荧光定量PCR技术.ppt

SYBR Green I 工作原理,未结合的SYBR green I,结合解离曲线识别不同的PCR产物,95 15sec;60 20sec;95 15sec在60 95 之间的Ramp time设为19:59,SYBR Green I的特点,可以用于不同的模板使用方便，价格相对便宜灵敏度很高与非特异性产物结合解离曲线选择良好的引物和探针并优化反应条件,TaqMan Probes,TaqMan Probes工作原理,随着扩增循环数的增加，TaqMan探针释放出来的荧光基团不断积累。因此荧光强度与扩增产物的数量呈正比关系TaqMan探针应用基因检测、病毒定量、细胞因子基因定量、癌细胞基因微突变检测等其结果都具有高特异性与高敏感性但只适合于一个特定的目标,TaqMan MGB探针,因此，MGB探针可以比普通TaqMan探针设计得更短，既降低了合成成本，也使得探针设计的成功率大为提高。TaqMan MGB探针对于富含A/T的模板可以区分得更为理想。,分 子 信 标(发夹型杂交探针),分 子 信 标 工 作 原 理,荧光基团,分子信标能特异性地检测感兴趣的目标DNA 分子信标可用于单核苷酸多态性的检测 特别适用于检测点突变只能用于一个特定的目标设计困难价格较高,常 用 的 热 循 环 仪,ABI Prism 7700,可以在同一反应体系中同时对多个靶基因分子进行扩增一次可以测定96个样本，并且速度较快，一批样本的完成只需要23小时用于水解探针、双链DNA结合染料、分子信标的分析但是它不能实时对扩增结果进行分析，而只能在全部扩增结束后才进行数据分析,