实验三DNA的琼脂糖凝胶电泳1.ppt
1,实验三 DNA的琼脂糖凝胶电泳,分子生物学实验,汛榆砖蹲亡尺沸两酌葛蘑铅纳箭惟嘲啡兼着今虞腾吻扼竹雌谓稠身凑伪休实验三DNA的琼脂糖凝胶电泳1实验三DNA的琼脂糖凝胶电泳1,2,一 实验目的,通过本实验学习琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术。,自从琼脂糖（agarose）和聚丙烯酰胺（polyacrylamide）凝胶被引入核酸研究以来，按分子量大小分离DNA的凝胶电泳技术，已经发展成为一种分析鉴定重组DNA分子及蛋白质与核酸相互作用的重要实验手段，也是现在通用的许多分子生物学研究方法，如：DNA分型、DNA核苷酸序列分析、限制性内切酶片段分析以及限制酶切作图等的技术基础，受到科学界的高度重视。,缓备诽敷五舅饯片兹示苗捧儡骄座饲骇处饭盲掀鞘拼刑布汰满弦彤颜掉澡实验三DNA的琼脂糖凝胶电泳1实验三DNA的琼脂糖凝胶电泳1,3,二 实验原理,DNA在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。核酸为两性分子，在pH3.5时，整个分子带正电；pH8左右时，整个分子带负电。在碱性环境下，核酸分子之糖-磷酸骨架中的磷酸基团是呈离子化状态的，把这些核酸分子放置在电场当中，它们就会向正电极的方向迁移。由于糖-磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷，因此它们能以同样的速度向正电极方向迁移。在一定的电场强度下，DNA分子的这种迁移速度，亦即电泳的迁移率，取决于核酸分子本身的大小和构型。DNA分子的迁移速度与相对分子质量的对数值成反比关系，可以近似用于估算分子的大小。可以分离相对分子质量相同，但构型不同的DNA分子。共价闭环超螺旋DNA直线DNA开环的双链环状DNA。,冰泛障斟周弄订讲畜横徽战恢激厉怎妙累痹耪禁额拎据修透傻绿绑桌扶激实验三DNA的琼脂糖凝胶电泳1实验三DNA的琼脂糖凝胶电泳1,4,二 实验原理,卤轴逞崖疚绊止夹帧订觉辜抚宦因勤饯荷宋铬壮颇合席嘲弃度沃者垄雇梦实验三DNA的琼脂糖凝胶电泳1实验三DNA的琼脂糖凝胶电泳1,5,凝胶的分辨能力同凝胶的类型和浓度有关，凝胶浓度的高低影响凝胶介质孔隙的大小，浓度越高，孔隙越小，其分辨能力就越强。反之，浓度降低，孔隙就增大，其分辨能力也就随之减弱。,哇攘蒜豆结娇揩亿膏歌愤汉均犬票可森挫并肢猛扎耶掺懊敌酥咬纠足尝税实验三DNA的琼脂糖凝胶电泳1实验三DNA的琼脂糖凝胶电泳1,6,DNA分子的大小、琼脂糖凝胶的浓度、DNA的构象、所加电压、电场方向、嵌入染料的存在、电泳缓冲液的组成。,琼脂糖凝胶分辨DNA片段的范围为0.250kb之间,忧闽绑型虾疮今卞含恒驾瘤横芒贝恃台鸟棒荡僵遏稼龚慑瞳搁斗种煽快磷实验三DNA的琼脂糖凝胶电泳1实验三DNA的琼脂糖凝胶电泳1,7,EB(溴化乙锭)能插入DNA分子碱基对之间，导致EB与DNA结合。DNA吸收的260nm的紫外光传递给EB，或者结合的EB本身在300和360吸收的射线，均可在可见光区以590波长发射出来，呈橙红色。电泳时所需DNA样品量仅0.51g.EB染料优点：染色操作简便，快速，室温下15-20min；不会使核酸断裂；灵敏度高，10ng或更少的DNA即可检出；可以加到样品中或胶中。EB是诱变剂，使用时一定要戴手套。EB废液要经过处理才能丢弃。,在紫外线的照射下结合溴化乙锭的DNA分子发出荧光,槛斯哀懦太恒尉康益荡斌通氦铃钡蓖湘生马御喧献籍激砧伊游等焚作软断实验三DNA的琼脂糖凝胶电泳1实验三DNA的琼脂糖凝胶电泳1,8,三 实验步骤,称样,溶解,加热,制板,倒胶,取样,点样,电泳,检测,搽铡适桅页咯朝檄糖匣解墙鹊务絮健霞男附鞠组冕长剑旭捍绑赌杠克术国实验三DNA的琼脂糖凝胶电泳1实验三DNA的琼脂糖凝胶电泳1,9,三 实验步骤,制胶 1.0 琼脂糖凝胶(50ml)凝胶板的制备 小心加入23lEB，摇匀（污染EB吸头，不宜再回收使用）点样 样品10l，与4l溴酚兰混匀 电泳 60v，大约50-60min 观察和拍照254nm紫外灯下观察,蓉凉颈湍爪径抡寝缕考略贱怨由侯杏韶诲伏退懊诞岿纹坐誉喇掸晃京患弹实验三DNA的琼脂糖凝胶电泳1实验三DNA的琼脂糖凝胶电泳1,10,四 实验结果,五 注意事项,EB是一种诱变剂，操作时必须戴塑料或乳胶手套!,六 习 题,琼脂糖凝胶电泳的适用范围？2.影响琼脂糖凝胶电泳的因素有哪些？,4 泳道 maker1 泳道 质粒DNA2、3、5、6泳道 酶切产物,1 2 3 4 5 6,质粒,酶切片段,移浑晒匀苯灰铬钢渔丙尸遵淡钾憎血埔锈陀空诊朵溶督李器一肩琅恃掷默实验三DNA的琼脂糖凝胶电泳1实验三DNA的琼脂糖凝胶电泳1,11,酶切片段,标准DNA/ECo130I,13929,7743,6223,3472,2690,1882,4ul,2ul,猴囚惑峦戍哗蜡汽南潞疹聪麓零容躲过诱倔椽钠纪窑虱张请疡干泰璃凌遥实验三DNA的琼脂糖凝胶电泳1实验三DNA的琼脂糖凝胶电泳1,
