【精品论文】青光安对兔眼滤过性术后中 I 型胶原蛋白的.doc

精品论文青光安对兔眼滤过性术后中 I 型胶原蛋白的影响刘艳，彭清华，李文娟5（湖南省中医药大学第一附属医院眼科重点学科，长沙 412200）摘要：目的 观察青光安有效组份对兔眼滤过性手术模型中 I 型胶原蛋白表达的影响，探讨 其抗青光眼术后滤过到瘢痕化的效果，并初步探讨青光安有效组份的毒性作用。方法 将健 康成年新西兰长耳白兔 42 只，采用随机数字法分为 A 组：空白组；B 组：模型组；C 组： MMC 对照组；D 组：有效组份 1 组；E 组：有效组份 2 组；F 组：有效组份 3 组；G 组：10有效组份 4 组。动物在造模后第 2 天开始用药并观察滤过泡形成情况；检查术口愈合及眼部 一般情况。用药 4 周后 HE 染色观察滤过性手术术区组织形态,免疫组织化学方法检测滤过 泡区域 Tenon 囊组织中型胶原蛋白的表达。结果 术后 C 组和 E 组能维持有效滤过泡，B组滤过泡在术后两周内基本都变为无功能滤过泡或滤过泡消失，D、F、G 组在术后第 4 周都有部分滤过泡存在。型胶原蛋白的表达除 C 组与 E 组、B 组与 G 组、F 组与 G 组组间15胶原表达差异无明显统计学意义，其他组间两两比较结果均为 P0.05，差异具有明显统计 学意义。术后一般情况及第 4 周标本光镜观察，MMC 组有一眼出现术后并发症，各有效组 份组眼部组织结构未见异常病变。结论（1）在正常兔眼上行常规小梁切除+虹膜根部切除术， 可成功建立滤过性手术模型。（2）青光安有效组份 2 和 MMC 可通过抑制型胶原蛋白， 起到抗青光眼术后滤过道瘢痕化的作用。（3）通过实验观察初步说明青光安有效组份口服20给药，无明显毒副作用，安全性优于 MMC。可能成为抗青光眼术后滤过道瘢痕化，提高手 术成功率的一个全新安全药物。关键词：中医眼科学；青光眼；滤过道瘢痕化；青光安有效组份；型胶原蛋白；毒性作用中图分类号：R276.725Effect of Effective Components of Qing Guang An on TYPE I collagen of Scarring Tissue of Filtration Canal afterGlaucoma Surgery and a preliminary study of their toxic effectsLiu Yan, Peng Qinghua, Li Wenjuan30(the Key discipline of Ophthamology,the First Affiliated Hospital of Hunan Traditional ChineseMedicine University,ChangSha 412200)Abstract: Abstract:Object: To observe effects of four effective components of Qing Guang An on typecollagen of scarring tissue of filtration canal after glaucoma surgery, and discuss their effecton preventing its formation, and a preliminary judgment on their toxic effects.Methods: 42 healthy35adult New Zealand long ears white rabbit, were divided into 7 groups randomly with 6 rabbits in each group. These seven groups were used as following: group A was blank group;group B wasmodel group; group C was a control group of MMC; group D, E, F, G was used effective component signed respectively