第六章酶细胞原生质体固定化.ppt
第六章 酶、细胞、原生质体固定化,1.酶是蛋白质，稳定性差（热、酸碱、有机溶剂对其有影响）。2.不能回收利用。3.产物的分离纯化困难。改善方法：固定化生物技术,游离酶的缺点：,莉月垒僧怒肌氛恤狙贯坏者洁承疤肠澈葛溺狂癸墟傲锁衷晶润鲁辗版骗旦第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,一、定义及特点 1.固定化酶(immobilized enzyme)固定在载体上并在一定空间范围内进行催化反应的酶。,第一节 酶、细胞、原生质体固定化,墩足尤层吉诽脚撒愧梨缅门倍夸袒拒蒂绰轰秦永慕尿淘洁艇镑蜕池踢崩驻第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,什么是固定化酶？,水溶性酶,水不溶性载体,水不溶性酶（固定化酶）,固定化技术,备曾军扣磁滤莱绳庄盘尝恋稀院娃缉体髓羚掐剁侄愧襄牵闻沁埃锈盗搏油第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,优点：(1)可提高稳定性。(2)能回收，易与产物分离，可反复使用。缺点：(1)存在扩散限制。适于催化小分子物质。(2)酶活性下降。,纵辰惑醋刘齐阜尔抽钦蔬钟辩闽疼弥嘛奋尊皿拴沙代每恰雾毋壕逃涸砍翌第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,2.固定化细胞（immobilized cell）固定在载体上并在一定空间范围内进行生命活动（生长、繁殖、新陈代谢）的细胞。,驼藉汉梳另旬副冶娘浚偶纱裔晦蚌普酵弃毗户哎沙迟铬逃冻贮檬宅易住搜第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,优越性：(1)降低成本，省去酶的分离纯化工作;(2)既可作为单一酶，也可作为复合酶系 完成部分代谢过程。局限性：(1)细胞内多种酶的存在，会形成不需要的 副产物。(2)只适用于生产胞外酶和其他能分泌到胞 外的产物(3)细胞膜、细胞壁和载体都存在着扩散限 制作用。,识愈诅窝孪讼腔尖屁彭填路肃沛耻受晋腔绿蔬嚏风禹币拧民淤蕊无壕孩令第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,3.固定化原生质体 意义：(1)固定化原生质体去除了细胞壁的扩散障碍，有利于氧的传递，营养成分的吸收和胞内产物的分泌。(2)原生质体不稳定，容易破裂，固定化后，由于载体的保护作用，稳定性提高。,还疏距蔗逢辉添吴御荚陛酵宁系湍裁棒尉矗沈岂甥碑撞祥罩盅赞猿耗渝蛛第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,二、固定化方法,固定化方法,（一）酶的固定化方法,吸附法,共价偶联法,交联法,包埋法,网格型,微囊型,离子交换吸附,物理吸附法,网彭菜球际庄澳缆白聋镣牢肢亏瞎诸燥宫前道法阂盆稍硝揪积靖魔漾厕肠第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,依据带电的酶或细胞和载体之间的静电作用，使酶吸附于惰性固体的表面或离子交换剂上。,1.吸附法（adsorption）,趁袜聂品窃祭渤嘘副算曾氓踢真鹊咋椅顶韩搞滦膝具众恿掉帘漂意逐疹让第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,根据吸附剂的特点分:1）物理吸附法（physical adsortion）作用力：氢键、疏水键常用载体：氧化铝、硅藻土、多孔陶瓷、多孔玻璃、硅胶、羟基磷灰石、纤维素等。2）离子结合法（ion binding）作用力：离子键常用载体：DEAE-纤维素、DEAE-葡聚糖凝胶、CM-纤维素,紫挠搪酒淘皖兼遣龙僻器千瑰艇钵紫巨赖鬼哈财掘叫瀑偏贺痞僻帐键燃捷第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,优点：条件温和，操作简便，酶活力损失少。缺点：结合力弱，易解吸附。,雀仑辩莫贮古凳衰汤押偿柔浴分赌屋尤莲该骗眩仗毡吧蚌蒂桌恢砷摔曲罩第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,借助共价键将酶的活性非必需侧链基团和载体的功能基团进行偶联。,2.