毛细管电泳分析检测氨基酸.ppt
毛细管电泳分析检测 氨基酸,Your site here,1,Contents,2,概述,原理,展望,5,4,文献综述,3,影响因素,Your site here,一 概述,毛细管电泳,又称高效毛细管电泳,是近年发展起来的一种新型分析分离技术,它综合了高效液相色谱和凝胶电泳共同优点,具有快速、分辩率高、重复性好的特点,已广泛用于氨基酸、多肤、蛋白质、核酸等物质的分析。对电中性物质,经过特殊处理也可进行分析。,Your site here,一 概述,Your site here,二 原理,毛细管电泳统指以高压电场为驱动力，以毛细管为分离通道，依据试样中各组分间淌度(指单位场强下离子的平均电泳速度)和分配行为上的差异而实现分离的一类分离技术。,Your site here,二 原理,在电解质溶液中，带电粒子在电场作用下，以不同的速度向其所带电荷相反方向迁移的现象叫电泳。而此时双电层中的溶剂化阳离子引起流体整体向负极方向移动的现象叫电渗。粒子在电解质中的迁移速度等于电泳流和电渗流两种速度的矢量和。阳离子的移动方向和电渗流一致，最先流出；中性粒子的电泳流速度为零，其迁移速度等于电渗流速度；阴离子的移动方向与电渗流相反，但因电渗流速度一般都大于电泳速度，它将在中性粒子之后流出，从而实现分离。,Your site here,三 影响因素,毛细管柱：毛细管柱是的核心部件,目前毛细管柱直径稳定在25-75m之间,以利于最大的降热和对吸附的控制。其材料可为聚四氟乙烯、玻璃和弹性石英,最常用的为石英。玻璃和石英的硅醇基是构成吸附及产生电渗流的主要原因。因此通常加载偶联剂（-环糊精）与硅醇基进行某种化学反应来屏蔽管壁吸附活性而达到改性性。电压：较低时,峰展宽较严重,电压太高时基线噪音变大。温度：电流通过毛细管产生的热将引起温度变化,使各项物理参数改变,造成样品迁移时间、峰面积的偏差和分离效率下降。,Your site here,三 影响因素,添加剂：通过可逆或不可逆吸附,添加剂可影响毛细管管壁上的电荷数量及其分布,还可能改变电荷的性质,因此能用于控制电渗。进样时间：进样时间较短时,峰电流响应太小,其进样量的精度也随之减小,峰高的重现性得不到保证；进样时间较长时,峰电流会加大,但会使样品区带加宽,从而不能正确反映样品的真实浓度,同时峰形展宽。,Your site here,三 影响因素,电泳缓冲液：pH通过影响分离组分的荷电性质而影响其在电场中的有效迁移速度。因此缓冲液的pH及浓度对分离度的影响十分突出,必须对它们进行选择并优化。一般地,缓冲液必须比被分析物质的等电点高或低一个pH单位,而且尽可能采用酸性缓冲液。为保持pH在相当长时间稳定 一般选择在所控pH附近具有较大缓冲容量的缓冲溶液。通常缓冲液的缓冲容量随浓度增加而增大,但浓度增加溶质在毛细管内迁移速度下降,迁移时间延长。同时,考虑到焦耳热的限制,故不能选用较高浓度的缓冲液。,Your site here,三 影响因素,王跃国等用毛细管电泳法对20种常见氨基酸的2,4-二硝基氟苯(DNFB)衍生物进行了分离研究,分析缓冲液浓度、pH值、有机溶剂及表面活性剂对分离的影响。以浓度为30 mmol/L、pH值9.9的硼砂溶液含15%异丙醇为运行缓冲液,分离氨基酸DNFB衍生物效果最佳,分离时间30 min,17种氨基酸除亮氨酸、异亮氨酸外均达到基线分离。朱英等利用自制的毛细管电泳系统,以弹性石英毛细管为研究对象,从实验上考察了缓冲液的pH 值、浓度、种类、添加剂、涂层、毛细管壁洗涤方法、分离管管径等多种因素对径向电场控制电渗能力的影响。,Your site here,四 文献综述,明永飞等利用毛细管区带电泳法对衍生氨基酸进行分离,考察了毛细管区带电泳法进行氨基酸分离的关键条件,确定了最佳分离条件,实现了12种氨基酸的快速基线分离。范海峰等采用30mmol/L硼砂-2.0mmol/L磷酸氢二钾作为缓冲溶液,体积分数为3%的无水甲醇作为有机改性剂,0.5mmo/L十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)为电渗流改性剂,pH为9.5时,4min内半胱氨酸、甘氨酸、谷氨酸、天冬酰胺和天冬氨酸等5种未经衍生的氨基酸均获得了基线分离。,Your site here,四 文献综述,刘文锋等利用自己研制的毛细管电泳电导检测装置,在不用衍生的情况下,对水解毛发得到的所有氨基酸进行快速,简便的定量测定。孔红星等利用高效毛细管区带电泳直接紫外检测法对8种非衍生化氨基酸进行了分离分析条件的研究。在分离电压20kv，在浓度为50mmol/L,pH10的硼砂缓冲溶液中加入o.5mmol/L 的十六烷基三甲基溴化铵作为电渗流改性剂，4min 内实现了8种氨基酸有效分离。,Your site here,五 展望,毛细管电泳由于其自身高效、高速、高灵敏度、高自动化以及样品和试剂耗用量少等特点,为现代生物医药学提供了强有力的分离分析手段,已经在手性药物、药物制剂、中草药等方面的应用中得到了蓬勃的发展。毛细管电泳是一门发展中的分析化学前沿学科,虽然毛细管电泳的纳升级进样使得在定量的再现性上需要改进,制备电泳尚未形成规模,但我们相信凭借其高效、灵敏、快速、设备简单、广泛适用性等特点,必然会有更为广泛的应用前景。,Thank you!,
