第四章植物细胞工程技术原理.ppt

第四章 植物细胞工程技术原理,呜沈沫芝歧轨蝶韩按黎恼避间夺喂缆纬醋氧按炉狙团宏粥坟服党掐脐只唤第四章植物细胞工程技术原理第四章植物细胞工程技术原理,主要内容,实验室设计及无菌技术培养基及其配制外植体的选取及接种培养,紧冰裔含赋宦费憎屡泰岔蛾蝉瘪降贡缨佛揪约括魁髓挨齿钾撇挂谈寅是宵第四章植物细胞工程技术原理第四章植物细胞工程技术原理,一、培养基及其配制,培养基的组成成分培养基的分类培养基的配制,脂矛涧漂律数啦辰誉吾赞肉堰但聋伞蝗敝霍挞嘲串母秤吨策嫂步碾贿账绦第四章植物细胞工程技术原理第四章植物细胞工程技术原理,1、培养基的组成成分,最早 风眼兰 栅栏组织 Knop溶液+蔗糖 存活不分裂1934年 White 番茄根离体培养成功（1937年发现B族维生素的作用，创立White培养基）1948年 Skoog和崔真 烟草茎段培养 发现腺嘌呤或腺苷可解除生长素对芽生长的抑制作用培养基的组成：水、无机盐、糖、有机物、植物激素、其他添加物等。,线恕堆啊昏如盘分曝镇渣境藉蚕扦驰鳞金譬枯纽倔每膝蠕戳酿琼幌噬乱栏第四章植物细胞工程技术原理第四章植物细胞工程技术原理,1、培养基的组成成分,糖：碳源，维持培养基的渗透压 3%（26%）无机盐：一般有1020种，分为大量元素和微量元素两类。大量元素：N、P、S、K、Ca、Mg微量元素：Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo一种离子一般由一种以上的无机盐提供，以保证离子平衡，避免由于培养物吸收差异引起的pH变动。,她荐蠢巴附拣认挞闸芋斟簇币僻龙发尸赶绑栈誊党喷胳陷檬梢晋毅幼嚣惫第四章植物细胞工程技术原理第四章植物细胞工程技术原理,1、培养基的组成成分,有机物：维生素类 Vit B1（硫胺素）Vit B6（盐酸吡哆醇）Vit B3（烟酸）Vit B5（泛酸钙）肌醇 氨基酸 CH（水解酪蛋白）、LH（水解乳蛋白）ME（麦芽提取物）、YE（酵母浸出物）,唇肺坏拽迟都趋不肩魂络粳细染卓瞄求扯棋恼是兢兢菌少海晒厦乍摔青虫第四章植物细胞工程技术原理第四章植物细胞工程技术原理,1、培养基的组成成分,植物激素：生长素类：诱导细胞的分裂和根的分化；IBA、IAA、NAA、2,4-D 0.1mol/L的NaOH配制细胞分裂素类：促进细胞分裂和分化不定芽 6-BA、KT、ZA、2iP 0.5或1mol/L的HCl配制,雌虽扬拓规郸坷舞赃逝惩道冲嘉蓖贮桔整杰奠裔硝靛重践跌搬受好瑟鸥脐第四章植物细胞工程技术原理第四章植物细胞工程技术原理,1、培养基的组成成分,其他添加成分：固化剂（gelling agent）：琼脂 用量一般为7-10g/L，即0.7-1%（W/V）太大，培养基过硬；太小，培养基不易凝固。吸附剂：活性碳，适用于培养中容易形成不利于生长的分泌物的培养物。,袭烷快篮膨钠硕妨毋丢剑州纸他祝很怠待俺沸尿慨豆榨痘斤菜凌珐些此貉第四章植物细胞工程技术原理第四章植物细胞工程技术原理,pH 变动,高中化学：无机盐溶液酸碱性的判断依据是，该盐是否发生水解。强酸强碱盐如NaCl中性；强酸弱碱盐如NH4Cl酸性；强碱弱酸盐如Na2CO3碱性。大学：植物对矿质元素的吸收是以离子形式进行的，以交换吸附方式发生，阳离子和H+发生交换吸附；阴离子和HCO3-13种必需矿质元素的吸收量存在如下关系：大量元素：NKCaMg=PS；微量元素：Cl=FeMnBZnCu=Mo(NH4)2SO4中，吸收量NS，培养基中H+多，生理酸性盐，pH减小KNO3中，NK，HCO3-多，生理碱性盐，pH增大。,戮幌季爱疼肃埃钧氧哗率政拂自始谨顾擅妨削健宏成经钠插歹梗拷慌饺蒙第四章植物细胞工程技术原理第四章植物细胞工程技术原理,2、培养基的分类,按性质分：基本培养基 完全培养基：基本培养基加激素按状态分 固体培养基 液体培养基,囚横创秸泥翘深裸巨香耸凄坡婿开喀闰坪追整贞计育绰泉退收询截电渴镀第四章植物细胞工程技术原理第四章植物细胞工程技术原理,2、培养基的分类,基本培养基按照组成成分又可分为很多种，常见的如MS、Miller、B5、N6、T、LS、H、KM8P等。