免疫老化在动脉粥样硬化发病中的作.ppt
免疫老化在动脉粥样硬化发病中的作用,华中科技大学同济医学院附属同济医院 张存泰,免疫老化与动脉粥样硬化 T细胞老化与急性冠脉综合征 Kv1.3通道作为急性冠脉综合征治疗的新靶点 抗免疫老化药物的筛选（地尔硫卓的抗炎作用）总结,免疫老化在动脉粥样硬化发病中的作用,血运重建（PTCA）后或药物治疗期间心绞痛的发生率,Henderson AR,J Am Coll Cardiol.2003;42(7):1161-70,P,冠状动脉血管成型组,M,药物治疗组,患者百分比,随访,基线,单纯降低LDLC无法完全阻止冠心病的发展,无论何种调脂药物心血管事件相对危险降低25举例1000例患者安慰剂组100例事件治疗组75例（差异25）实际减少25例事件 诱发事件的关键因素是斑块不稳定，不稳定的斑块导致急性冠脉综合征需要从新的角度思考,CRP是心血管事件一个更强的预测因子,Ridker PM,J Periodontol.2008 Aug;79(8 Suppl):1544-51.,Event-free survival among people(N=27,939),免疫因素与粥样硬化,天然免疫和获得免疫均参与粥样硬化的发生与发展。在动脉粥样硬化斑块发展的各个阶段都发现局部有单核巨噬细胞、T淋巴细胞、肥大细胞等炎症细胞的聚集。T淋巴细胞作为获得免疫的主要成分，在粥样硬化的发展中发挥重要作用，特别是其中的CD4+CD28null T 细胞。CD4+CD28null T细胞数量增加被认为是机体免疫老化的表现之一,其中斑块不稳定和破裂中发挥重要作用。,粥样斑块内的细胞成分,T淋巴细胞与粥样硬化,受IP-10、Mig等趋化因子的作用，T淋巴细胞进入斑块内，并在Ox-LDL、Hp60等抗原刺激下活化并分泌INF-、IL-10等多种炎性细胞因子。,免疫老化,免疫老化是一种伴随年龄增长而出现的机体免疫功能的衰退，以细胞和体液免疫功能的降低为其主要特征，其具体表现如下：,免疫老化与动脉粥样硬化 T细胞老化与急性冠脉综合征 Kv1.3通道作为急性冠脉综合征治疗的新靶点 抗免疫老化药物的筛选（地尔硫卓的抗炎作用）总结,免疫老化在动脉粥样治疗发病中的作用,An atherosclerotic plaque at high risk of rupture has several characteristics:(1)T cells recruited to the shoulder region,(2)macrophages clustered around the T cells,(3)thin fibrous cap,(4)lipid-rich core,(5)newly formed intrawall capillaries,(6)lymphocyte and mast cell infiltration into the adventitia.,斑块不稳定发生中炎症的恶性循环,Ox-LDL,单核/巨噬细胞,T淋巴细胞,IL-1,IL-6,TNF-,MMP,内皮细胞,平滑肌细胞,细胞外基质,INF-,破坏,激活,激活,激活,溶解、杀死,CD4+CD28nullT淋巴细胞,健康人和稳定型心绞痛病人体内很少有CD4+CD28null T淋巴细胞，表明这一细胞群体不是正常免疫的组成成分。CD4+CD28null T淋巴细胞来源于慢性抗原刺激诱导的CD4+CD28+T淋巴细胞CD28分子的丢失，CD28的缺失是免疫衰老的标志。,CD4+CD28null T 淋巴细胞,CD4+CD28null T 淋巴细胞(CD4+NK-T cell)同时具有天然免疫和获得免疫的功能特点,ACS患者CD4+CD28nullT淋巴细胞的来源,Dumitriu IE,Cardiovasc Res.2009 Jan 1;81(1):11-9.,CD4+CD28null T 淋巴细胞的功能特点,CD4+CD28null T 细胞在ACS发病中的作用,Dumitriu IE,Cardiovasc Res.2009 Jan 1;81(1):11-9.,T 淋巴细胞的活化,T淋巴细胞的活化是动脉粥样硬化炎症发生的重要触发因素。活化后的T淋巴细胞大量增殖并分泌各种炎性细胞因子。T淋巴细胞活化是一个复杂的信号的转导过程，其细胞膜上的离子通道在活化过程中发挥重要作用。,T细胞膜上的离子通道，特别是K1.3、IKCa1钾通道和CRAC通道，在调控静息膜电位和细胞钙信号中发挥关键作用。2.离体和在体试验均证实，通过离子通道阻断剂阻断上述离子通道可发挥免疫抑制作用。3.因此T细胞离子通道有可能成为ACS免疫调节治疗的潜在靶点。,离子通道与淋巴细胞活化,The voltage-gated Kv1.3 K+channel plays an important role in lymphocyte activation,离子通道与淋巴细胞活化,免疫老化与动脉粥样硬化 T细胞老化与急性冠脉综合征 Kv1.3通道作为急性冠脉综合征治疗的新靶点 抗免疫老化药物的筛选（地尔硫卓的抗炎作用）总结,免疫老化在动脉粥样治疗发病中的作用,Kv1.3 通道作为特异性免疫调节治疗的新靶点,每个效应记忆性的T细胞在静息状态下表达约300个Kv通道，激活后通道数增加到1500左右。因此Kv通道的表达增加可以做为淋巴细胞活化的标志。大量研究证实Kv1.3通道可作为多种自身免疫性疾病治疗的新靶点，如MS。Kv1.3通道阻滞剂可抑制T淋巴细胞的增殖与活化。,Stable plaque,The activation of T lymphocyte,Unstable plaque,Lipid core,Lipid core,Inhibit the activation of T lymphocyte by Kv1.3 blocker,?,?,拟解决的问题,ACS患者CD4+CD28null T细胞是否属于效应记忆性T细胞。