液相色谱基础知识.ppt

液相色谱基础知识,Waters LC School 培训教材,蒸馏离心电泳过滤超滤色谱,常见的分离方式,色谱法的分类,HPLC分离的机理,典型的仪器配置,液相色谱的应用（一）,“分析型液相色谱”定性及定量分析灵敏度的要求样品的复杂性样品量的要求精度及准确度的要求容易使用,液相色谱的应用（二）,“制备型液相色谱”分离及纯化化合物的稳定性样品的复杂性制备量的要求纯度的要求，及纯度的鉴定方法的安全性,开发液相色谱方法,问题什么样的分离结果是好的?分辨率?,什么是色谱的分辨率？,分辨率的公式：,影响分辨率的因素：K，a，N,分辨率的方程 k 是容量因子，表达了样品与柱填料的作用强弱。a 是选择性系数，描述两化合物分离的好坏程度。是化学因素。N 是理论塔板数，描述色谱峰的谱带展宽程度。,色谱柱的柱效 N,理论塔板数计算公式：Ws 方法Wtan16切线法Wh5.54半峰高W3s9 3sW4s16 4sW5s25 5s,Inject,Inject,用“切线”法计算柱效,不好的色谱柱的柱效反而比好色谱柱的要高，因为其拖尾部分测不出来,Good Column,Bad Column,Inject,Inject,用“5”法计算柱效,提高柱效的方法,色谱柱本身减小填料的颗粒度找到最佳的流速(根据不同内径)合适的温度降低溶剂的粘度增加柱长,其他影响柱效的因素,柱外效应 连接管路 进样器、检测器进样体积进样量,容量因子 k,改变k值的方法调节流动相的极性、pH、离子强度等梯度淋洗,与峰高的关系,与R的关系,选择性系数 a,定义 a=1 时两组分分不开，改变a的途径 改变固定相 改变流动相 改变温度 改变样品的本身性质,a，k，N如何控制分辨率?,液相色谱的检测模式,灵敏度、选择性、及适应能力,色谱条件的优化,开发液相色谱方法,分辨率是色谱分离中主要考虑的因素在开发色谱方法时，有很多因素是很重要的。除分辨率之外，以下几个因素都要考虑。灵敏度载样量分析速度溶剂损耗,成本容易使用色谱柱寿命效率,