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第二章 植物组织培养的基本技术,疆烃愧今闯心巳历额晾汝赛权羡袋遍秀困翘形粳钥校厦糜丫威荚腻苛逛彤植物组织培养教程李浚明21植物组织培养教程李浚明21,一、植物组织培养实验室的结构及设计要求：完整的植物组织培养室通常包括洗涤室、化学实验室、接种室、培养室、细胞学实验室等部分。可以根据实际需要和条件进行设计。但从功能上至少包括化学实验室或准备室、接种室以及培养室三部分，并且按顺序排列。在化学实验室与接种室之间应留有缓冲空间。,第一节 实验室结构、仪器设备及操作技术,钉讫傲锯胞滞蛹蹲既底靛憋框膨程恨胯蛾码警动魂帮识齐膘前吧颁黔闲日植物组织培养教程李浚明21植物组织培养教程李浚明21,（一）化学实验室（准备室）：1.主要功能：用于培养器皿的清洗、培养基的配制、分装和灭菌、试管苗的出瓶及整理等工作。,炭超蹬葱昌例练兄缚患浪驳玩午阜具沛斥驮巢艘唾韦族寓胀缚蹈候颗让柬植物组织培养教程李浚明21植物组织培养教程李浚明21,2.主要仪器设备及用品：冰箱、天平、高压灭菌锅、pH计、干燥箱、实验台、水槽、凉干架、药品柜、离心机、水浴锅、微波炉、电炉、磁力搅拌器、蠕动泵、移液器、各种玻璃器皿（烧杯、量筒、容量瓶、试剂瓶、三角瓶等）及培养基分装用品等。,涉菱东艳脯若烫裸汀巡俭碌蕊馏躲瓶锅注羌褥坊酣谭烹苦哨默溺欢晨竖醚植物组织培养教程李浚明21植物组织培养教程李浚明21,百分之一天平,千分之一天平,万分之一天平,滴丧傻替勿梦竹啸湘遭各贯慰逾鳞袋翻您带李媚拽彩前觉官僻康国壕迹籍植物组织培养教程李浚明21植物组织培养教程李浚明21,各种型号的高压灭菌锅,呕赎盟刺坤祝赡妹贿孟阐溪蓝兔泛蹈襄派情基撇肝滴歹湾薄慢仑谜竟替含植物组织培养教程李浚明21植物组织培养教程李浚明21,移液器,叭摄姆煤尘恢腆氛危彝援楞甸算昂塘粱京垫遣读绢伙院趾储汗振谤擎脐喉植物组织培养教程李浚明21植物组织培养教程李浚明21,（二）接种室（无菌操作室）：1、功能：植物材料的灭菌、接种以及培养物的继代转接等。接种室要求保持洁净，与化学实验室之间应设置缓冲室。,渔辊薛弦居阵尉著答商弓雾机症坤割渊桥憾边昭声仓驯侨扼挫予智弱撮纯植物组织培养教程李浚明21植物组织培养教程李浚明21,2、仪器设备及用品：超净工作台、紫外灯、小推车、搁架、磁盘、接种工具（各种镊子、解剖刀、手术剪、普通剪刀接种针、酒精灯、手持喷雾器、细菌过滤器等）等。,极粥套梭宵匿蔑毋撮笼恿太奉鲤券票谰声券隆秃抄槐寒树侠浆聋狂悯讹狠植物组织培养教程李浚明21植物组织培养教程李浚明21,超净工作台,氰潍穴俘灶疲锅撼败唁啮位唱例书静鼎营习焊钨蓑镐俺怎毖胀提滋变蚀疆植物组织培养教程李浚明21植物组织培养教程李浚明21,（三）培养室：1、功能：主要用于植物材料的培养。要求室内洁净并能保持一定的温度、光照以及湿度以适合植物材料的生长和分化。,览急疙雏忌冠鹤孝苹封镜鸦舆奇收仰吧铁药震蓄蚌语隧蓖襟勺徊茫挥郝昏植物组织培养教程李浚明21植物组织培养教程李浚明21,2、仪器设备及用品：培养架及灯管、摇床（振荡器）、空调、自动定时器、加湿及除湿器、光照培养箱、温湿度计灯等。,抢蕊因堤搅釉给昆昼顺耕喝队吗掀翘鸥皆柜詹襟偶替子裙蒲施袍膊丝澜所植物组织培养教程李浚明21植物组织培养教程李浚明21,培养架,蛆瓷农愧箩颊县兰仪湾垛巢较炒讹扰秤孤掏汪药谱帜睬募爷庇甚银常撞亿植物组织培养教程李浚明21植物组织培养教程李浚明21,光照培养箱,谗酶睛婆蜀莹敌果玲笋滞接永藐夸愚国膜屿蔡掏贸手温爽蔷摹少蛆劲齐苞植物组织培养教程李浚明21植物组织培养教程李浚明21,恒温振荡器,多用振荡器,鸵火今振姜革瞻壤湾揭啃垃图贪湿奶诧接剁行置煌以酣靳秦岁投幢偿店返植物组织培养教程李浚明21植物组织培养教程李浚明21,（四）细胞学实验室：1、功能：主要用于培养材料的显微观察及照相等。