ACS患者患者外周血CD4+CD28null T细胞活化前后Kv1.3通道的表达。Kv1.3通道阻滞剂是否可以降低动脉粥样硬化发展中CD4+CD28null T细胞的数量及炎症因子的水平。,研究目的,记录ACS患者外周血CD4+CD28nullT细胞的数量。流式检测ACS患者外周血CD4+CD28nullT细胞CD45RA，CD45RO，CCR7等细胞表面分子的表达。记录CD4+CD28nullT细胞，活化前后Kv1.3通道的表达。Kv1.3通道阻滞剂对CD4+CD28nullT细胞数量及功能的影响。,研究方法,抽取ACS和对照组患者外周血，分离淋巴细胞。采用流式细胞术检测外周血CD4+CD28null T细胞的数量及表面分子的表达。磁珠分选ACS患者外周血CD4+CD28null T细胞。全细胞膜片钳电流记录法，记录活化前后CD4+CD28null T细胞Kv1.3电流。采用RT-PCR方法检测Kv1.3通道阻滞剂对淋巴细胞促炎因子表达的影响。构建大鼠动脉粥样硬化模型，研究在体水平Kv1.3通道阻滞剂对动脉粥样硬化发展的影响。,结 果,对照组,ACS组,ACS患者外周血CD4+CD28nullT细胞数量较对照组明显增加,CD4+CD28null T细胞表面分子的表达,超过70%的CD4+CD28nullT细胞为CCR7-CD45RA-CD45RO+，提示CD4+CD28nullT细胞属于效应记忆性T细胞,细胞选择与封接,应用膜片钳记录淋巴细胞Kv1.3钾电流,T淋巴细胞Kv1.3钾通道电流特性,ACS患者CD4+CD28null T细胞活化前后Kv1.3通道的表达,活化前,活化后,Kv1.3通道阻滞剂对淋巴细胞炎症因子表达的影响,Kv1.3阻滞剂降低CD4+CD28null T细胞数量及相关细胞因子的表达,免疫老化与动脉粥样硬化 T细胞老化与急性冠脉综合征 Kv1.3通道作为急性冠脉综合征治疗的新靶点 抗免疫老化药物的筛选（地尔硫卓的抗炎作用）总结,免疫老化在动脉粥样治疗发病中的作用,抗免疫老化药物的筛选,由于Kv1.3通道在CD4+CD28null T细胞功能中发挥重要作用，阻断Kv1.3通道有可能成为逆转ACS患者免疫老化的潜在有效途径。从现有抗粥样硬化药物中筛选具有KV1.3通道阻滞作用的药物，为抗免疫老化药物的开发奠定基础。,地尔硫卓,作为一种钙通道阻滞剂，地尔硫卓可扩张冠脉而改善心肌缺血。然而与其它钙通道阻滞剂相比，地尔硫卓在CHD治疗中有其独特优势，特别是对于UA患者。因此推测在扩管之外，地尔硫卓在CHD治疗中存在其它方面的作用。,地尔硫卓可进一步增强他汀类药物的调脂作用,Yeo KR,Br J Clin Pharmacol.1999 Oct;48(4):610-5.,地尔硫卓可抑制内皮和平滑肌细胞内皮素的释放,Smooth muscle cells,Endothelial cells,Haug C,J Cardiovasc Pharmacol.1998;31 Suppl 1:S388-91.,地尔硫卓的抗炎作用,多项研究提示地尔硫卓存在抗炎作用。地尔硫卓甚至可作为免疫调节和抑制剂用于移植患者。然而关于地尔硫卓抗炎作用的具体机制目前尚未完全清楚。基于本实验室的研究，我们推测地尔硫卓的抗炎作用是否与其阻断Kv1.3通道相关。,地尔硫卓对Kv1.3通道电流的影响,0 mol/L,10mol/L,40mol/L,20mol/L,60mol/L,80mol/L,100mol/L,Reperfusion,地尔硫卓对Kv1.3通道电流的影响,地尔硫卓可抑制淋巴细胞INF-的 表达,Quintieri F,Br J Clin Pharmacol.2002 Dec;54(6):679-80.,Stable plaque,The activation of T lymphocyte,Unstable plaque,Lipid core,Lipid core,Diltiazem，他汀类药物。特异性的 Kv1.3通道阻滞剂？,免疫老化与动脉粥样硬化 T细胞老化与急性冠脉综合征 Kv1.3通道作为急性冠脉综合征治疗的新靶点 抗免疫老化药物的筛选（地尔硫卓的抗炎作用）总结,免疫老化在动脉粥样治疗发病中的作用,总结,ACS 患者的CD4+CD28null T属于效应记忆性T细胞，活化后高表达Kv1.3 通道。Kv1.3通道阻滞剂可抑制 CD4+CD28null T细胞的增殖与活化，提示Kv1.3通道可能成为逆转ACS患者免疫老化的潜在治疗靶点。本实验的研究提示地尔硫卓的抗炎作用可能部分与其阻断Kv1.3通道相关。,Acknowledgement,Xu Rende M.D Huang Shen M.SGuo Lifen M.S Quan Xiaoqing M.D.Li Liandong M.D Wu Xiaofen M.D.Ruan Lei M.D.Cao Ming M.S.Ma Jin M.D.Yang Xinwe M.s.Zeng Xiuli M.S This study was supported by the National naturalscience foundation of China(code43007402),2009.The research of the voltage-gated Kv1.3 potassium channels in T lymphocyte as a new target for treatment of Acute Coronary Syndrome,Thanks for your attention,The origin of T lymphocytes and the atherosclerosis plaque,
