细胞的换液与传代培养1.ppt

细胞的换液与传代培养,细胞系cell line：原代培养物经首次传代后即成。有限细胞系finite cell line:不能继续传代或传代数有限。连续细胞系continuous cell line：可连续传代的细胞系，即已建成的细胞系。细胞株cell strain：通过选择法和克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质和标志的培养物。,有关概念,一、传代培养（passage）,无论是否稀释，将细胞从一个培养瓶转移或移植到另一个培养瓶，也称再培养（subculture）,二、单层培养细胞的一般传代步骤:,倒出旧液,PBS洗涤,胰蛋白酶消化,倾出消化液,加入培养液,吹散细胞,计数,稀释,培养,1.pH值下降（红变黄色）；2.细胞浓度；3.细胞类型；4.细胞形态学；细胞核四周充满颗粒，细胞质呈空泡化，细胞变圆，或出现细胞与底物脱离时。,动物细胞传代培养,三、原代培养物需要换液和传代(subculture)的指标,四、细胞传代方法,动物细胞传代培养,1悬浮生长细胞传代直接传代法：静置数分钟，悬浮细胞沉淀在瓶壁时，将上清培养液去除l2一23，然后加入等量的新鲜培养基用吸管直接吹打形成细胞悬液再传代。离心法传代：离心（1000转/分）去上清，沉淀物加新培养液后再混匀传代。原代细胞传代按1：2接种，细胞系传代按1：3-4接种。,动物细胞传代培养,2半悬浮生长细胞传代（Hela细胞）此类细胞部分呈现贴壁生长现象，但贴壁不牢，可用直接吹打法使细胞从瓶壁脱落下来，进行传代。3贴壁生长细胞传代 采用酶消化法传代。常用的消化液有0.1-0.25的胰蛋白酶液。,五、消化法传代培养的步骤,动物细胞传代培养,看细胞传代小视频,排序并挑出毛病,