as 1, 2, 3, 4. The next day after molding began to use medicine on each group. after surgery, the formation of filtering bleb was observed , and the intertion status40and eyes' general condition were checked. After using medicine for four weeks，After dyed by HEorganization structure where the surgery had done. Expression of typecollagen in Tenon boursein filtering bleb area was checked with the immunohistochemical method.Result: C, E groups基金项目：国家自然科学基金资助项目(No.81273807);教育部博士点基金专项课题(No.20124323110006);湖 南省自然科学基金重点资助项目(Np.11JJ2050);湖南省教育厅科研基金重点资助项目 (No.06A052,No.10A094);湖南省卫生厅科研基金项目(No.204084);国家中医药管理局中医眼科学重点学科建 设项目;湖南省中医五官科学重点学科建设项目作者简介：刘艳，（1986-），女，医师，主要研究方向：中西结合眼科眼底病与角膜病。通信联系人：彭清华，（1964-），男，教授，主要研究方向：中西结合眼科。E-mail: pqh410007- 9 -remained effective filtering bleb. Filtering bleb in group B turned into no function or disappeared two weeks after surgery. Group D, F, G had part of filtering bleb existing four weeks after surgery.45Comparing with the the expression of typecollagen, except group C and E, B and G, F and G,result of others have obvious significance on statistics showing as P<0.05. According to the observation of common condition after surgery and specimen polarizing at the fourth week, the group with MMC had complication after surgery, other groups with effective components did not show any abnormal lesions in eye organization structure.Conclusion: (1) In doing conventional50trabeculectomy and iridodialysis, a filtration surgery model will be successfully built. (2) Theeffective componment 2 of Qing Guang An and MMC can obviously inhibit the expression of typecollagen,reduce the hyperplasia of scar tissue,which has obvious effect for preventing scarringof filtration canal. (3) It suggests that orally taking the effective componment 2 of