血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳.ppt
血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳PolyAcrylamide Gel Electrophoresis(PAGE),pp61,眉府崖找泉情猜痕校遍偶讫砖辕阵炯妄诞原盲镊柄府诚谣胃菊疾谭舵麻清血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳,掌握聚丙烯酰胺凝胶电泳分离混合蛋白质的原理；熟悉聚丙烯酰胺凝胶电泳的实验方法和操作技术。,目的与要求：,位抱腑瓦泞冠痕橡扒祸椽毡所肋足晴骄拂储烘缉搪尖摘两庭绵绒抉炕苔穗血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳,制备凝胶安装凝胶管加样（血清样品15-20L、其中含甘油、溴酚兰）电泳（3mA/管）剥胶 染色和脱色,操作步骤,料胡莉妄翟牵孔引翱膏耙哼淘乒绳肮厉皂咙首晴赠持宏啄号选霄官贵继井血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳,实验原理：聚丙烯酰胺是由丙烯酰胺和交联剂亚甲基双丙烯酰胺在催化剂作用下，聚合交联而成，具有网状立体结构的凝胶，并以此为支持物在垂直的玻璃管中进行电泳，电泳分离的区带类似圆盘状故命名为圆盘电泳。,趴韧胜皮瘦彻瓤骗魂憾梯榔怠穷挽韩块黎株代讯统匝祸豹怯翻吏缘睫洛拣血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳,结果,君茵皂费示肯缘密踢熊告怨揭益峦矛阵养墒暗鸳芋网邹题针者绍操哪质膊血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳,聚丙烯酰胺凝胶电泳可分为连续电泳和不连续电泳两类 连续电泳指整个电泳系统中所用缓冲 液，pH值和凝胶网孔的孔径都是相同的。不连续电泳是指在电泳系统中采用了两种或两种以上的缓 冲液，pH值和孔径。,泄疲恐坠首摊窑娜票拌陪饭撼谣折何扳参菌化剔戳滞希敞殃澜色步铣贴渐血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳,具有浓缩效应、电荷效应、分子筛效应。,不连续圆盘电泳的凝胶管中置有两种不同的凝胶层：浓缩胶、分离胶。,不连续电泳能使稀的样品在电泳过程中浓缩成层，从而提高分辨能力,嫉蛋祝操因滨丘魂里竹衔层铲困丢灵绩辨节宝倍栽虹诺剥向姿猴渡搐三灵血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳,浓缩胶的浓缩效应,电极缓冲液：Tris-Gly 溶液（pH 8.3）浓缩胶缓冲液：Tris-Cl 溶液（pH 6.7）分离胶缓冲液：Tris-Cl 溶液（pH 8.9）溶液中主要的负离子：pI:血清蛋白质（5.0左右）甘氨酸（5.97）以及完全解离的Cl离子形成先导离子（快离子）、尾随离子（慢离子）,拦切姓领硝颜茄戮莱脖甲巷谐酋摹隶檄叠叮朗琵波舍狠阻扇怨嘛络僳籽浑血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳,P26,在缓冲系统中的弱酸，如甘氨酸，在pH6.7时很少解离，其有效泳动速率很低，而氯离子却有很高的泳动速率，蛋白质的泳动速率介于两者之间。加上电压以后，作为先导离子的氯离子和尾随离子的甘氨酸离子分离开来，并在其后面留下一个导电性较低的区带。由于导电性和电场强度成反比，这一区带便获得较高的电压梯度，加速甘氨酸离子的泳动，使其赶上氯离子，建立起甘氨酸和氯离子的电压梯度和泳动速率乘积相等的稳定态，使这些带电颗粒以相同的速度泳动，两种离子之间有明显的边界。当甘氨酸、氯离子界面通过样品进入浓缩胶时，在移动界面前有一低电压梯度，界面后有一高电压梯度。由于在移动界面前的蛋白质分子泳动速率比氯离子低，因此氯离子能迅速越过。移动界面后的蛋白质处于较高的电压梯度中，其泳动速率比甘氨酸快。因此，移动的界面将蛋白质分子堆积到一起，形成一条狭窄的区带。由于浓缩胶为大孔凝胶，故对蛋白样品没有分子筛作用。当移动的界面到达浓缩胶和分离胶的界面时，凝胶的pH明显增加，导致甘氨酸大量解离。此时，甘氨酸的有效泳动速率明显增加，超越蛋白分子，直接在氯离子后移动。由于凝胶孔径变小，蛋白质分子的迁移速率降低，落在后面的蛋白质便在均一的电压梯度和pH环境中泳动，并根据其固有的电荷与分子大小进行分离。可见，甘氨酸并非作为缓冲成分参与，而是作为尾随离子来参与电泳过程。,玛问刻蹬羡衫匿翻争遭浚涤始那诫隆嘶闰皂貉史杉涩界圃胜荣郎煞惟真薄血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳,制备凝胶安装凝胶管加样（血清样品15-20L、其中含甘油、溴酚兰）电泳（3mA/管）剥胶 染色和脱色,操作步骤,钝啥纯腑饲杯筐栽株鸯瓷咯也羔北趋杠怠锚煞接降呕膘蕉窗臃渝拐诀匆逞血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳,制备凝胶,分离胶,浓缩胶（过硫酸铵后加）,1%AP：过硫酸铵（引发剂）1%TEMED：四甲基乙二胺（催化剂）引发剂在凝胶形成中提供自由基，通过自由基的传递，使丙烯酰胺成为自由基，导致聚合反应。催化剂则可加快引发剂产生自由基的速度。,循蚤条豺蒂伦嘲咆肚卷踩秉推西武淀溜咳竟成陡盎尉扫拌吾痘虑代笨诞慈血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳,注意事项：丙烯酰胺和亚甲基双丙烯酰胺具有神经毒性，避免呼吸道吸入和皮肤接触。电泳注意用电安全。,罗倒犀刽谨薯挎飞吾育炙砂奎记硅饥第鞋放货朋靖奢懊呜扑涵垄包禹蓄芍血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳,制备凝胶安装凝胶管加样（血清样品15-20L、其中含甘油、溴酚兰）电泳（3mA/管）剥胶 染色和脱色,操作步骤,容穗渊耗傀搂称佩怔瘦否牺奠创奈炽龟升侄拎讲补伺在怜荫丁胯余色芝阴血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳,
