实验八核仁组织者区(NOR)的银染显示法.ppt

核仁组织者区（NOR）的银染显示法,实验目的 实验原理 实验步骤 作业,返回大纲,实验目的,掌握核仁组织者区（NOR）的快速银染显示法，并了解NOR在细胞中分布情况。,实验原理,染色体上为5.8SrRNA、18SrRNA和28SrRNA编码的基因（rDNA）所在的部位，称为核仁组成区（NOR）。在间期细胞中，这一区域的染色质，参与形成核仁，由于核仁直至前期结束才完全消散，所以这一部分染色质常常来不及完全收缩，在中期染色体上，比其它染色质更疏松，因而被淡染，即表现为次缢痕结构。每个染色体组中，常有多个NOR。例如人的23对染色体中，有5对端部着丝点染色体短臂的次缢痕处为NOR。然而，并不是所有的NOR随时都出于转录之中。当NOR在间期转录时，产生一种与转录活动有关的酸性蛋白，此蛋白可保留至中期并能将染液中的银离子还原为金属银而显现为黑色。所以银染法可在中期染色体上显示具有转录活性的NOR数目，而且，染色的深黑程度，还可以反应出基因的活性高低。,实验方法,银染的具体方法有很多种，如Ag-AS法,Ag-I法等，我们在此采用快速银染法，具体操作如下：在染色体标本上滴加含1%甲酸的2%明胶水溶液3滴，再加50%硝酸银3滴，混合后盖上盖片，将标本置于60恒温台上，处理至液体为棕黄色为止，自来水冲洗，空气干燥，镜检。,实验结果,若染色适中，间期核及染色体为金黄色，油镜观察，可在某些染色体上看到成对的黑色小点，此即为银染NOR（Ag-NOR）。若整张片子色淡，间期核及染色体都不易看清，为染色时间不足，在未滴过香柏油的情况下，可重新续染。若染色时间偏长，则染色体为棕色，此时，仍可看到黑色的NOR，只是NOR与染色体间的反差较低。染色严重过度时，整张片子都布满黑色沉淀，这样的标本一般都丢弃不用。若标本珍贵，也可采用特殊方法褪色后重新染色。,作 业,在油镜下绘制一中期分裂相图，显示Ag-NOR的位置、数目和形态。,