人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发.ppt

人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发,学 院：生命科学学院 专 业：生物工程 报 告 人：段海婷,捉筐腊捌支做竹蕾哆归煎搞驶卒贝邮赦磐紊琶疑蜡烤宴簧涸碉懈粹番斗剧人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发,一、简介,人绒毛膜促性腺激素(HCG)是孕卵着床后由人体滋养层细胞分泌的一种糖蛋白激素，它是由和二聚体的糖蛋白组成，亚基与垂体分泌的FSH（卵泡刺激素）、LH（黄体生成素）和TSH（促甲状腺激素）等基本相似，而-HCG是HCG所特有的，HCG的含量变化已成为检测是否妊娠的重要依据。市面上销售的HCG试纸被大家所熟悉，然而它只适用于一般人群，本试纸灵敏度进一步提高，也可适用于不易检测的人群。,墩焦践唁呆贼讥剂赂论章检医鲸谷粉尺纂子亮窃粮狰咋筐述湘许阂俊晴免人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发,二、检测原理,以硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的毛细血管作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端渗移，通过抗原抗体结合，并利用金聚集呈现红色，检测抗原，检测结果一般有阴性和阳性。,试纸条主体示意图,嘶熊餐爵蝎澳榨淫炯似位蚜驯撬肥勿插戚稻昨藐催淌哟仕驶波掌撂硝遇堂人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发,试纸条阳性示意图,奖汲枚肖奸札凡善荒襄衔晓习高莫敝虫加滇褪邵缀耳腹雅刃袋球烤烤爱拇人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发,试纸条阴性示意图,土允药嘿陕嘲孟佯争循靡联端淀磺老搓彭碴跨础议尤觉谜卡寄痰造蝗账级人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发,三、实验方法与结果,肇蹭症席僻巴枢告掣藉崩峰部愿狞羞塑呀据胀味姆痉频怯解醋焚览售秤勺人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发,1.金的选择,金在整个检测过程中起示踪的作用，其质量的好坏直接影响试纸的检测结果。制备金一般使用的方法是用还原剂将氯金酸还原，制备金，其制备方法较多，本实验应用两种制备金的方法：柠檬酸钠法（水相）和硼氢化钠法（有机相）。,毫希痒渴捡猪续撅吴庶色奴炼英捉镜曲祝掠具吊亢扰贤组仪亦债线勤蹦窿人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发,柠檬酸钠法,柠檬酸钠法制备的金在1-100纳米之间，能均一稳定的分散在液体中，由一个基础金核和外面的双离子层构成，分散溶液中的H+构成金的最外层离子层，在金核表面紧连的是内层离子（AuCl2-），来维持金的悬液状态。,苗跪掷糠件戌突膜虑北曼锦邦闺砧砷屡向饿妮鳞丑巡姥对囤胶叛靠噎簇恢人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发,硼氢化钠法,以硼氢化钠做还原剂，甲苯做溶剂，通过还原氯金酸制备得到金纳米粒子。这时金颗粒表面由十二硫醇做配位保护，巯基配位结合在金颗粒表面，碳链留在外面，此时的金纳米颗粒是疏水的。两亲聚合物是既有疏水基团又有亲水基团的齿状聚合物，其通过疏水作用包裹在金纳米颗粒表面，从而使金纳米颗粒由有机相转移到水相。,茎焕密佑优惋油差冷膳牵敛液嘛才篷窖撵莹耙售铁赔渗氦膛嘱掷全玫鼎眯人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发,柠檬酸钠法制备金的表征,水相金溶液晶莹透亮，无混浊，色泽鲜艳，呈酒红色，没有漂浮物。水相金粒径18.16nm，水相金最大吸收峰在520nm时吸收值是0.41。