实验肝功能检测.ppt
技术5-肝功能检测技术,肝功能检测,目录Table of Contents,5.酶学检测,4.胆汁酸 代谢功能检测,3.胆红素代谢功能检测,2.蛋白质代谢功能检测,1.概述,一.解剖学特点,双重血液供应,腹主动脉的分技肝动脉,氧,门静脉,营养,双重输出管道,肝静脉,代谢降解物,下腔静脉,胆道系统,脂溶性物质及其代谢产物,体外,概述1-肝脏结构,二.肝脏的显微结构特点,1、组织结构,2、亚细胞结构,三.细胞的再生,概述1-肝脏结构,排泄功能 物质代谢功能生物转化,重要生化功能,概述2-肝脏的生物化学功能,A.排泄功能,主要排泄对象：胆汁酸、胆红素、氨,1.胆汁酸代谢,胆汁功能,胆汁的来源：,肝胆汁 胆囊胆汁 十二指肠,胆汁的成分：,水/胆汁酸（盐）、卵磷脂、蛋白质、脂肪酸和胆固醇,概述2-肝脏的生物化学功能,胆汁酸生成及种类：,初级胆汁酸（肝细胞）次级胆汁酸（肠道）,初级游离胆汁酸初级结合胆汁酸（甘氨酸/牛磺酸）次级游离胆汁酸次级结合胆汁酸（甘氨酸/牛磺酸）,概述2-肝脏的生物化学功能,胆汁酸肝肠循环：,胆汁酸的功能：,促进脂类消化促进脂类吸收抑制胆固醇从胆汁中析出沉淀,游离型胆汁酸,结合型胆汁酸,概述2-肝脏的生物化学功能,2.胆红素代谢,胆色素,尿胆素原 粪胆素原尿胆素粪胆素胆绿素胆红素,胆素原,概述2-肝脏的生物化学功能,3、血氨代谢,药物及体内含氮物质（如嘌呤、嘧啶等）,来源,去路,相对平衡,概述2-肝脏的生物化学功能,部位肝脏细胞,鸟氨酸,瓜氨酸,瓜氨酸,精氨酸代琥珀酸,ATP,AMP+PPi,延胡索酸,鸟氨酸,精氨酸,H2O,尿素,天门冬氨酸,NH3,CO2,氨甲酰磷酸,+H2O,尿素循环,概述2-肝脏的生物化学功能,B.物质代谢功能,1、营养物质代谢,(1)在蛋白质代谢中的作用(2)在氨基酸代谢中的作用(3)在糖代谢中的作用(4)在脂代谢中的作用,概述2-肝脏的生物化学功能,2、激素及维生素代谢(1)激素的灭活(2)多种维生素的储存与转化,C.肝脏的生物转化,定义：非营养物质，如物质代谢过程所产生的终产物、生物 活性物质（如激素），外界进入机体的各种异物（如药物及其它化学物质）、毒物或从肠道吸收的腐 败产物等在肝脏经代谢转变，使极性弱的脂溶性物质 变为极性强的水溶性物质，使易于经尿液或胆汁排出 体外，此过程称为肝脏的生物转化。转化对象：药物。毒物、致癌物转化过程：氧化、还原、水解、结合生理意义,概述2-肝脏的生物化学功能,D.肝脏疾病的生化改变,1.胆红素代谢障碍（黄疸）,定义:高胆红素血症？黄疸？,黄疸分类:,阻塞性黄疸,溶血性黄疸,肝细胞性黄疸,概述3-肝脏疾病的生物化学功能改变,概述3-肝脏疾病的生物化学功能改变,2.胆汁酸代谢障碍,胆汁酸合成障碍胆汁酸向肠道排出障碍胆汁酸肠肝循环紊乱胆汁瘀积病变时胆汁酸代谢紊乱,概述3-肝脏疾病的生物化学功能改变,3.血浆酶异常,肝脏合成酶类:胆碱脂酶、凝血因子、铜蓝蛋白；肝细胞内酶:ALT、AST 肝脏阻塞性疾病酶活性改变：ALP、GGT肝硬化疾病酶活性改变：单胺氧化酶（MAO）,4.血浆蛋白异常,概述3-肝脏疾病的生物化学功能改变,血清总蛋白、白蛋白测定 血清总蛋白(total protein TP)包括清蛋白（albumin A）（半衰期：1519）和球蛋白（globulinlb G）。清蛋白由肝脏合成；球蛋白主要由单核吞噬细胞系统(B淋巴细胞、浆细胞)合成和分泌。合成减少可出现腹水、出血倾向等。