Qing Guang An does not has obvious side effects, which is much more safe than MMC, and may be a new and safe55medicine to preventing scarring of filtration canal after glaucoma surgery and thus improve thesuccess rate of the surgery.Keywords: ophthalmology of Traditional Chinese Medicine; Glaucoma; the scaring of filtration canal; effective components of Qing Guang An; Collegen Type I; Toxicological effect600引言青光眼滤过性手术是目前青光眼治疗的主流手术方式，滤过性手术后形成功能性滤过泡 和保持滤过道通畅是滤过性手术成功的关键。如果在术后术口愈合过程中, 结膜下 Tenons 囊和巩膜瓣层间成纤维细胞过度增殖以及胶原合成增加，导致滤过道瘢痕化1，则产生滤过 道堵塞, 严重影响青光眼滤过性手术的成功率2.3。显微滤过手术联合抗滤过道瘢痕化药物应65用可大大降低青光眼手术风险，目前为止的研究发现,可提高滤过性手术成功率的西药主要 有以下几大类：皮质类固醇激素、抗凝血药物、抗代谢药物、胶原交联抑制剂、生长因子抑 制剂等。但这些药物常引发一系列难以避免的并发症，有的药物相对安全性较高可价格昂贵， 这都影响了它们的推广应用。本实验通过青光安有效组份在兔青光眼滤过术模型中的应用， 观察其对兔眼滤过性手术模型中 I 型胶原蛋白表达的影响，探讨其抗青光眼术后滤过到瘢痕70化的效果，及通过对兔眼术后一般情况的检查，初步探讨青光安有效组份口服的毒性作用。1实验动物健康成年新西兰长耳白兔 42 只，远交系，SPF 级，雌雄不拘，体重 1.8-2.2kg，实验前 排除全身性病变，双眼部情况检查均正常。2主要药品和试剂75丝裂霉素 C，青光安最优有效化学组分（共 4 种）,型胶原兔抗人单克隆抗体（武汉 博士德生物工程有限公司生产），过氧化物酶标记链酶白卵素(武汉博士德生物工程有限公 司生产),3,3-二氨基联苯胺（3,3 -diaminobenzidine，DAB）显色剂：武汉博士德生物工程有 限公司生产。3实验方法803.1 动物分组动物购回驯养 1 周后，将 42 只新西兰长耳白兔采用随机数字法分为 7 组，每组 6 只。 分别为：A 组：空白组；B 组：模型组；C 组：MMC 对照组；D 组：有效组份 1 组；E 组： 有效组份 2 组；F 组：有效组份 3 组；G 组：有效组份 4 组。8590951001051101151203.2 建立青光眼滤过手术动物模型的方法10%水合氯醛溶液，按 3-4mlKg 耳缘静脉注射麻醉。生理盐水冲洗结膜囊后，在手术 显微镜下行双眼小粱切除+虹膜根部切除术：简易开睑器开眼睑，在上方角膜缘剪开球结膜 和球筋膜，做以穹窿部为基底的结膜瓣，暴露准备做巩膜瓣的区域；沿测量标记做以角膜缘 为基底的四边形巩膜瓣，大小约 3mm×4mm，深度为 12 巩膜厚度，小心向前分离至清亮 角膜内至少 0.5mm 处，做 1 mm×2 mm 大小的小梁组织切除并做虹膜根部切除；将巩膜瓣 复位对合后，于其两游离角用 100 尼龙线缝合缝一针，做不可调节缝线；于结膜切口的两 端角巩膜缘处各一针缝合结膜切口。手术完成后于非手术区球结膜下注射庆大霉素加地塞米 松 0.5ml 一次，滴氧氟沙星滴眼液抗感染一周。所有手术操作均由同一人完成。3.3 术后给药方法空白组、模型组于术后第 2 天开始以生理盐水 5ml/kg 灌胃，每日 1 次，持续 4 周；MMC 对照组采用术中给药，即在做巩膜瓣之前，用 1 块大小 4mm×4mm 含 MMC 的棉片（MMC 浓度 0.2 mgml）放入手术区结膜瓣下巩膜上，放置 2min 之后取出，立即用 100ml 生理盐 水充分冲洗干净术区，再完成之后的手术操作，于术后第 2 天开始以生理盐水 5ml/kg 灌胃， 每日 1 次，持续 4 周；有效组份 1 组-有效组份 4 组：各组于术后第 2 天开始给药，每组予 一种有效组份灌胃，按照成人体表面积法（人体重按 60kg 计）计算需要灌胃的药物剂量， 再按药物组份提取收集率4，算得兔用药剂量，溶于生理盐水中，以 5ml/kg 灌胃，每日 1 次，持续 4 周。