比。,(二)试剂,(三)测定步骤,混匀，以3710在340nm波长处比色。结果无机磷含量=A样本/A校准C校准,空白管,校准管,标本管,磷试剂,纯化水,校准液,标 本,(ml),1.0,1.0,1.0,0.02,0.02,0.02,(四)临床意义,1.参考值：成人：儿童：2.增高：甲旁减、慢性肾炎晚期、多发性骨髓瘤、骨折愈合期等。3.减低：甲旁亢、肾小管变性病变时等。,(五)方法性能,精密度:批内变异 CV5。线性范围:0-4mmol/L。,三、试剂空白测定,1.定义：用蒸馏水调零测定仅仅未加样品的试剂管，用以扣除试剂干扰对结果所造成的系统误差。本次实验用钙离子测定的方法进行试剂空白实验。,2.操作,室温放5分钟，以蒸馏水调零，612nm 测定。,计算,空白值=空白OD/标准OD 标准浓度 样本值=标准浓度,3.试剂空白的选择原则,（1）试剂中某组分在测定波长下对光有吸收；（2）被测试样本身在测定波长下没有光吸收；（3）被测试样中的其他成分与显色剂作用后在测定波长下没有光吸收；（4）利用改变加入试剂的次序使试样不显色。,预习下次课内容：总蛋白测定及回收试验。,