血清总蛋白和清蛋白检测是反映肝功能状态的重要指标参考值：T:60-80g/L A：40-55g/L,肝功能检测-蛋白质代谢功能检测,血清总蛋白检测原理（双缩脲法）：凡具有二个或二个以上肽腱单位的化合物，与碱性酒石酸钾钠铜盐作用，均能产生特异的紫色的铜一钾双缩脲化合物。双缩脲反应所呈紫色的强度与各种血清蛋白质分子量或氨基酸成分无关，紫色络合物的生成，引起在波长540-560nm范围内吸光度的上升，吸光度的变化与总蛋白含量成正比，且可用于自动化检测。,肝功能检测-蛋白质代谢功能检测,试剂与器材：标本：待检人血清 试剂：上海科华总蛋白（TP）测定试剂盒 器材:全自动生化分析仪，4冰箱、温育箱，移液头，离心机等,肝功能检测-蛋白质代谢功能检测,操作步骤：分析类型：终点法 波长：540-560nm 温度：37 孵育时间 10分钟 S：100ul R：5000ul注：R（双缩脲试剂）：酒石酸钾钠、硫酸铜、碘化钾、NaOH S(标准液)：白蛋白 50g/L,肝功能检测-蛋白质代谢功能检测,临床意义：TP含量升高见于各种原因失水，在其它情况下，高值通常反映一种或多种球蛋白组分的增加；总蛋白含量下降与白蛋白浓度下降有关。,肝功能检测-蛋白质代谢功能检测,血清白蛋白检测原理（溴甲酚绿法）：在PH4.2的缓冲液中，白蛋白分子带正电荷，与带负电荷的溴甲酚绿(BCG)生成蓝绿色复合物，在波长630nm有吸收峰。复合物的吸光度与白蛋白浓度成正比，与同样处理的白蛋白标准比较，可求得血清中白蛋白的浓度。白蛋白+溴甲酚绿（BCG）,肝功能检测-蛋白质代谢功能检测,PH4.2,Brij-35,白蛋白溴甲酚绿复合物,试剂与器材：标本：待检人血清 标准液：40g/L白蛋白标准液，也可用定值参考血清白蛋白标准，均需置冰箱保存 试剂：上海科华白蛋白（ALB）测定试剂盒 器材:全自动生化分析仪，4冰箱、温育箱，移液头，离心机等,肝功能检测-蛋白质代谢功能检测,操作步骤：分析类型：终点法 波长：630nm 温度：37 孵育时间 60秒 S：10ul R：2000ul注：样品与试剂量可按生化分析仪要求衡比例改变,肝功能检测-蛋白质代谢功能检测,临床意义：低水平ABL含量与肝脏疾病、肾病综合征、营养不良以及蛋白丢失有关，高水平白蛋白与失水有关。,肝功能检测-蛋白质代谢功能检测,血清总胆红素（TBIL）测定原理(重氮耦合法)：在没有加速剂存在时，血清与重氮试剂反应所生成的红色偶氮胆红素为直接胆红素。在同样的反应条件下，有加速剂存在时，血清与重氮试剂反应，所生成的红色重氮胆红素为总胆红素。胆红素 胆红素的减少引起在波长450nm处吸光度的下降，吸光度的变化与总胆红素含量成正比。,肝功能检测-胆红素代谢功能检测,钒酸盐,PH3.0表面活性剂,胆绿素,试剂与器材：标本：待检人血清 试剂：上海科华直接胆红素（DBIL）测定试剂盒 器材:全自动生化分析仪，4冰箱、温育箱，移液头，离心机等,肝功能检测-胆红素代谢功能检测,操作步骤：分析类型：终点法 波长：450nm（主）、546nm（副）温度：37 孵育时间 60秒 S：100ul R1：2800ul R2:700ul注：R1：枸橼酸盐缓冲液（PH2.9）、表面活性剂 R2：磷酸盐缓冲液（PH7.0）、偏钒酸盐,肝功能检测-胆红素代谢功能检测,孵育时间,5min,临床意义：DBIL含量的升高与胆管阻塞以及肝细胞疾病有关,肝功能检测-胆红素代谢功能检测,总胆汁酸（TBA）的测定原理（循环酶法）：胆汁酸+Thio-NAD 3-酮类固醇+Thio-NAD3-酮类固醇+NADH 胆汁酸+NAD血清中微量的胆汁酸在多次酶循环过程中被放大，同时可使生成的Thio-NADH扩增。在405nm处测定Thio-NADH吸光度变化值，即得血清中胆汁酸的含量。