3.4 滤过性手术后的常规检查参照相关文献5.6，各组动物均于术后第 2 天、第 1 周、第 2 周、第 4 周观察滤过泡形 成情况。依照 Krofeld 分型法并根据兔眼滤过泡形态及功能，将滤过泡分为：型(微小囊状 型)：壁薄，无血管，多呈微囊状滤过泡；型(扁平弥散型)：相对壁厚扁平，苍白状，滤过 泡弥散；型(瘢痕型)：术区结膜下瘢痕致密与巩膜粘连，巩膜表面多血管外观，无滤过泡 或球结膜充血微隆起；型(包囊型)：局限圆顶状隆起，球结膜下呈囊样增生，瘢痕组织与 周围结膜分界清楚，成为致密的球筋膜空腔。其中 I、型为功能性滤过泡，、型则为 无功能滤过泡。并于术后在裂隙灯显微镜和眼底镜下观察结膜伤口愈合情况、角膜水肿混浊情况、前房 炎性反应程度、晶体透明度及眼底情况，每 3 天观察 1 次。3.5 滤过性手术术区组织形态检查术后常规饲养条件饲养及给药 4 周后，空气注射处死动物，完整摘除眼球。放入 4%多 聚甲醛固定 2 小时后，用注射器从 6 点钟方向角巩膜缘刺入眼球，向内注入少量 4%多聚甲 醛，再投入固定液中固定 24 h7后。将标本从固定液中取出，用锋利剪刀剪下眼球上手术区10mm ×10mm 范围内的全层眼球壁及周边组织（见图 1）。制作石蜡切片，一部分用于 HE 染色后，在低倍镜下观察 HE 染色标本上滤过道组织的炎性反应及瘢痕形成情况，以及 角膜、房角、虹膜睫状体、脉络膜、视网膜等结构的一般情况。3.6 滤过泡区域内 Tenon 囊组织中型胶原蛋白的表达另一部分石蜡切片脱蜡后。将切片置于 30%H2O2 与蒸馏水混合液中，室温下放置 10min以灭活内源性酶，之后用蒸馏水洗 3 次。将切片置于 0.01M 枸橼酸盐缓冲液,放入微波炉内精品论文125130135140加热至沸腾后断电取出，间隔 7min 后重复，反复 2 次进行抗原热修复，冷却后用 PBS 液洗涤 2 次。滴加正常山羊血清封闭液,室温下放置 20min。滴加按 1:100 比例稀释的型胶原兔 抗人单克隆抗体，置于 4环境下过夜。滴加生物素化山羊抗兔 IgG, 37培养箱中放置孵育20min。之后 PBS 洗 3 次。滴加试剂 SABC，37培养箱中放置孵育 20min。PBS 洗 4 次。 取 1ml 蒸馏水，A，B，C 三种试剂各取 1 滴，加入 DAB 试剂盒中，混合均匀后滴加至切片。 室温下放置，镜下观察至显色，用蒸馏水洗涤停止反应。切片置于苏木素中轻度复染。脱水， 透明，封片。高倍镜下观察型胶原蛋白的表达情况，判断标准：在术后 28 天瘢痕组织中型胶原 蛋白大多为细胞外胶原蛋白，染色应位于细胞外间质，也有一些出现在细胞浆内，免疫组化 反应后间质和成纤维细胞胞浆内出现棕色或深棕色颗粒者为阳性。高倍镜下滤过泡处随机选 取 5 个视野拍照,用 Image-Pro Plus 6.0 图像分析系统测量型胶原蛋白平均光密度 AO。（注： 本实验中 AO 为积分光密度 IOD 与图片中结膜上皮层和巩膜之间的空间总面积的比值）4统计学处理所有实验数据采用 SPSS16.0 系统软件处理。计量资料实验数据以均数±标准差（ x ±s） 表示，先进行正态性分布及方差齐性检验，若满足正态性和方差齐性，多组比较采用方差分 析（LSD 法及 Dunnett 法）。不满足正态性和方差齐性时，则用非参多重比较。计数资料采 用2 检验，方差不齐者进行秩和检验。P0.05 认为有统计学意义,以 p0.01 为检验非常 显著性标准。5结果5.1 滤过性手术后的常规检查1451501555.1.1滤过泡形成情况术后不同时期在裂隙灯下观察滤过泡形成情况。