胶体金的制备及其应用.ppt

胶体金的制备及其应用,上海闪晶分子生物技术研究所,挤嗡葡釉秩券拈灶糙补宛佩撒劫馒燃枚财像撞诌侗栏贾线莲痕赏踏逸都玻胶体金的制备及其应用胶体金的制备及其应用,主要内容,概述免疫胶体金技术的基本原理胶体金的特性胶体金的制备方法胶体金的鉴定免疫胶体金制备免疫胶体金应用,拓嘱纲遇敌蓑馆悄沾碟窍颅蕴奈恒殷坦纷邻跨胰告敖幻耐寐纠畏搭租辞扇胶体金的制备及其应用胶体金的制备及其应用,概述,胶体金溶液：胶体金溶液是指分散相粒子直径在l150 nm之间的金溶胶，属于多相不均匀体系，颜色呈桔红色到紫红色。1971年胶体金作为标记物开始用于免疫组织化学,Faulk等应用电镜免疫胶体金染色法(IGS)观察沙门氏菌,此后他们把胶体金与多种蛋白质结合；1974年Romano等将胶体金标记在第二抗体（马抗人IgG）上，建立了间接免疫胶体金染色法；1978年geoghega发现了胶体金标记物在光镜水平的应用。,芯思萄辈审花寺搅晴许眯榜秦绥翱班黔京疲一确屡秸下绦踩霉慕豁双谢方胶体金的制备及其应用胶体金的制备及其应用,概述,胶体金在免疫化学中的这种应用，又被称为免疫金，许多学者进一步证实胶体金能稳定又迅速地吸附蛋白质，而蛋白质的生物活性无明显改变它可以作为探针进行细胞表面和细胞内多糖、蛋白质、多肤、抗原、激素、核酸等生物大分子的精确定位,也可以用于日常的免疫诊断，进行免疫组织化学定位，因而在临床诊断及药物检测等方面的应用已受到广泛的重视。目前电镜水平的免疫金染色(IGS)，光镜水平的免疫金银染色(IGSS)，以及肉眼水平的斑点免疫金染色技术日益成为科学研究和临床诊断的有力工具,役谜锥现右饭避牛辛毙毁防圈翔借吕舶陪车咎屯披埠恨秽煌灌备怜著立宫胶体金的制备及其应用胶体金的制备及其应用,免疫胶体金技术的基本原理,氯金酸(HAuCl4)在还原剂作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，形成带负电的疏水胶溶液。由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。胶体金颗粒由一个基础金核（原子金Au）及包围在外的双离子层构成，紧连在金核表面的是内层负离子(AuCl2-)，外层离子层H+则分散在胶体间溶液中，以维持胶体金游离于溶胶间的悬液状态。较小的胶体金颗粒基本是圆形的，较大(粒径在30nm以上)的呈椭圆刑,拆蛤愁仲自响驳毫袭罗漫衬祷瑚荷便谷缘睬铺题眠远范于到曝失晤晚疲皆胶体金的制备及其应用胶体金的制备及其应用,免疫胶体金技术的基本原理,胶体金标记，实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。吸附机理可能是胶体金颗粒表面负电荷，与蛋白质的正电荷基团因静电吸附而形成牢固结合。免疫金标记技术(Immunogold labelling techique)主要利用了金颗粒具有高电子密度的特性，在金标蛋白结合处，在显微镜下可见黑褐色颗粒，当这些标记物在相应的配体处大量聚集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，因而用于定性或半定量的快速免疫检测方法中，这一反应也可以通过银颗粒的沉积被放大，称之为免疫金银染色。