免疫血清制备及效价测定.ppt

实验1-1免疫血清制备及效价测定,实 验 目 的 和 要 求,1、学习抗血清的制备方法；2、掌握抗血清的收集和保存方法；3、掌握免疫血清效价的测定方法。,实 验 原 理,制备免疫血清的基本方法是将抗原注入动物体内，由动物体内特异的B淋巴细胞增殖分化成浆细胞产生抗体。由于抗原分子（完全抗原）具有多种抗原决定簇，每一种抗原决定簇可以激活具有相应抗原决定簇受体的B淋巴细胞系产生针对该决定簇的抗体，因此用抗原免疫动物获得的免疫血清一般为多克隆抗体（polyclonal antibody）。制备的免疫血清的质量（特异性、亲和力及效价高低）受多种因素的影响，主要包括抗原的性质、免疫动物的种类及状态、免疫剂量、免疫途径及免疫方案（免疫次数、间隔时间以及免疫佐剂的使用等等）。因此要获得高质量的免疫血清需先通过预实验摸索确定最佳免疫方案。测定免疫血清中抗体效价的方法很多，如凝集反应、沉淀反应、溶血反应、ELISA分析等均可用于对抗体效价的测定。本次实验将采用溶血实验测定所获免疫血清的效价。,抗原的两种特性：免疫原性与抗原性免疫原性的本质异物性 与机体亲缘关系越远，组织结构的差异越大，异物性越强。,实验材料 1.40%SRBC2.18-22g的BALB/C系小白鼠3.无菌1ml 注射器4.抗凝剂（枸橼酸钠或肝素）5.新鲜豚鼠血清（作为补体用）6.小试管等,实 验 内 容,1、免疫动物 初次免疫小鼠为腹腔注射40%绵羊红细胞（SRBC）0.2ml，以后分别于第4天、第7天和第10天时间，以相同免疫剂量、相同免疫途径加强免疫。,小鼠腹腔注射小鼠腹腔注射可以用1ml的注射器，配合4号针头。2.腹腔注射时右手持注射器，左手的小指和无名指抓住小鼠的尾巴，另外三个手指抓住小鼠的颈部，使小鼠的头部向下。这样腹腔中的器官就会自然倒向胸部，防止注射器刺入时损伤大肠、小肠等器官。进针的动作要轻柔，防止刺伤腹部器官。3.尤其是对于体重较小的小鼠，腹腔注射时针头可以在腹部皮下穿行一小段距离，最好是从腹部一侧进针，穿过腹中线后在腹部的另一侧进入腹腔，注射完药物后，缓缓拔出针头，并轻微旋转针头，防止漏液。,