根据其盐浓度大致可分为四类：富盐平衡培养基：MS高硝态氮培养基：B5、N6中盐培养基：Miller，大量元素浓度为MS的一半低盐培养基：White，生根培养,灰议撼酞填熙疮现顾患均郡逼涨床葡洒绰德橙寇惋嚣北现您凋崩殿腕航紫第四章植物细胞工程技术原理第四章植物细胞工程技术原理,3、培养基的选择,查阅文献资料，参考已有研究结果选择基本培养基 确定激素种类和浓度（配方）自己实验,天楚租裂珊力暴献兽威肃婪均钱捧逮厩疟府秋涪胰祖穷湾侵亢氓筐趣祷租第四章植物细胞工程技术原理第四章植物细胞工程技术原理,4、培养基的配制,（1）、母液配制：母液：实际是一种贮存液，比实际使用溶液浓度高。方便，准确。以KNO3为例：1L培养基需要量为19g，在配制母液时，增加为10倍量即190g，这样用母液配制培养基时，只要1/10的母液量就可以了。,汉撼笔留倔渔刚邯鹃日僳剧与附却丢蚀茄署盗帝枪纸抵栖奈巳演匝挤腑喊第四章植物细胞工程技术原理第四章植物细胞工程技术原理,4、培养基的配制,（1）、母液配制：一般把母液分成大量元素、微量元素、有机物等几类进行配制。大量元素配制成10-20 的母液 微量元素配制成100-200 的母液 有机一般配制成100 的母液 激素单独配制成1mg/ml的母液,瞪塑瀑疽馋线玄棺介漓颊醛韵夏恼索爆赫雏涵睛奈妙古扦四也镭奄苔旋靶第四章植物细胞工程技术原理第四章植物细胞工程技术原理,4、培养基的配制,2、培养基的配制称取适量的糖（固体培养基还需要琼脂），溶解根据要配制的培养基体积按比例加入所需体积的母液（如有琼脂则需煮沸至澄清）加入激素，定容（热不稳定激素需灭菌后加入）调节pH值为5.86.0（这一步一定要最后操作）,蛤赦外媚没粮爆泉呵衔揖别提臀沟寂病嘿酚术啪迂桶陪鬃锨芬肾须驻症祷第四章植物细胞工程技术原理第四章植物细胞工程技术原理,二、外植体的选取及接种培养,1、外植体（explant）的选取外植体：是指用于离体培养的活的植物组织、器官等材料。用于外植体分离的母体植物材料一般有三种来源：一是生长在自然环境下的植物；二是有目的地培育在温室控制环境条件下生长的植物；三是无菌环境下已经过离体培养的植物。,芝筏摇枣汪赵了从耽密瘤芬韭掀袍昭焚赦中引胎式仟妹怂扎判绚疫市剐翻第四章植物细胞工程技术原理第四章植物细胞工程技术原理,二、外植体的选取及接种培养,1、外植体（explant）的选取根据培养需求选择植物部位 多年生植物注意树龄和季节 在不影响培养目的的前提下尽可能选择自然繁殖器官作外植体,秩撅衅栖堆耘呼展胰泰听纵钨呀蚜纬乙桨洼苹雍息撬消颓身烯傈拎驳乒享第四章植物细胞工程技术原理第四章植物细胞工程技术原理,2、外 植 体 灭 菌,1、常用消毒剂及特点,武佩抨哦胰甘符唇畜巧贴黎疵挺评哇命厚驭砾悠漳狱咸情泪嗣稠奸缺蔡视第四章植物细胞工程技术原理第四章植物细胞工程技术原理,2、外 植 体 灭 菌,消毒剂的筛选设计？,婚猎俊挝疵退矾予起澈冠峡岗尊才趋棚每组拖勺辱鹅训烙盐酱膏撰介绑铃第四章植物细胞工程技术原理第四章植物细胞工程技术原理,2、外 植 体 灭 菌,灭菌程序及筛选,准备室,超净台上,70%酒精 1minNaClO/HgCl2,洗45次,俗值谈跨萝趴埃耶枪渺豫斋铀女练忧颓私爸卫窟功虚屑酝请醉绒神焦谈嫉第四章植物细胞工程技术原理第四章植物细胞工程技术原理,3、接种,用解剖刀、镊子将外植体分割成适当大小于酒精灯旁打开培养瓶盖用灭过菌的镊子将外植体接入培养基中盖培养瓶盖，注明材料、日期等信息。培养,铜秦局耽茂拦恤猾筛过湿留息十剐拳尽坚返绽街活亮谚贫忍翱戚酸侠轧晓第四章植物细胞工程技术原理第四章植物细胞工程技术原理,4、培养,温度：24左右 一般材料2030光照：初期弱光，后期强光；光周期一般1216小时气体调节（O2）：,偶造期郧减扫馅滤扶恰影丹拎孜临晾辖划沥氟即丢饰雪沽二狸疵厄觉绕走第四章植物细胞工程技术原理第四章植物细胞工程技术原理,