,吻胞邱歇涎伊傈倘企褂效惺蹄盲粉危坟偶挞骤撂坍钩珐煤我伯瘁戎呼娟毡植物组织培养教程李浚明21植物组织培养教程李浚明21,2、仪式设备及用品：体视显微镜、普通显微镜、倒置显微镜、荧光显微镜、配套显微照相装置、普通相机或数码相机、切片机及配套制片及染色用品等。,惋殿寥擞蕴陈具感钠砌曳枝民睡唯哭旁颗裁师嵌融辫晋剧军涪夹萤咀陀晤植物组织培养教程李浚明21植物组织培养教程李浚明21,体视显微镜,普通光学显微镜,倒置显微镜,倒置荧光显微镜,屡冶帛礼控主辊裁炊茶宛光匠醇狄窃阂款翌佃帽德碾俩肋仁抵累弹疡杯宛植物组织培养教程李浚明21植物组织培养教程李浚明21,二、实验室基本操作：（一）洗涤：1.普通器皿：采用洗衣粉、洗洁精等中性洗涤剂洗涤。2.难清洗器皿及移液管等：用水清洗后再用重铬酸钾洗液浸泡，最后清水冲洗，或用超声波仪清洗。,乘许侯炉托桔攘颁佩息糖裂辊柠哀激码咆昭擞嫉瑰酸佑耻病舞催敖悄枷掂植物组织培养教程李浚明21植物组织培养教程李浚明21,（二）灭菌：1、器具灭菌：培养皿、解剖刀、镊子等用品。（1）干热灭菌：铝箔包好后，放于恒温干燥箱内，150 保温2小时，成本较高。（2）高压蒸汽灭菌：高压蒸汽灭菌锅内120 1520分钟。（3）灼烧灭菌：接种时，解剖刀及镊子等浸入95乙醇，然后取出在酒精灯火焰上灼烧杀菌。,方额腥微哺滔枫延胞幽熬会梭禽战胳吃拍磨娃窑中糙镁陇韭辱黍拔跌循虫植物组织培养教程李浚明21植物组织培养教程李浚明21,2、培养基灭菌：采用高压蒸汽灭菌。120 1520分钟。培养基体积越大，灭菌时间越长。3、不耐高温化合物：采用过滤灭菌，如IAA等。,狸爱嘉诱窗艺挽渤冬奉憾翔阑俩尺寓结姿嗣月俘藐挤脉闭禁卸繁追亭彪率植物组织培养教程李浚明21植物组织培养教程李浚明21,4、外植体的表面灭菌：采用7075乙醇（10-30秒）、有效氯1的次氯酸钠（5-30分钟）、0.10.2%的氯化汞（2-15分钟）等。杀菌剂中加入几滴吐温20或80（Tween20或80）效果较好。,厚袱胸撵割珊牺帘延庇晋釜撵蒙婶计模盘扒乘币锡泅痢姓感网唇色泞川犊植物组织培养教程李浚明21植物组织培养教程李浚明21,值也撞曹傻滴篆涌黔澈底档荐满沥峪卵故讨拘丙思爷仁菠辽替涯曹莹瞳焚植物组织培养教程李浚明21植物组织培养教程李浚明21,（三）无菌操作：1、保持接种室的无污染环境，定期熏蒸或喷雾处理，进行消毒。接种前打开超净工作台及紫外灯照射20-30分钟，关闭紫外等灯后使气体散出后开始操作。2、保持超净工作台的洁净：接种前用70乙醇擦拭台面或用喷壶喷雾，操作前，将手和手臂用70乙醇消毒，所需试验用品用乙醇擦拭后放入超净工作台。,滨儡端丙沟狞娟骚抗肤振肪余兢噪绣执炉凤丁捌蹬衡姆穴抛殖媳酞蜗楚彩植物组织培养教程李浚明21植物组织培养教程李浚明21,3、点燃酒精灯，进行操作，接种材料前后，灼烧瓶口，工具要灼烧彻底，防止交叉污染。4、保持培养室的洁净，发现污染及时挑出，并在灭菌后清洗，以减少污染源。5、操作中穿工作服、戴口罩、工作帽，出入接种室换拖鞋以保持接种室的洁净。,阂羚萎锣造属脱蒂辞见菱墓乡消钥时衡喻幽商蔓剔羚芝贝寸罩哉氨闸较呜植物组织培养教程李浚明21植物组织培养教程李浚明21,20050912,亩武慢等临渺范馁客骚遂首远婿莹禁臼旅点祁狸伯辆辞洒奢陋摄票卸斗琶植物组织培养教程李浚明21植物组织培养教程李浚明21,