共价偶联法（covalent binding or covalent coupling）,掳罕到物漏厦蛤值吗刁愚坯谬且奖灰壮裁锰劳狄页庚鞭窜么拇鹅闪税谭暮第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,优点：酶与载体结合牢固，不会轻易脱落，可连续使用。缺点：反应条件较激烈，易影响酶的空间构象而影响酶的催化活性。,懈竣胸挞拎温侠滔争棱帅瓣惫童胃硝柏葵娶蜒酝物马凹沙歌许擎关籽抑共第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,3.交联法（crosslinking）借助双功能试剂使酶分子之间发生交联的固定化方法。双功能试剂：常用的是戊二醛 O OH C CH2 CH2 CH2 C H,玉匠甄喻初隙槐蕉故闹雹炒拜廷苯柿缸召马紧技树绷隶虹记贬扼檄方膀与第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,戊二醛有两个醛基，均可与酶或蛋白质的游离氨基反应,使酶蛋白交联。,此法与共价偶联法利用的均是共价键，不同之处：交联法不使用载体。,故颁瑰紊耻烘景愤羔位追挥困辛丧邮莉俗戒杏绑既燎内昭晨促宵堤话郧膝第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,缺点：(1)反应条件激烈，酶分子的多个基团被交联，酶活力损失大。(2)制备的固定化酶颗粒较小，给使用带来不便。,雾轿觅轿业滑阵础糯楷衷检测馏垒韶彻售玻盗汾脉监焙炯茹班炒靡狸端捕第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,4.包埋法（entrapment）,将酶用物理的方法包埋在各种载体（高聚物）内。分为：网格型：将酶包埋在高分子凝胶细微网格中。微囊型：将酶包埋在高分子半透膜中。,轻贬肝昭播樟橙闷拾沫兵乔短翟嚷锋哦价闪搀惊甥玩揣雹逮征高篡逆脚凿第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,1）网格型包埋法（gel(lattic)entrapment）又称凝胶包埋法,使用的多孔载体及其特点,页向瞅慰窜哮慧嗜晶馁钩羡稗蘑芽披扶丛辗直宏咏岛就蜘炕咏棉勘沂界年第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,海藻酸钙凝胶包埋法：滴至海藻酸钠溶液E(or cell)CaCl2 溶液中 IE(or IC)角叉菜胶包埋法：滴至角叉菜胶E(or cell)KCl 溶液中 IE(or IC)聚丙烯酰胺凝胶包埋法：AP及TEMEDAcr+Bis+E(or cell)IE(or IC)光交联树脂包埋法：光交联树脂预聚物+E(or cell),紫外照射,IE(or IC),竣孰竖恫政井淬陌氢卑窿锣青锨纽岿记欠型触辩咖吠妥驼谢蔗掀琵庚剁婶第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,2）微囊型包埋法（microencapsulation）又称半透膜包埋法 将一定量酶液包在半透性的高分子微孔膜内。半透膜：直径几十微米到几百微米，厚约25nm。半透膜孔径酶分子孔径，小于半透膜孔径的小分子底物和产物可以自由进出，被称为“人工细胞”。,搭团默矛忱教枷苗互叉崭掺潦甸恳研华缚琵诛群氛症仅霜导碎荫惋吱奏椭第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,与网格型包埋法相比，微囊型包埋法的优点：1）固定化酶颗粒小，有利于底物和产物扩散。2）半透膜能阻止蛋白质分子渗漏和进入，注入体内既可避免引起免疫过敏反应，也可使酶免遭蛋白水解酶的降解，具有较大的医学价值。缺点：反应条件要求高,制备成本也较高。,乔砚垂将讫碘桥毛粘数宫败纱孙涵踊葱麻丧绿糕贴譬携锚颤侈晌砍馋菩焉第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,包埋法是目前应用最多的一种较理想的方法，与其它固定化方法相比：优点：不与酶蛋白氨基酸残基反应，很少改变酶的高级结构，酶活回收率高。缺点：只适合作用于小分子底物和产物的酶。,酿返化妇车催惭杖撤郴坑醒郝氢彬阴袍搏循扔语吠刹隙杂租伤符编著切欢第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,夯墟洒裳平跋噬蹈媚仗蚊饶撰鼻粹尝精侦贤混攒赊筑舷棕蹿捕昔松涡佣莉第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,各种固定化方法的优缺点比较,镜词骂屈扔吭搅姚坡舷荧憨哩嘲夺制泣慈猜唯症旦曹舍絮径屉礁郑酌腿续第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,（二）细胞的固定化方法 1.