实验二凝集反应.ppt

主讲教师：张秋玉,实验二 凝集反应,基础医学院免疫学院,抗原或抗体的检测方法,1.1 经典的血清学反应,1.2 现代的抗原抗体反应：现代抗原抗体反应用标记技术代替传统的肉眼可见反应，其特异性、敏感性均增加，且可以定性、定量甚至定位；缺点是需特殊精密检测仪。,凝集反应的定义及基本类型,1直接凝集试验 颗粒性Ag与相应Ab的反应 玻片法：如血型的鉴定、细菌菌种的鉴定 试管法：肥达氏反应 2间接凝集试验（可溶性Ag+载体=致敏颗粒）与相应Ab的反应 3间接凝集抑制试验 可溶性Ag与相应Ab作用后，再与致敏颗粒反应 4.反相间接凝集试验（可溶性Ab+载体=致敏颗粒)与相应Ag的反应,试管凝集反应示意图,肥达氏反应-用已知伤寒菌的H(鞭毛)和O(菌体)以及甲型(A)与乙型(B)副伤寒沙门氏菌的标准液与病人血清做凝集试验，用于伤寒副伤寒的辅助诊断或用于流行病学调查的免疫凝集实验。,人的红细胞表面有20几种血型抗原系统ABO血型系统是第一个被描述的红细胞血型系统，由Landsteiner于1901年提出：,血型鉴定的原理,根据红细胞上所含抗原种类将人类血型分为如下血型：,ABO血型系统中有两种抗原，分别称为A抗原和B抗原，均存在于红细胞膜的外表面。,1.抗原本质：血型抗原是镶嵌于红细胞膜上的糖蛋白与糖脂，ABO抗原特异性是在H抗原基础上形成的,2.抗体本质：血浆中存在两种相应的抗体即抗A抗体和抗B抗体,ABO血型系统的抗体为天然抗体，主要为IgM，不能通过胎盘。,如果交叉配血试验的两侧都没有凝集反应，为配血相合，可以进行输血；如果主侧有凝集反应，则为配血不合，不能输血；如果主侧不引起凝集反应，而次侧有凝集反应，只能在应急情况下输血，输血时不宜太快太多（300ml），并密切观察，如发生输血反应，应立即停止输注。,载玻片 1块/每人*用完各自用水冲洗净置消毒缸三棱针 1根/每人 用后弃垃圾斗棉签 根/每人（先取再取1)用后弃垃圾斗牙签 1根/每人（两端使用）用后弃垃圾斗碘伏生理盐水试管试管架标记笔,实验材料,操作步骤,i 取血：搓揉左手无名指的指腹碘伏消毒用三棱针刺1-2滴血将无名指的指腹封住盛有盐水的试管管口，用倾倒法将血滴洗入盐水中并混匀形成1%的血球悬液。ii 鉴定：取洁净玻片一块，用标记笔在中央划线分区，标明“A”、“B”区在“A”、“B”区分别滴加抗A、抗B血清各1滴用毛细吸管吸取待检的血球悬液滴入抗A、抗B血清中，用牙签两端分别拌匀将玻片平持手中，前后左右转动使之充分混匀，室温放置10-15分钟后观察结果。,注意事项,取血时，注意无菌操作，避免HBsAg的交叉污染（*HBsAg携带者）；刺血时，尽可能一次性成功，用力适当，让血自然流出或搓揉后流出为佳，勿强行挤压。鉴定时，滴1滴抗血清及血球悬液即可，多则两边易混；牙签两头不可混用；O型血无凝集现象，无须反复检测。,结果判断,ABO血型的遗传规律？父母血型分别为A型、B型，他们子女的血型可能是何种？父母分别为A型和O型，子女有无可能是B型,思考,三、E-花结形成实验,原理 人的外周血T淋巴细胞上特有能与绵羊红细胞结合的受体，称E受体；在一定实验条件下，绵羊红细胞与该受体结合形成以T细胞为中心，四周绕以绵羊红细胞的玫瑰花团，故称E花结实验。E受体与CD2分子、LFA-2（淋巴细胞功能相关抗原）为同一物质。,花结分类：Ea-RFC(效应T细胞)：正常值为15-35%。E-RFC(总和)：正常值为60-80%。意义：用于检测患者外周血中T细胞的比例及数目，间接反映患者细胞免疫功能。E-受体为T细胞所特有，是鉴定T细胞的重要标志之一，还用于T细胞的分离。,