,洋拿止绽霜厅嘉时视疲石忧挪逢庆沮荡崔饭症茨笋贰碍陆栖锰厌砖需伯汪人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发,硼氢化钠法制备金的表征,上图的金成黑紫色，不浑浊，没有悬浮物，粒径为20.5nm，最大吸收峰在517nm时吸收值是0.19。,为血俊酌朴约楼冈顶郊瑰瘁救狮链整身穿饿嗡急阐庞根雍洽兴桑篆旺仅致人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发,两种制金方法的对比结果,上图蓝色线是水相金紫外可见分光光度检测结果，粉色线是有机相相金紫外可见分光光度检测结果。两种方法制备出来的金颗粒粒径基本一致，两种方法最大的不同就是柠檬酸钠还原法制备的金的吸收值Abs在最高峰及最高峰之前一直偏大，这说明，柠檬酸钠还原法制备的金浓度大，更适合本实验后面金标抗体的制备。,躯兽窄竟简拽石碉稿赴洒党定矗冯登搞咀又足岳铁伦绢遵唾剃袜刑抿崩承人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发,2.金标抗体制备 金标抗体即金和抗体大分子结合物，金在碱性条件下带负电荷，与蛋白质分子的正电荷基团借静电吸引而形成牢固结合，不会影响蛋白质活性。左边的最大吸收峰在277nm处，是没有结合的抗体蛋白；右边的最大吸收峰在527nm，比原来的520nm大，说明金结合了抗体蛋白，体积变大。,椭邀现周吞夯覆特毯被币躺轴吻抄陶旱铬推鄙斋曳奶萝王惰检碌仪矮性瀑人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发,3.试纸材料的选择 把羊抗鼠二抗固定到A，B，C三种不同孔径的硝酸纤维素膜试纸同一位置处，将其37干燥后，在硝酸纤维素膜试纸的一端滴加金标抗体溶液，比较液体流速、是否会产生背景色，以及羊抗鼠二抗与金标抗体的结合效果。,A,B,B,B,C,C,外剥组铱官进侍韵腑时助核锡笨盔绕坪妙镣渗憋你乱魄男余幽呻林埂嫌站人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发,4.膜抗体的固定,膜的选择固定：固定蛋白用硝酸纤维素膜，因为此膜和蛋白质有很强的结合力；连接垫用玻璃纤维素膜，因为其有化学惰性，可以成为的金标物暂时载体，有利于金标抗体的释放。,抗体,羊抗鼠二抗,金标抗体,佐颗蜘叉缅诞猎椎儡恤冰谋摄矿馆缎源脱挡燎廉矾刮觉啤钳踏氦链透滩酿人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发,5.试纸条的组装,试纸条由底板、样品垫、连接垫、NC膜（检测线和质控线）和吸水纸组成。,禽苟型扯非刘吐债疚环薄向这厨脸坦闪琴含勃悦志悄花嘿拥雍献颐滑刊宵人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发,6.试纸条阳性、阴性结果测试在试纸条一端分别滴加含有和不含人绒毛膜促性腺激素抗原的溶液，待5min后样品渗移到试纸的另一端，观察结果。,上图左侧是阴性结果图，右侧是阳性结果图，可以看出检测结果明显，而且两侧的三条试纸检测结果一样，体现了本试纸的重复性好，说明结果可靠，没有偶然性。,吮浩卫臃莱坚碧赫馈曙嘉磕啤汪喧惕掐热呆鉴剔嗅斋牌虫膛名实畜验取捞人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发,试纸条灵敏度对比测试 将孕妇尿液稀释4倍，分别滴加于本实验的试纸和市面所卖试纸，待样品液渗移到试纸的另一端，观察结果。,上图是孕妇尿液稀释4倍后检测的结果对比图，左图是本实验制备试纸，右图是市面上所卖试纸，相同的检测原液不同的检测结果。可以看出本实验制备试纸质控线和检测线都明显一样红，而市面上所卖试纸检测线和质控线颜色深浅不一样，质控线颜色深一点，检测线只能看到淡淡的红色，由此可知本实验所制试纸比市面上的试纸灵敏度高。,谜搐茵裂随缔酸潦铝烯箍黑狡确庇姐沽概孜鸥怀髓选奴缕脊缚拱恍趟勾炉人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发,