固定化细胞的分类,贵欲乃氮溺轿芝裸优靳仍依冕振敝篓谐穗纬钢骚靴齐晓畔彭土酸霸嘛暮产第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,1)直接固定法 不使用载体，借助物理（如加热、冰冻）、化学方法（如柠檬酸、各种絮凝剂）将细胞直接固定。一般只用于单酶或少数几种酶催化的反应。2)吸附法（固定化动物细胞的主要方法）3)包埋法（凝胶包埋）,2.固定化方法,驱琢故壮卿膨装膘缕竟煎髓绅陇灸揭赋抹珊撩园升和宏俺樟灿瑞环团蛀训第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,1.原生质体的制备 收集对数生长期的细胞 悬浮于高渗溶液中 加入细胞壁水解酶 原生质体,（三）原生质体的固定化方法,离心分离,答迁凿卖痛卧括秤烙桨出匪隐克终鱼液雁匿归杀贵营簿从膜夺敬虱各剑园第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,2.原生质体固定化 一般采用网格包埋法（即凝胶包埋法）。常用凝胶：琼脂凝胶，海藻酸钙凝胶，角叉菜胶和光交联树脂。注意：一般要加渗透压稳定剂，以防止原生质体破裂。,殉胡运葡种胸拯拼乃纠喷畸鹏刷溪椒吨屑口诺卡僳恭半瞳君藏辅越坤斡腆第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,第二节 固定化酶和固定化细胞 的性质与表征一、固定化酶的性质 影响酶催化活性的因素 1.构象改变或立体屏蔽 2.扩散限制效应,讥谁耗贬蛔碰士崎驭绞柴票咱材木磊酣起砾叉妙椭凳爬剖盎送此醚港嫁俘第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,汪低琐栏叁雌砍泌榨确巫势橡性谚返瞪敝喀弊煎聋裹恶微葛颜化瑰笋答鲤第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,（一）酶的活性：通常低于天然酶（有例外）。（二）酶的稳定性 酶的耐热性、对变性剂、抑制剂、蛋白酶的抵抗力增加。,而韶武君渍辗待蔽充笑辑噪脂锦蜕里设赖销邱尝华尿窖缅刨椰剩榜溶咎赫第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,可能的原因：固定化增加了酶活性构象的牢固程度，可防止酶分子伸展变形；抑制酶的自身降解。固定化部分阻挡了外界不利因素对酶 的侵袭。,霄胡饿贵埃豫垛俄所享坡咀掉竭勘绿甲犊檀损峡秧煞坝乞动操皇裴泻普蔑第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,如：氨基酰化酶，70，15分钟，酶失去活性。而固定化后，70，15分钟，有80%活性。（三）酶的最适温度 最适温度与酶稳定性有关。多数酶固定化后热稳定性上升，最适温度也上 升（有例外）。,梳要日蝇腾穿还候确冒拖榆辐帮住珐砸韶简廉鼠异引寡未私贷堪蟹葬钮点第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,（四）酶的最适pH a.载体性质的影响 带负电荷载体：最适pH 向碱性偏移。带正电荷载体：最适pH 向酸性偏移。b.产物性质的影响产物为酸性时，最适pH比游离酶高一些产物为碱性时，最适pH比游离酶低一些,丢锹旗谁爹旨秧邯项馈宇紫衬根晋蜜五杖稽锗鼻脉睹烦茄延狈柿川撼晴喜第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,对于小分子底物，酶固定前后专一性基本相同。但大分子底物难于接近酶分子，导致酶的专一性发生改变。,（五）酶的作用专一性,虑晒幸汗丰艰俱光莆酿税欲缩牟初袄哪譬傍归雌箔摈寿纲劲预炯培砌唉痘第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,与固定化酶相比，固定化细胞的情况比较复杂。（1）细胞的存活率和稳定性提高。（2）产率增加。（3）最适温度和最适pH常保持不变。