在术后第 2 天 B、C、D、E、F、G 各 组手术区结膜稍充血，结膜微隆起，滤过泡形成良好；术后第 1 周，B 组滤过泡处结膜增厚， 苍白，滤过泡范围明显缩小，C、D、E、F、G 组大部分滤过泡弥散为 II 型，其中 C 组滤过 泡隆起最明显，并见有两眼为 I 型滤过泡；术后第 2 周，B 组手术区结膜增厚明显，结膜可 见新生血管，结膜下瘢痕组织增生明显。C 组及 E 组滤过泡范围缩小，隆起度较术后 1 周时 有所下降，除 C 组有 1 眼为 I 型滤过泡外，其他均为 II 型。D、F、G 组大部分为 II 型滤过 泡，也有部分无功能滤过泡。术后第 4 周，B 组和 G 组滤过泡基本消失，尤其是 B 组，手 术区被增生的瘢痕组织填满，更有 2 眼出现包囊型滤过泡。D、F 组滤过泡区瘢痕增生不如B 组明显，但也有一部分为无功能滤过泡。C、E 组滤过泡弥散，稍隆起，滤过泡区颜色苍 白，都为功能性滤过泡，其中 C 组有 1 眼滤过泡维持为 I 型。5.1.2术口愈合情况及前房深浅炎性反应 术后观察各手术组兔眼术口愈合情况及前房炎性反应情况，除 C 组有一眼出现结膜充血+，角膜混浊+，前房深度及炎性反应+，持续 12 天炎性反应才逐渐好转外。各组余眼术后，手术部位结膜轻度充血+,前房稍浅,轻度房水闪辉,无明显炎症反应, 均未发现角膜水肿 混浊，前房渗出、出血，晶体混浊或眼底异常等并发症, B 组术后反应多在在术后 69 天消 失，D、E、F、G 组术后反应多在术后 3-6 天消失，模型组和 MMC 组术后反应最轻。精品论文5.2 滤过性手术术后标本的光镜观察1601651705.2.1正常对照组（组）正常兔眼结膜上皮完整，结膜下Tenon囊中为均匀一致的薄层结缔组织，巩膜纤维致密 均匀，角膜、虹膜、睫状体、脉络膜及视网膜的结构均正常（见图2）。5.2.2手术对照组（组） 对照组结膜上皮完整，手术区结膜下为异常增厚的瘢痕组织，可见大量的成熟期成纤维细胞，细胞染成蓝色，形态不规则大多为长梭形，排列不规则。大量粗大致密的胶原纤维，为淡红色，涡旋状或层状排列，基本见不到间隙。在滤过泡结膜上皮下位置有大量增生血管， 偶见染成红色的红细胞。巩膜中滤过道间隙消失，被成纤维细胞和胶原等所组成的瘢痕组织 填塞。B 组所有标本的组织切片，角膜、虹膜、睫状体、脉络膜及视网膜的结构均未见明显异 常。1751801851905.2.3MMC 对照组（组）MMC 组滤过泡明显，内也可见瘢痕组织，但组织稀松，见较多空腔间隙。成纤 维细胞及胶原纤维少，形态规则，颜色较淡，排列整齐，组织内未见新生血管。滤过道通畅。MMC 组有一例标本表现为滤过泡区结膜上皮萎缩变薄，甚至部分缺失，滤过泡高度隆 起一空腔，基本未见成纤维细胞，内仅有少量浅红色棉絮状纤维组织，部分区域可见大量炎 性细胞浸润。巩膜上层部分失去正常形态，巩膜瓣层间滤过道结构不清。并出现角膜炎症、 虹膜睫状体萎缩及脉络膜脱离，视网膜结构异常（见图 3-7）。5.2.4组份 1 治疗组（组）组份 1 治疗组，滤过泡区域内瘢痕组织明显。成纤维细胞较多呈蓝染，胶原纤维也多， 呈淡红色、排列较为紊乱，瘢痕组织内有少许间隙，未见明显血管增生。巩膜间滤过道内少 量滤过腔，但滤过内口处胶原纤维分布较致密, 其内可见中等量成纤维细胞，致内口阻塞。 滤过区域内瘢痕组织密度介于手术对照组与 MMC 对照组之间。眼部余结构形态正常同 A 组。5.2.5组份 2 治疗组(E 组）组份 2 治疗组，结膜下 Tenon 囊中瘢痕组织内成纤维细胞密度较低，形态规则边界尚清 楚，为长梭形。胶原纤维较稀疏，整齐排列，呈淡红色。未见炎性反应及新生血管。巩膜板 层间滤过道内见少量成纤维细胞及胶原纤维，有滤过空腔存在。滤过道通畅，滤过泡明显。眼部余结构形态正常同 A 组。5.2.6组份 3 治疗组（F 组）组份 3 治疗组，手术区结膜下仅余中央小片的疏松结缔组织区域, 其周边都是致密纤维 结缔组织包裹增生;滤过泡及滤过道位置被大量增生的成纤维细胞和胶原纤维所填满，并可 见新生血管增生。眼部余结构形态正常同 A 组。精品论文1955.2.7组份 4 治疗组（G 组）组份 4 治疗组滤过泡内瘢痕组织形态与 B 组相似，可见大量的活动期成纤维细胞，及 致密的胶原纤维，排列紊乱，基本见不到间隙。巩膜间滤过道结构分辨不清。但总体瘢痕组 织厚度不及 B 组，仅见少量增生血管，未见染成红色的红细胞。