仪器分析实验实验分子荧光分析法.ppt

仪器分析实验实验10 分子荧光分析法,Molecular FluorimetryFor short:M-F,厦门大学精品课程仪器分析(含实验),一、分子荧光分析法简介,(对光的吸收),发生激发态反应,分子内的激发和衰变过程,1.1 荧光的产生,激发态能量的跃迁与转 化的形式和速率：A1,A2 吸收:10-15 sVR 振动松弛：10-12 sic 内转化：10-11 sisc 系间窜越：10-6 10-2 sF 荧光：10-9 10-6 sP 磷光：10-6 100 s,激发光谱,发射光谱,1.2 荧光光谱 任何荧光化合物，都具有两种特征的光谱：激发光谱和发射光谱。,组成、结构与衍化信息 物质的化学结构 环境与介质条件 与其它溶质的相互作用 反应动力学,1.3 荧光定量,F=KI0fC I0：光源强度；f：荧光量子产率；C：荧光体浓度）,1）影响相对荧光强度的因素有哪些？2）试比较荧光法与紫外-可见分光光度法的分析性能。,?,问题：,（注意：在一定浓度范围内适用）,1.4 荧光仪的基本构造,？问题：荧光光度计与紫外-可见分光光度计在光路设置 上有什么不同？为什么？,1.5 分子荧光分析法的应用简介,常规分析应用：定性分析：f；ex；em；峰形等 定量检测：F=KI0fC 其它（略）高端生化研究：分子相互作用研究；代谢动力学跟踪；显微成像（物理迁移与化学衍化的原位“显迹”）,二、维生素B6注射液中维生素B6含量的荧光法测定,2.1 实验原理,在近中性的水溶液中有较强的荧光发射:（323nm/392nm 附近）,在碱性介质中不稳定,易发生光降解,VB6 的化学结构,2.2 实验流程,、试液配制,、VB6的荧光光谱的绘制,、标准工作曲线的制作,、未知液的配制,2.3 注意事项：,注射液的移取与稀释,系列标液的测定顺序,即放即测，防光降解,荧光仪的开关机顺序,2.4 数据处理,从荧光光谱图上读出最大激发（ex）和发射波长（em）用标准工作曲线法算出所配实测试液的浓度计算注射液中维生素B6的含量，病计算测定量占 标示量 的百分数,