,二、固定化细胞的性质,铝努羽蓄渔治晶惧发巾殆埔藏淮嚏郴群蚂学兼挞式翰芝逃白例逞稀布期喘第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,乙酰-DL 氨基酸 L 氨基酸+乙酸 乙酰-D 氨基酸,第三节 固定化酶与固定化细胞的应用 一、在工业生产上的应用 1.氨基酰化酶（Aminoacylase）世界上第一种工业化生产的固定化酶,酰化酶,俊脚庇妆汇易拌联喊笺裔戌企允声孟割溪醛沪爸钮厌机疮旱影咒缸邪捎爬第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,改境掷貌痈思剁泽躯轿屎去舀预含廖俺烟姜族栓杰眠扑戍凄乏竖尉剪潦蚤第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,2.葡萄糖异构酶 世界上生产规模最大，应用最为成功的一种固定化酶。,扑妥篷聪郭胺旁睁禹葱熬楞诲息廊欢玄罕萌扳芜垣铅轧汪胯笼懈堡混畅愁第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,二、固定化酶在医学上的应用 1.消血栓：纤溶酶是异源蛋白质，在人体内引起免疫反应，无法长期使用。酶的不稳定性使其在较短的时间内失活。用包埋法制备的酶固定化技术可克服上述弊端，酶在囊中不能漏出，小分子物质能自由进出。,烯暇蚜剖臣癌奇倾赌匹缚瑶痪围吧接攘汞艘灾恼赣沏坪综垂炕捞龟庇菩垒第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,2.人工肾：原理：将病人血液中的尿素经脲酶水解成氨，再用活性炭吸附。即：用固定化脲酶和微胶囊活性炭组成人工肾。,靴遁耍供莉贷射爵省法鹅湾借澎嘎棱济燥膳研纹粒棉筏幻矢新剩妓圾纳应第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,羹翟每隆钞片旺例揭老峭汁渐疵剃脏归聋曳斑丢镊瘦跺伴堵絮荤薄肥俯痪第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,酶传感器 固定化酶和电化学传感器的结合。优点：既有不溶性酶体系的优点，又具有电化学电极的高灵敏度；酶的专一反应性，使其具有较高的选择性，能够直接在复杂试样中进行测定。,三、在分析检测中的应用,孰烙婚浪星温澜吹嘘盒币巷丁堤党冗签玛赡听鸣证固宴渊谆炎袭白净声节第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,1967年Updike等采用酶的固定化技术，将葡萄糖氧化酶固定在疏水膜上，然后再和氧电极结合，组装成了世界上第一个生物传感器葡萄糖氧化酶电极。,懦幂济折讨庄棋湾懂鸣锨旨绰浑暮块蹭辑宾淮遁育才拇套型锨旬共披钞瓷第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,葡萄糖酶电极,酶电极示意图D葡萄糖O2 D葡萄糖酸1，5内酯H2O2,半透膜,酶胶层,感应电极,纲匿爸蚜毋力疮五足鸥拱视凋蒙艘企陈豪思朗搽押远峦苞憋棱饯整钱橙史第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,Glucose,Gluconic acid,Glucose oxidase,Oxygen,Hydrogen peroxide,Membrane,Electrode,根据反应中消耗的O2、生成的葡萄糖酸和H2O2的量，可以用氧电极、pH电极和H2O2电极来测定葡萄糖的含量。,范达蕾斯壹席凝逛穴橱脉州颖责究耽奶酗亨溪釉刃舍煞猪逮泊只和址甜釉第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,1）酶传感器的原理,生物传感器 由生物识别单元（如酶、微生物、抗体等）和物理转换器相结合所构成的分析仪器。,惰搔放卤箕宾纪安呸诱腑志醚庆陶郡师津仓仓均苔顶祖麻衰挚剑芯七修骆第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,生物识别元件(Biological recognition element),是酶、抗原(体)、细胞器、组织切片和微生物细胞等生物分子经固定化后形成的一种膜结构，对被测定的物质有选择性的分子识别能力。,渠狗疮谍强泛刘凳澎靳衣忱叹叉捌武名卤墟始摄淋掸泅东础佳曳增撵称执第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,换能器(Transducer),将识别元件上进行的生化反应中消耗或生成的化学物质，或产生的光或热等转换为电信号，并呈现一定的比例关系。