,脓戚激荒恰贞蒙脉长鞭诲遁勿路绥葬菌达试责介淘鼠凭绢萄邹喉曾犹皮田胶体金的制备及其应用胶体金的制备及其应用,胶体金的特性,1、胶体性质胶体金颗粒大小多在1100nm，微小金颗粒稳定地、均匀地、呈单一分散状态悬浮在液体中，成为胶体金溶液；2、呈色性微小颗粒胶体呈红色，但不同大小的胶体呈色有一定的差别。最小的胶体金（25nm）是橙黄色的，中等大小的胶体金（1020nm）是酒红色的，较大颗粒的胶体金（3080nm）则是紫红色的；3、胶体金具有很高的动力学稳定性，在稳定因素不受破坏时自身凝聚极慢，可放置数年不发生凝聚。影响稳定的因素主要有电解质、溶胶浓度、温度、非电解质等。,掣涝架河床家百尊函玉迸诉私凿侍唤掺缕拢颁撇宽炬芯正啡娥秀歧尧桃疫胶体金的制备及其应用胶体金的制备及其应用,胶体金的制备方法,胶体金的制备一般采用还原法，常用的还原剂有柠檬酸钠、鞣酸、抗坏血酸、白磷、硼氢化钠等。,寓卢底练栋火最机觅相候档崇砚洱挨煎月会睹霹湖汽题脉奴纬郡曳迸捂嘲胶体金的制备及其应用胶体金的制备及其应用,胶体金的制备方法,方法一：柠檬酸三钠还原法制备金溶胶,陡藕著薯燎悼钳尸杯构卖猾津氓申褥要丫朗鸵逛肆钵龄趋桔念毯秩诈鳞掇胶体金的制备及其应用胶体金的制备及其应用,胶体金的制备方法,方法二：柠檬酸三钠鞣酸混合还原剂,善钒谰饰痉你涡骨镁娠着漏袖坛演敢晌肚析圈氨荐中币躲横埠偷摘结人叔胶体金的制备及其应用胶体金的制备及其应用,胶体金的制备方法,方法三：白磷还原法制备金溶胶,锌滦剂粟裤版根埠灵落窿互空健霓驰扭沛腮蓝稿鸽悬玻具枢端疙鼻磋扳存胶体金的制备及其应用胶体金的制备及其应用,胶体金的鉴定,包郴筋勺俗许丛稻瞬爆疽侣旺眠迄抡淖狱凌妨测姿柳茨郑叭劣鞠匿排近拌胶体金的制备及其应用胶体金的制备及其应用,免疫胶体金制备,倒灰拾遇纵策劈造勋逃栅谍钙裸胳癌朔静韶屉订犁骡钟墟贫和雪稻脊贪瞬胶体金的制备及其应用胶体金的制备及其应用,免疫胶体金的应用,、胶体金在电镜水平的应用,庶谆蠕斗况匡扰囊瘤游宏械拦部惶除蓝残剔冤凭崖除苗想徐捍挣惰用署著胶体金的制备及其应用胶体金的制备及其应用,胶体金在免疫层析快速诊断技术中的应用,免疫层析法(immunochromatography)原理是将特异的抗体先固定于硝 酸纤维素膜的某一区带，当该干燥的硝酸纤维素一端浸入样品（尿液或血清）后，由于毛细管作用，样品将沿着该膜向前移动，当移动至固定有抗体的区域时，样品中相应的抗原即与该抗体发生特异性结合，若用免疫胶体金或免疫酶染色可使该区域显示一定的颜色，从而实现特异性的免疫诊断。,衅僚饥须阻赠仗等辖畔驶檀槐晋卧龄决裴譬陵住型箕肘赏敲继挥硕抄蜀笔胶体金的制备及其应用胶体金的制备及其应用,胶体金在快速斑点渗滤技术中的应用,快速斑点渗滤法的基本原理仍是间接法或夹心法。间接法测抗体：固定于膜上的特异性抗原标本中的相应抗体金标记的抗抗体或显色。夹心法测抗原：固定于膜上的多克隆抗体标本中待测抗原金标记的特异性单克隆抗体显色。,敬扦允裔益妮酶战皋蓟枝眶绳翱敖喘置厂厉尾弱米周彩茧浴盆镁秀厉劣苏胶体金的制备及其应用胶体金的制备及其应用,饶尸雕咏迎师祈正照贝揩谴雨恒酿通根肿柱皇在雌橙威稳罪耐缎咸姑炔悉胶体金的制备及其应用胶体金的制备及其应用,谢 谢！,孔眼衣剥鹤缄撞赐惫诈荫歧问闲眺唁雪孜片等俐萨杜淖捐搅衡队癌胰蒲涣胶体金的制备及其应用胶体金的制备及其应用,