农产品质量安全实验室能力验证要点.ppt

实验室能力验证应对要点,能力验证应对及关键措施,实验室能力：实验室进行相应检测所需的物质、环境和信息资源，以及人员、技术和专业知识。能力验证：利用实验室间比对确定实验室的检测能力。能力验证已经成为检验检测机构常态化外部检测质量控制的主要方式和手段。,能力验证的作用,（1）直接展示实验室的检测技术能力。（2）证实实验室对程序、方法和其他运作的有效控制。（3）识别实验室中的问题并制定相应的补救措施这些措施，可能涉及诸如个别人员的行为或仪器的校准等。（4）确定新的检测和测量方法的有效性和可比性并对这些方法进行相应的监控.（5）改善实验室质量管理，提高实验室技术能力（6）增加实验室用户的信心。（7）识别实验室间的差异,应对,1、思想上重视2、准备要充分3、过程必须控制,思想上重视,单位：1、人员保证2、时间保证3、试剂耗材保证个人:1、进行方法学试验2、开展预试工作,准备要充分,人员准备：验证工作开始前按通知分配任务到具体承担人，分工要合理。方法准备：熟悉标准，进行模拟实验，回收率不稳定的一定要查明原因并解决问题。,准备要充分,仪器准备：检查仪器状态（色谱柱性能、进样次数、标样的响应值、稳定性等）。标准品准备试剂耗材的准备人员备份预案,准备工作重点说明,标准物质的准备和标准溶液的配制购买有证标准物质，建议与能力验证组织单位使用相同品牌或厂家的标准物（标液）；配制标准溶液时按照具体项目标准要求执行，农残由于考核项目较多，一般利用单点校准定量，有些兽残或非法添加物项目要求做标准曲线，浓度点位很重要。某些标准品溶解性不好要注意。,建议先做初步试验，确定盲样中待测物品种及大致浓度后再重新配标样和做标曲，对提高定量准确性有帮助。标曲的线性范围设定也很重要，过宽过窄都会影响定量结果。最低点一般在检出限浓度的一半左右，设置5-7个浓度点位，相关系数一般要求三个9。,仪器设备的状态检查和条件优化,检测仪器设备的准确性是影响能力验证结果的关键因素之一，必须确保在检定或校准有效期内。通常可以利用新配制的标准溶液与以前的标准溶液同时上机测定比较响应值的差异，正常情况下响应值应一致，或有所提高。若新配标准溶液灵敏度降低，需要查找原因并优化仪器和检测条件，保证仪器的灵敏度和稳定性能够达到要求。,除了要关注气相液相气质液质等大型仪器设备的状态，还要重点检查移液（枪）器，分析天平，同时氮吹仪，旋转蒸发仪和恒温水浴摇床等对结果有重大影响的辅助性仪器设备也要保证状态稳定。,试剂耗材、器皿的准备和处理,实验过程中所用试剂耗材对最终检测结果存在较大影响。所有的试剂都必须参与前处理过程，并且确保试剂空白中待测物的检出值在方法检出限以下。实验用水容易被忽视，一定要进行检测和确认，避免干扰物的存在。定性滤纸、SPE小柱或萃取包等耗材选择平时经常使用，质量稳定的产品，尽可能避免未知因素造成对检测结果的影响。,实验的各种器皿如具塞量筒、玻璃漏斗、高型烧杯、离心管、移液管、进样瓶、等应按照相关要求进行洗涤，必要时可以用有机溶剂超声清洗，容量瓶、消解罐、坩埚、比色管要用酸液浸泡，尽量减少外来污染因素的引入。,前处理注意事项,前处理是对样品中待测组分进行提取、净化和浓缩的过程，占到实验全过程的三分之二以上的时间，检测结果的重复性、准确性，方法的灵敏度都与样品前处理过程密切相关。,重点是把握方法的原理和关键点，明确每个前处理步骤的目的，保证操作的稳定性和一致性。对检出限和定量限进行加标测定，准确度和精密度必须要满足方法的规定要求。如未能达到，需对操作的每个步骤进行分解，查找原因，明确是方法问题还是操作问题，该如何解决，确保这一环节的准确无误。,模拟实验,根据能力验证的通知要求，筛选相同的空白基质，对所有的项目做添加回收实验，添加浓度可以参考定量限或限量值酌定。如果参数少，也可以做检出限和定量限。通过预实验可以初步了解在基质中哪些待测组分存在基质干扰，哪些组分响应情况偏离较大等重要信息。,能力验证中的质量控制,收到样品后，按照要求首先查看其状态是否符合能力验证作业指导书中的描述；弄清结果报送等相关要求；冷冻的盲样和基质空白（如果提供的话）应该解冻至常温，同时将准备好的质控样品基质，标准溶液（内标）等也放置在常温下与考核样品保持一致性。