眼部余结构形态正常同 A 组。图 1-7图 1:滤过性手术术区组织形态检查所 取标本，必须包含术区眼球壁的全层结构。（×40 倍）图 4:C组5 号标本滤过泡内仅有少量浅 红色棉絮状纤维组织，极少见成纤维细 胞。巩膜上层失去正常形态。(×250 倍)图 2:A 组正常兔眼结膜下 Tenon 囊中为 均匀一致的薄层结缔组织，富含血管，巩膜纤维致密均匀。(×250 倍)图 5:C组5 号标本出现角膜损伤，上皮 层及前弹力层内大量炎性细胞。(×250 倍)图 3:C组5 号标本出现滤过泡区结膜上 皮及巩膜损伤，部分区域还见炎性细胞浸润，滤过泡高度隆起一空腔。(×250 倍)图 6:C组5 号标本出现虹膜溶解后萎缩 样变，并可见新生血管及血细胞。(×250 倍)200图 7:C 组视网膜各层排列较紊乱，色素细胞稀疏，细胞层空泡样变加重。(×400 倍)5.3 滤过泡区域内 Tenon 囊组织中型胶原蛋白的表达术后第 4 周手术区结膜下滤过泡区域内 Tenon 囊组织病理切片免疫组织化学反应后，在 光镜 400 倍视野下观察滤过泡区域内 Tenon 囊组织中型胶原蛋白的表达（见图 815）， 具体数值如表 1。205210别标本 1标本 2标本 3标本 4标本 5标本 6x ±sA0.0510.0070.0480.0340.0120.0270.030±0.018#B0.4240.4220.4630.4380.3780.4180.441±0.025C0.1700.1660.2410.1620.1480.0980.164±0.046#D0.3340.3450.2670.3080.3620.3160.322±0.033#E0.2040.2050.1620.2380.1780.2270.202±0.029#F0.3410.3590.3880.3530.3840.4160.374±0.028#G0.4120.3970.4300.4400.4290.3520.410±0.032表 1 术后 4 周滤过泡区域内型胶原蛋白平均光密度结果（AO） 组型胶原蛋白平均光密度215220225注：#P0.05，术后第 4 周，各组型胶原蛋白光密度值与手术对照组（B 组）型胶原蛋白光密度比 较，差异有统计学意义。术后第 4 周手术区结膜下滤过泡区域内 Tenon 囊组织病理切片 HE 染色后，在光镜 400 倍视野下观察滤过泡内型胶原蛋白的表达（见图 4862），具体情况如表 3。在术后第 4 周，各组型胶原蛋白量较正常 Tenon 囊组织都有不同程度的增加，多组数据采用方差分析 的结果示：除 B 组与 G 组，C 组与 E 组，F 组与 G 组组间比较 P > 0.05，胶原表达差异无 明显统计学意义。其他组间两两比较结果为 B 组与 F 组，P0.05，差异具有统计学意义, 余均为 P0.01，差异具有显著统计学意义。从实验结果的分析可以得到以下结论，在青光 眼滤过手术的过程中，结膜瓣下放置 MMC 棉片，可以使术后滤过道内瘢痕组织中型胶原 蛋白的合成极大的减少，而术后口服青光安有效组份可以在不同程度上抑制型胶原蛋白的 合成，其中以有效组份 2 的效果最好。图 8-14(×400 倍)图 8：A 组正常结膜基质中胶原蛋白表 达很少。图 11：D 组胶原蛋白表达较正常组明显 增高，阳性面积率大。图 9：B 组胶原蛋白异常增高表达，胶 原纤维致密。图 12：E组胶原蛋白表达较 MMC 组稍高， 密度也大一些。图 10：C 组胶原蛋白表达比正常组增多， 但胶原纤维稀疏，面积少。图 13：F 组胶原蛋白表达比 B 组少，基 本同D 组。图 14：G 组胶原蛋白表达明显增高，基本达到 B 组水平。2302352402452502556结论中医对青光眼的认识有着悠久的历史，根据其症状及临床表现，开角型青光眼可归属于 中医“青风内障”，而闭角型青光眼归属于“绿风内障”的范畴。祖国医学对青光眼的治疗， 最开始没有手术治疗这一方法，但中医眼科传统外治法及手术治疗眼病的方法早在南北朝以 前的医学史料中就有提及，在审视瑶涵·点服之药各有不同问答论一篇中更明确写道： “若内病既成，外症又见，必须内外并治，故宜点服俱行。”