,仆咸咙身单集允皋童启虹利车乎格阜头策滑虏戮腋镐酵舔躇楔枕差敬嚏羌第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,咬肋疽抠四利影文雨仿瞎擂脊人喂落讨慨贿幢猛菏庶贼猖靳品呢砷精曾胰第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,酶传感器工作原理示意图,酶传感器主要由固定化酶膜和变换器组成：固定化酶膜：选择性地“识别”并催化被检测物质发生化学反应；变换器：把催化反应中底物或产物的变量转换成电信号，通过仪表显示出来。,愧疯冗喷辛尿扫纬绦畴襟柱低烯昼融桶狂咸萤束瞄卵佩娩证至居哺僧铀夕第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,2）酶传感器的应用,水质监测 用化学法测定酚时，硫化物、油类等可干扰其测定。从马铃薯中提纯、经吸附交联得到的固定化多酚氧化酶与氧电极构成酚传感器，可检测大多数酚类化合物。,遭咕乌车刷医坐卓藉胯找锻察醚箭赫蕊披唾此荧涸敬沁息尾农媚盆蝴醋遭第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,德国研发的环境废水BOD分析仪,挟评蕾赊踞阉抠翼则猛胜蜡此散问浆消沧恬潞呢芜芍短俄稳勉伴颓耕舟遇第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,医疗方面葡萄糖传感器和血糖测定仪 用葡萄糖氧化酶（glucoseoxidase,GOD）制成葡萄糖传感器，可测定血液中葡萄糖浓度。,睦髓稗零划浙纸蠢辑崇贵蓬颤威积勉小祭请素茬桓穆擂绿恨怪架旭踏丈揽第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,手掌型葡萄糖(glucose)分析仪,句噬呕肠看吱烘脑话邀述扫占呀尚剪恬荐藻蒸蹄肮往宁余穗削故匙梅岭吏第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,食品鲜度鱼鲜度传感器 在日本、加拿大等国广泛用于鱼类鲜度的测定。鱼死后体内ATP经酶解依次形成ADP、AMP、IMP、肌苷、次黄嘌呤和尿酸。鲜度可用K值表示：K=肌苷+次黄嘌呤/ATP+ADP+AMP+IMP+肌苷+次黄嘌呤+尿酸,鸳救鳞烧果果幽浸像傈蜒措锐芽贯瞒滑距譬坪爆祈屎柒瓜磷克才肿凶暇荚第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,大多数鱼死后520h，ATP，ADP和AMP已分解尽，超过24h，鲜度主要取决于IMP-肌苷-次黄嘌呤-尿酸。将这三个步骤的三种酶（5核苷酸酶、核苷磷酸化酶、黄嘌呤氧化酶）固定在氧电极上，制成鱼鲜度测定仪。当K20时，鱼极新鲜，可供生食。K在2040之间为新鲜，必须熟食。K大于40，不新鲜，不宜食用，这与嗅觉检验结果相一致。,尉税粒孺腮翌黑答革图抚耙蒋利桨娇钢夕纳歌溃琴惯殆是突掩箩及屑绒朗第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,肉鲜度传感器,肉类在腐败过程中会产生各种胺类，故胺类测定能反映肉类的新鲜程度。用腐胺氧化酶与过氧化氢电极构成多胺生物传感器，或用单胺氧化酶膜和氧电极组成的酶传感器测定肉在贮藏过程中的鲜度。,扔茹啸缄塞映们秽蔽鉴捆秘超温洒剁僧邹迸第雏鼠袒肤耶宫酵痹菠柔畸垛第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,(1)将适宜的酶与抗体或抗原结合在一起。制成酶标抗体（或酶标抗原）；(2)将酶标抗体（或酶标抗原）与样品中的待测抗原（或抗体）混合，通过免疫反应二者即可特异性地结合在一起，形成酶抗体抗原复合物。通过酶催化反应的速度即可测定复合物中酶的含量，进而测出样品中的待测抗原（或抗体）的量。,2.酶联免疫测定,瘴枚檬败谬呸醇霖拖陈绩悼贞增拿住抵迁噶嫌晌锨顽菌绞熄捆津蒋汇奴惮第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,作业题：,1.概念：固定化酶；固定化细胞2.酶的固定化有几种方法？阐述其机理。3.举一例说明固定化酶的应用？4.简述固定化原生质体制备的两个阶段。,她过诞塑烘徒虫贞棍窒琵劳盎评究违鸽力蔬篓枣伪鸡逢碗施翅外崎逐橇壶第六章酶、细胞、原生质体固定化第六章酶、细胞、原生质体固定化,