,自己准备的质控样品和空白基质、待测样品同步进行前处理，尽可能保证操作的一致性，减少误差。前处理过程严格按照作业指导书要求或自行制定的SOP执行，注意控制容易出问题的关键点，最好是一人操作，一人配合，要求两人都有丰富的检测经验，熟悉了解前处理关键步骤，能够对突发情况进行准确判断和得当处理。,农残检测前处理关键步骤（以NY/T 761-2008为例）,匀浆时间歇式进行，避免样品过热，导致待测组分损失；提取时间要充分，剧烈震荡1分钟，静置半小时的时间要保证，水相和有机相充分分层；加入提取溶剂后要尽快处理样品，以免放置时间过长导致溶剂挥发影响结果；匀浆后过滤时，滤液倒入滤纸时要低于滤纸边缘2cm,防止滤液溢出。,盐析若出现乳化现象可以加入少量蒸馏水或氯化钠溶液破坏乳化层，使分层明显；使用多位数水浴加热氮吹仪，氮气流量不要太大，绝对不能吹干，样品吹成湿盐状时要快速取离水浴锅，立即加丙酮、正己烷等溶解后进入下一阶段，否则会导致某些农药回收率偏低；氮吹后加2mL丙酮要盖铝箔，丙酮挥发很快，在通风厨中要快速操作。,转移后用3mL丙酮分3次清洗小烧杯时，可以旋涡混合器上转圈混匀清洗，保证杯壁和底部的待测液全部转移入离心管；活化弗罗里矽柱时，液面不能干，当溶剂液面到达柱吸附层表面时立即倒入待净化溶液。柱子干了会吸附农药，降低回收率；第二次50氮吹时要求吹至小于5mL，可以吹到1mL后加正己烷定容，不可吹干。,预实验确定添加成分及浓度水平配混标,选取空白样品和一个考核样品，做前处理后进样检测，通过比较空白样品和考核样品的差别，确定添加的农药品种和大致浓度，用基质空白配制最终使用的混合标液，做添加回收实验。,考核样品前处理、上机,剩余的两份考核样品按要求进行前处理，上机检测。上机顺序：基质空白，基质标样，质控样，考核样1第一次，基质空白，考核样2第一次，基质标样，质控样，考核样1第二次，基质标样，考核样2第二次，质控样。,数据分析处理,取平均值计算检测结果。取平均值的目的是避免偶然误差、降低操作误差、提高可信度。在检测过程中有时会发现3 个能力验证样品中有2 个的结果平行性较好，有1 个数值偏离，无法确认哪个数值更接近真值，建议取数据的平均值，减少误差。忌讳人为剔除平行性差的样品结果，将自认为平行性好的样品重复测定多次后取平均值上报，有时反将真实结果排除在外。,容易出现的问题,标准溶液,单点校准时，标样浓度与样品中待测组分浓度差异较大，会导致定量结果出现偏差。标准曲线校准时，浓度点位设置不合理，样品实测浓度超出标曲最高浓度点位，导致定量结果偏差。,标准曲线线性不好，个别浓度区间整体偏离，样品实测浓度恰好在该区间范围，导致定量结果偏差。标准曲线最低浓度点位与样品浓度基本一致，且存在较明显偏差，导致定量结果不准。,色谱峰积分问题,过分依赖仪器自动计分功能，未能及时发现实际样品检测过程中色谱图存在的特殊情况，标样基线较平，实际样品基线波动较大，积分参数设置不合理，影响色谱峰积分起止时间和位置，导致峰面积出现较大偏差，影响定量结果。,色谱峰积分问题,对有多个谱峰的待测组分，未按照所有峰面积加和进行计算，人为设定各峰所占比例后进行单独计算后再加和，甚至仅以其中某个色谱峰为定量基准进行结果校准。导致定量结果偏差。,仪器状态,仪器状态不稳定，平行样品结果差异较大时，为正确进行分析处理，简单做平均值处理后即作为最终结果上报，导致结果出现偏差。仪器进样顺序及时间安排不合理，标样和样品未连续测定，间隔时间较长，各时间点仪器状态不同，导致色谱峰保留时间和响应值均存在偏差，影响定量结果。,结果计算,对受基质效应影响显著的待测组分未采用基质加标的方法进行结果校准，导致基质效应影响定量结果。样品检测过程中稀释倍数过大，造成上机测定浓度水平较低，出现的测定偏差由稀释倍数放大后导致结果不准确。质控结果异常的情况下，未对检测结果进行准确的分析处理，判断检测过程是否存在问题，而是简单的决定是否以质控回收率进行结果校准，导致偏差较大。,重金属能力验证技术要点,人员要求：做到专人负责，配备辅助人员，能力验证前按照检测方法要求准备仪器设备、器皿、试剂等，按照检测方法配制试剂、标准溶液等，负责人应全程参与样品的保存、称样、样品消解、仪器操作和定量报告，及时发现实验过程中的问题，做到零失误，实现数据的可控性以及可重复性。