免疫凝集反应及临床应用.ppt
免疫凝集反应及临床应用,刘 静,细菌、螺旋体、红细胞或细胞性抗原等颗粒性抗原，或可溶性抗原（或抗体）与载体颗粒结合成致敏颗粒后，它们与相应抗体（或抗原）发生特异性反应，在一定条件下，形成肉眼可见的凝集现象。,凝集反应定义,反应阶段：抗原抗体的特异性结合阶段出现肉眼可见的凝集现象,凝集反应,反应特点：IgM的作用比IgG大数百倍IgG与抗原结合后，常不出现凝集反应，称不完全抗体,可见反应形成,电解质：稀释液或缓冲液（8.5g/L NaCl）pH：pH6pH9（pH3为细菌抗原的等电点）温度：1540，37最适（4特例）反应时间：不同反应时间不同外力：震荡或搅拌,环境因素,分类：直接与间接凝集反应,颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象。包括：玻片凝集试验试管凝集试验,直接凝集反应direct agglutination,玻片凝集试验：定性已知抗体检测抗原简便、快速菌种的诊断或分型ABO血型的鉴定,试管凝集试验：半定量已知抗原检测抗体易引起抗原的非特异性凝集肥达试验,0.5,0.5,0.5,0.5,0.5,弃掉0.5,试管凝集试验原理,结果,1 2 3 4 5 6 7,菌液,+,很小的凝集颗粒,混浊,-,无凝集现象,与对照相同,+,小、部分凝集块,中等混浊,+,大多凝集管底,轻度混浊,+,大的凝集块,清亮,凝集程度,沉淀,上清,试管凝集试验结果判断,管底沉淀,凝集程度,最高稀释比例,待测血清的滴度,试管凝集试验结果判断,将可溶性抗原或抗体吸附于颗粒性载体表面，然后与相应的抗体或抗原反应，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象,间接凝集反应indirect agglutination,RBC、白陶土、活性炭、某些细菌、聚苯乙烯胶乳颗粒良好载体有如下几点基本要求：在生理盐水或缓冲液无自凝倾向；大小均匀；比重与介质相似，短时间内不能沉淀；无化学或血清学活性；吸附抗原（或抗体）后，不影响其活性。目前应用最广的是人的O型红细胞和绵羊红细胞。而后者应用更广，因为其来源方便。另外绵羊红细胞的表面有大量的（约1 000个以上）糖蛋白受体，极易吸附某些抗原物质，吸附性能好。,载体种类,正向间接凝集试验反向间接凝集试验间接凝集抑制试验协同凝集试验,间接凝集反应,用抗原致敏载体-检测抗体,正向间接凝集反应,反向间接凝集反应,用抗体致敏载体-检测抗原,间接凝集抑制反应,用抗原致敏载体-检测抗原,有凝集颗粒为阴性,反向间接凝集试验，载体为金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌的细胞壁成分A蛋白，和IgG的Fc段结合，使Fab段暴露在菌体表面，Fab段仍然保持正常的抗体活性。利用这种特性可以将特异性IgG结合在菌体上，形成致敏颗粒，检测特异性抗原。,协同凝集反应,原理图,IgG,SPA,SPA-IgG,待测抗原,SPA-IgG-待测抗原凝集颗粒,混合,加入,间接血凝试验胶乳凝集试验明胶凝集试验,按载体分类间接凝集试验,以红细胞为载体的间接凝集试验。将已知抗原(或抗体）致敏红细胞，与相应抗体（或抗原）特异结合，出现红细胞凝集现象。,间接血凝试验,红细胞,抗原,致敏,致敏红细胞,红细胞凝集,间接血凝试验,待测抗体,间接血凝试验原理,-：红细胞沉积于孔底+：红细胞沉积于孔底，周围有散在少量凝集+：红细胞形成凝集，面积较小，边缘较松散+：红细胞形成片层凝集，面积略多于+：红细胞形成片层凝集，均匀布满孔底，或边缘皱缩如花边状,血凝试验强度,与一般间接血凝试验不同之处为反应中的红细胞是未经致敏的受检者新鲜红细胞主要试剂材料为抗红细胞单克隆抗体，能与红细胞结合，但不引起凝集反应这种抗体与另一特异性抗体连接成的双功能抗体可用于检测标本中的抗原如与特异性抗原连接，则可用于检测标本中的抗体反应中的标本为受检者的全血HIV抗体、HBV抗原检测,自身红细胞凝集试验,胶乳凝集试验,以聚苯乙烯胶乳为载体颗粒的间接凝集反应胶乳为人工合成的载体，性能比红细胞稳定，均一性好但与蛋白质结合能力以及聚集性能不如红细胞因此作为间接凝集反应，胶乳凝集的敏感度不及血凝试验,明胶凝集试验,以明胶为载体颗粒的间接凝集反应用粉红色明胶颗粒吸附病毒抗原或重组抗原当致敏明胶颗粒与样品血清作用时，若血清含有抗病毒抗体则可形成肉眼可见的粉红色凝集常用于抗HIV-1抗体和抗精子抗体的检测梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA),抗球蛋白参与的血凝试验,抗球蛋白参与的血凝试验,又称Coombs试验，利用抗球蛋白抗体作为第二抗体，连接与红细胞表面抗原结合的特异性抗体，使红细胞凝集用于检测抗红细胞不完全抗体不完全抗体：能与颗粒抗原牢固结合，但一般不出现可见反应，多为7S的IgG诊断免疫性溶血性贫血的主要方法,抗球蛋白参与的血凝试验,分为两种方法：直接Coombs试验间接Coombs试验,直接Coombs试验,检测红细胞上的不完全抗体,新生儿溶血症自身免疫性溶血症特发性自身免疫性贫血医源性溶血,临床应用,间接Coombs试验,检测血清中游离的不完全抗体,检测母体Rh(D)抗体检测红细胞不相容的输血所产生的血型抗体,临床应用,