,肝功能检测-胆汁酸代谢功能检测,3-HSD,3-HSD,试剂与器材：标本：待检人血清 试剂：上海科华总胆汁酸（TBA）测定试剂盒 器材:全自动生化分析仪，4冰箱、温育箱，移液头，离心机等,肝功能检测-胆汁酸代谢功能检测,操作步骤：分析类型：两点速率法 温度：37 S（标准液）：胆汁酸50u mol/L S：4ul R2：90ul R1:270UL注：R1：Thio-NADN(-硫烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型),Goods缓冲液 R2：NADH，3-HSD(3-羟类固醇脱氢酶),Goods缓冲液，叠氮钠,肝功能检测-胆汁酸代谢功能检测,孵育时间,延迟时间,读数时间,5分钟,30-60秒,2-3分钟,波长：405nm（主）600nm（副）,临床意义：血清总胆汁酸的测定可为检测肝胆系统是否正常提供一个灵敏的指标。血清总胆汁酸升高见于急、慢性肝炎，肝硬化，原发性肝癌，胆汁郁积，酒精肝、中毒性肝胆疾病及一些胃肠疾病。,肝功能检测-胆汁酸代谢功能检测,天门冬氨酸氨基转移酶（AST）的测定原理（速率法):在AST速率法测定中，酶偶联反应式为：L-门冬氨酸+-酮戊二酸 草酰乙酸+L-谷氨酸 草酰乙酸+NADN+H+L-苹果酸+NAD+H2O NADH的减少，引起在波长340nm处吸光度的下降，下降速率与AST 活力成正比。,肝功能检测-酶代谢功能检测,AST,AST,试剂与器材：标本：待检人血清 试剂：上海科华天门冬氨酸氨基转移酶（AST）测定试剂盒 器材:全自动生化分析仪，4冰箱、温育箱，移液头，离心机等,肝功能检测-酶代谢功能检测,操作步骤：分析类型：速率法 波长：340nm 温度：37 理论K值：4180 毫摩尔消光系数：6.22（NADH，340nm）注：R1：NADH,LDH,MDH R2:L-门冬氨酸，-酮戊二酸,肝功能检测-酶代谢功能检测,预孵育时间,延迟时间,读数时间,5分钟,1分钟,1-2分钟,S：60ulR1:1000ul,R2:500ul,临床意义：AST（）活力升高与心肌梗死有关，疼痛4-6小时后明显升高，24-30小时后达到高峰。高水平酶活力也见于肝细胞损伤，肌营养不良以及皮肤炎。,肝功能检测-酶代谢功能检测,丙氨酸氨基转移酶（ALT）的测定原理（速率法):在AST速率法测定中，酶偶联反应式为：L-丙氨酸+-酮戊二酸 丙氨酸+L-谷氨酸 丙氨酸+NADN+H+L-乳酸+NAD+H2O NADH的减少，引起在波长340nm处吸光度的下降，下降速率与ALT 活力成正比。,肝功能检测-酶代谢功能检测,ALT,LDH,试剂与器材：标本：待检人血清 试剂：上海科华丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定试剂盒 器材:全自动生化分析仪，4冰箱、温育箱，移液头，离心机等,肝功能检测-酶代谢功能检测,操作步骤：分析类型：速率法 波长：340nm 温度：37 理论K值：4180 毫摩尔消光系数：6.22（NADH，340nm）注：R1：NADH,LDH R2:L-丙氨酸，-酮戊二酸,肝功能检测-酶代谢功能检测,预孵育时间,延迟时间,读数时间,5分钟,1分钟,1-2分钟,S：60ulR1:1000ul,R2:500ul,临床意义：ALT（）活力升高与肝炎及其它肝脏疾病有关。,肝功能检测-酶代谢功能检测,思考题,复习思考题：1.血清结合胆红素升高见于哪些疾病？2.简述肝脏疾病检查项目的选择原则。,问答-Q&A,Thanks！,