中医对眼病术后气血经络 功能的调理等有丰富的经验。现代眼科工作者在中医理论的指导下，根据青光眼的发病机理、 手术特点及术后临床表现，认识到青光眼术后都存在气阴两虚，脉络瘀滞，神水淤积的病理 特点，治疗上宜虚实兼顾，标本兼治。国内外对防治青光眼术后滤过道瘢痕化的研究，取得 了一定的进展，但临床应用效果都不十分明显，存在着疗效差、并发症多等问题。本实验成功建立滤过手术动物模后，将 4 种青光安组份应用于术后动物模型上，并通过 与空白组、手术模型组、MMC 药物组比较，观察发现：HE 染色光镜下观察可见滤过泡区域及 巩膜板层间滤过道中，成纤维细胞增殖较正常手术组明显减少，胶原纤维排列整齐稀疏，瘢 痕组织间有明显间隙，滤过通畅；免疫组化方法检测滤过泡区域型胶原蛋白的表达，该两 组胶原蛋白光密度值与正常手术组比较差异也有显著统计学意义，该两组中型胶原蛋白的 合成明显减少。根据本动物实验研究中型胶原蛋白检测的结果，滤过泡形态、炎症反应 等常规指标的观察，以及结合前期实验中成纤维细胞和术后眼压变化的结果，分析得出青 光安有效组份 2 抗青光眼术后滤过术后道瘢痕化的作用机制可能为：由于药物益气滋阴等 作用，增强了机体的抵抗力，缓解了术后炎症反应，使房水来源及血浆来源的细胞因子产生 减少，趋化周边成纤维细胞向创伤部位移动的力量减弱，使得滤过道处成纤维细胞迁徙减少；通过调节成纤维细胞中 TGF-1 等细胞因子的合成，使得 TGF-/Smad3 细胞信号转导途 径的信号传导减弱，成纤维细胞合成分泌型胶原的功能得不到发挥，从而降低滤过道内胶 原纤维的密度；由于型胶原等细胞外基质的密度降低，其交联粘附力度不够，反过来又 抑制了成纤维细胞的增殖。以上几个原因循环交互，最终使得滤过道瘢痕组织增生较少，保 持了滤过道的通畅。新药的开发除了疗效这一方面的研究外，还有一个必不可少的决定因素就是药物的毒性 作用。青光安 4 种有效组份（尤其是组份 2）应用于滤过术后动物模型，取得了显著的抑制 滤过到瘢痕化的效果，我们可以从这 1 个月的动物实验观察，初步评价青光眼有效组份口服 用药的安全性。MMC 组的 6 个标本就有一个出现了用药区域内结膜上皮及巩膜溶解，角膜损 害及脉络膜脱离病变。本实验中 MMC 的用法为 0.2 mgml 浓度的 MMC 棉片结膜瓣下放置 2 分钟后，彻底冲洗干净，这是 MMC 临床多次研究证实的最常规保守用法。不仅在本动物实验 中，在许多学者所做的 MMC 的研究中均多次发现过类似并发症。很多个实例说明 MMC 可导致260265270275如角膜上皮缺损、角膜浅层血管化，结膜巩膜损伤，术后持续低眼压浅前房、脉络膜脱离、黄斑病变、眼内炎等毒性反应8-10。本实验中有效组份 4 个组所有动物，在灌胃 28 天之后， 全身一般状况良好，眼部未见角膜上皮损伤，结膜上皮层及巩膜结构正常，无虹膜睫状体萎 缩样变或视网膜脉络膜病变等其他眼部损害情况，说明青光安有效组份短期服用一个月不具 有明显的毒副作用。参考文献 (References)1 Azuara Blanco A,Katz LJ.Dysfunctional filtering blebsJ.SurvOphthalmol,1998,43(2):93-1262 Vote B,Fuller JR,Bevin TH,et al.System icant in inflammatory fibrosis suppression in threatenedtrabeculectomy failureJ.Clin ExpOphthalmo,2004,32(1):81-863 Herstorits B Modified trab yields high successJ.Ocul Surg News,2004,15(4):8-104 姚新生.中药天然药物活性成分的研究方法J.药学服务于研究,2003,3(4):205-2095 王瑞琳,李贵刚,陈志祺,等.He-Ne 激光对兔眼小梁切除后滤过道瘢痕化的影响极其机制J.国际眼科杂 志,2010,10(9):1650-16536 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