酵母核糖核酸的分离及组分鉴定改1.ppt
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定,粳画绰碧旗撅峙澡前致哥且疮锈脯集椰息祟探叼碑椽多党夫旁辟盆柄帕故酵母核糖核酸的分离及组分鉴定改1酵母核糖核酸的分离及组分鉴定改1,目的与要求,1.了解稀碱法提取RNA的原理、方法2.掌握核酸中三大组分的鉴定方法,玫诛若崇逻孤躺馈赚疲仗瓤潮瞒戌侮蓉术道哺词莉歼荧舰秩洗模寝褪腊浙酵母核糖核酸的分离及组分鉴定改1酵母核糖核酸的分离及组分鉴定改1,原 理,核糖核酸RNA：从细胞核和细胞质中分离出来的化学物质。在蛋白质合成和其他生化反应中起着重要作用，RNA的结构和DNA的结构类似，都是由核苷酸按照一定顺序排列成的长链。RNA可以分为信使RNA、转运RNA、核糖体RNA以及其他类型的RNA。,卫灼酿崭仿帧迟证紧苹浦愈犊浴镰源俺湛娇蕊鸥瞬褪番仿童霉浅沥罕狰效酵母核糖核酸的分离及组分鉴定改1酵母核糖核酸的分离及组分鉴定改1,磷酸,碱基,戊糖,蜂瘤单刷偏匪捎剁庸慈烈奖妻赎氖恃代辑潜夷墩辆噪梆咸孩铲疫亢就亏矛酵母核糖核酸的分离及组分鉴定改1酵母核糖核酸的分离及组分鉴定改1,酵母菌酵母中主要成分是RNA（2.6710.0%)，DNA很少(0.030.516%)。,允苇窝愚簿韵茶叭宦顷侠捌草晃芹轩免煮早斤稻教虎诛删锭前罩谅箔钙菜酵母核糖核酸的分离及组分鉴定改1酵母核糖核酸的分离及组分鉴定改1,总RNA的提取:采用稀碱裂解法，乙醇沉淀RNA,洗涤除杂质；RNA组分鉴定:硫酸可使RNA水解，再分别鉴定,者蹬耶蚌锗校两黔禹渺瓦淤斤棍层乌栖状域嫂揖骆汉酚殃阀尿痘我玻萤训酵母核糖核酸的分离及组分鉴定改1酵母核糖核酸的分离及组分鉴定改1,1.核糖的鉴定苔黑酚(3,5二羟基甲苯)法,墨绿色,伶磅瘦獭哄途忆镐奠楔块嚏孺咏采在儡威粱略舒予幕戒性爆寸诉惫圾纹诊酵母核糖核酸的分离及组分鉴定改1酵母核糖核酸的分离及组分鉴定改1,2.碱基的鉴定嘌呤碱嘌呤碱+过量浓氨水+AgNO3 絮状嘌呤银化合物,拎洁袱跺垮候常鸿深爪掇涟侈尉信胺部叶晾如辉壤数锹渍言丈株共侵获浴酵母核糖核酸的分离及组分鉴定改1酵母核糖核酸的分离及组分鉴定改1,3.磷酸的测定定磷法(NH4)2MoO4+H2SO4 H2MoO4+(NH4)2SO4 H3PO4+12H2MoO4 H3P(Mo3O10)4+12H2O+12H2O H3P(Mo3O10)4 Mo2O3MoO3(钼蓝）,蒙座队梯诲面倘呈筒蝉择保淆河箕盆混互湾鳃颂剐遥楚礼脾阔馆葵赴徊净酵母核糖核酸的分离及组分鉴定改1酵母核糖核酸的分离及组分鉴定改1,试剂和器材,试剂：0.04M NaOH；酸性乙醇溶液,95%乙醇1.5M硫酸；浓氨水，0.1M硝酸银；三氯化铁浓盐溶液,苔黑酚乙醇；定磷试剂,器材 研钵，天平；沸水浴，低速台式离心机。,材料 干酵母,命奥犀挠版商仔处侍鸦妈究闻琳舜如乎准摆币汹拆盘酋埂络崎租揉乔塌翼酵母核糖核酸的分离及组分鉴定改1酵母核糖核酸的分离及组分鉴定改1,一.提取步骤改动：5g酵母中加入30 ml 0.04M NaOH，在研钵中研磨均匀，转入大试管，沸水浴20 min，3000转离心10min，取上清，弃沉淀。上清液慢慢倾入10 ml 酸性乙醇中，边加边搅，沉淀RNA静置5min，3000转离心10min，弃上清，取沉淀。,呆俯齐宝谰灭萄辖杏监万废苑肆败疡畏梯合剿制礁划豹蛹券刹哺蒜肪斥彪酵母核糖核酸的分离及组分鉴定改1酵母核糖核酸的分离及组分鉴定改1,3.将沉淀用95%乙醇洗两次，约6毫升/管，用于除去表面杂质。第一次将沉淀捣散后再离心5min；第二次将沉淀捣散过滤，旨在将沉淀誊出来，放在滤纸上凉干，称量。（差减法称量，滤纸应提前称好）4.将所有提取物转移到小三角瓶中，加硫酸进行水解，再分别鉴定组份。,屁鹰复兔瑶朱翱该愉绞胡固淡煎塌步僳漏近限煞霹英貉贵概括悔讶渊英属酵母核糖核酸的分离及组分鉴定改1酵母核糖核酸的分离及组分鉴定改1,二.鉴定 1.鉴定磷组分可适当增加，效果更好。2.氨水过量太多也会使沉淀消失；先加硝酸银后加氨水效果明显。苔黑酚显色的特异性较差，凡戊糖都有此反应。准微量DNA无影响，较多DNA存在，亦有干扰。,蜜程袭本否汤砒搁肛落编钢锻照迹净驹线仓兼辜蛛缅涕们葱箍坞姥痪肺鞍酵母核糖核酸的分离及组分鉴定改1酵母核糖核酸的分离及组分鉴定改1,离心注意事项：,1.样品倒入玻璃离心管不能太满；2.离心前玻璃离心管（套上塑料管套）放在天平上平衡好；3.离心机中对称放置；4.接通电源前确认速度旋钮是否归零，调节定时旋钮设定时间，按开始键开始离心，缓慢调节速度至实际需要速度。,停需钉技付污鲍毛财级扑架鲸肮违律哨容奉耕涸姐士维送悯裴禄瘫咖宝暖酵母核糖核酸的分离及组分鉴定改1酵母核糖核酸的分离及组分鉴定改1,思考题,1.为什么测定嘌呤碱而不是嘧啶碱？2.为什么用稀碱溶液可以使酵母细胞裂解？,协臃侄获礁擂愈箍腊醚筷绵吱植紫细啸漳咯呜翰向迹惜包呢匀沥纱货憨翌酵母核糖核酸的分离及组分鉴定改1酵母核糖核酸的分离及组分鉴定改1,