,试剂耗材与器具要求试验中所用试剂耗材应满足痕量元素分析的要求，实验所用消解罐、容量瓶等玻璃器皿使用之前需要经过硝酸溶液(1+5)浸泡24 h 以上，超纯水冲洗3 遍，通过控制试剂耗材与器具，使试剂空白本底值满足实验要求。,重金属能力验证技术要点,检测样品中铅和镉的消解国家标准(GB5009.122010、GB5009.152014)中规定了食品中铅和镉的消解及检测方法，在能力验证的过程中，可根据国家标准中列出的消解方法选择所在实验室适合的消解方法。进行实验时，首先保证实验室环境洁净，所用器皿、试剂空白值符合要求。,样品消解,采用湿法消解时可在电热板上铺上石英砂或石棉布，以确保受热均匀、恒温，逐级升温，避免暴沸、溅失。样品消解温度180，避免待测元素损失。消解过程中要注意观察，避免碳化，若溶液颜色变深，则停止加热，冷却后补酸，继续加热消解。湿法消解时所用高氯酸易对铅、镉测定产生干扰，同时缩短原子吸收石墨管寿命。因此，样品消解后要赶尽高氯酸，冷却定容待测，同时增加试剂空白的数量，保证准确。,样品消解,采用微波消解法时，控制消解罐以及试剂的本底干扰，虽然此消解法用酸量小，但要保证消解充分的酸量以及保证消解的温度及时间，样品的重复性和准确性才会较好。国家标准中未提及具体的赶酸温度，根据大量的数据及能力验证结果表明，铅的结果受赶酸温度影响较大，一般为避免赶酸过程中元素的损失，铅的赶酸温度应控制在150 左右，镉的赶酸温度应低于180。,样品消解,采用压力罐消解时，消解时间较长，对加入试剂的量，以及压力罐的安装尽最大程度保持一致，保证每只压力罐的温度保持一致，这样可提高样品结果之间的重复性。,样品消解,检测样品中砷和汞的消解国家标准(GB5009.112014、GB5009.172014)中规定了食品中铅和镉的消解及检测方法。一般来说，对于大米粉或小麦粉、茶叶等含有机质比较高的样品都要预消解，加硝酸和过氧化氢后摇匀室温放置过夜，同时做试剂空白。推荐使用微波消解。,样品消解,消解完成后赶酸温度建议：砷大约在140，时间约2小时，剩余黄豆大小的液滴，不要烧干。赶酸要完全，避免氮氧化物对砷的检测产生干扰；汞的赶酸温度不要超过80，半小时左右即可。转移消解液时要注意洗涤消解内罐3次。,样品消解,微波消解后赶酸温度和时间不宜过高过长，不能赶干，否则会造成损失。赶完后加入试剂等尽快进行检测，尤其注意Hg极易在器壁上吸附造成损失，若短时间检测不了，应加入适量的重铬酸钾保存。,仪器状态要求,采用原子吸收光谱仪分析铅和镉时，主要用石墨炉法，为了保证仪器的性能，要经常检查空心阴极灯、氘灯。另外由于石墨管使用寿命有限，要经常检查、清理石墨管上残留，如果石墨管出现了涂层爆皮或开裂等，则需要及时更换，以避免石墨管引起的性能误差;仪器所用的氩气气源必须符合标准。,仪器状态要求,原子荧光光谱仪灵敏度高，操作简单，可用作分析汞、砷等元素。为了保证仪器的性能，要经常检查连接管路，是否有破损漏气，保证载气和屏蔽气通畅;要定期检查炉心中的管路是否通畅，以免氢化物还原反应剧烈导致的气液混合物通过气液分离器冲入管路及炉心，造成堵塞，导致零响应值或灵敏度低，甚至导致炉丝熔断。,仪器状态要求,光源是原子荧光光谱仪中重要的部分，直接影响仪器测量结果的准确性和稳定性，但是空心阴极灯随温度的变化其光强度变化很大，尤其是汞灯，在分析时，更应引起注意，为了避免汞灯的漂移，仪器开机后，有足够的时间预热光源，可采用大电流预热，小电流实测，进行样品分析前，一般空载做30 个样品左右，汞灯可趋于稳定状态;,仪器状态要求,外部工作环境对仪器稳定性也有很大影响，温度过低氢化反应速度、效率降低，稳定性变差，易出现波动，温度过高则氢化反应加剧，样品不稳定，同样导致稳定性变差，工作环境温度应控制在15 35;另外，实验用水建议使用阻值在18 M 以上的纯净水，酸应是优级纯或更高纯度，原子荧光气路系统多用氩气，纯度要求在99.99%以上。,能力验证的质量控制,在进行能力验证时，建议使用与待测盲样基质类似的质控样品进行质量控制。质控样品是具有准确量值的测量标准，如果检测得到质控样品中目标元素值在准确量值范围内，则可确定所使用的方法及实验操作过程的准确性，可以更大程度地保障数据的准确。,谢谢聆听！,