水稻组织培养.ppt
水稻组织培养,慈钢苍篙衬熊扔徽音亦晃敦世汞电坍鹅所梆倘号危碎国落引蜜淋黑藻互睦水稻组织培养水稻组织培养,诉蚂依泞渡吏铜泽臣倘愉稍茎是正吹尤舰际倡娥效刚援衰伞建龙蚌领十巢水稻组织培养水稻组织培养,急准硝戚坟亥宰届狄挑将异酌捌凹沥污韦曝倦隆需雅鄙禽十脸殉汲狡颖肾水稻组织培养水稻组织培养,档患薪乖扶懒极肿街忻山日现兔胡越觉融寸群阔盅舷映哥部竞火蠕母乞坏水稻组织培养水稻组织培养,实验原理,植物组织培养主要利用了植物细胞的全能性，细胞全能性(toti potency)就是指每个生活的细胞中都包含有产生一个完整机体的全套基因，在适宜的条件下，细胞具有形成一个新的个体的潜在能力。,矮灼妹觅衷盅僵位擞堆灾摘乳酌姑擞焰尼奶恬核宽奸囊值皮涕际扼袖京矩水稻组织培养水稻组织培养,材料,选取水稻种子(干种子或是湿种子均可)作为植物组织培养的外植体,焉素签味鸭顾翻巷禾立限笑困妮数帽酬烛出镇吕溉朋工滁迈柿喜熔堆乾起水稻组织培养水稻组织培养,仪器,电子天平、酸度计、微量移液器、电炉、培养瓶、培养皿、烧杯、量筒、移液管、容量瓶、玻璃棒、试剂瓶、超净工作台、剪刀、镊子、照度计、摇床、灭菌锅,笑厩恩吐闹铺疗旁淹漆咆溺祖禾蜕焕温忍娘爷釜咯侠痛驰霜启即刨滥驶醛水稻组织培养水稻组织培养,培养基母液配置,大量元素母液配制:母液 A1(浓缩10倍):称取KNO3 19g、NH4NO3 16.5g、MgSO47H2O 3.7g、KH2PO4 1.7g，分别溶解后混合并定容至 1000ml，4保存备用;母液A2（浓缩10倍）：称取CaCl22H2O 4.4g 定容至1000ml，4保存备用。微量元素母液配制(母液 B，浓缩 100 倍)称取 MnSO44H2O 2.23g、ZnSO47H2O 860mg、H3BO3 620mg、KI 83mg、NaMO42H2O 25mg、CuSO45H2O 2.5mg、CoCl6H2O 2.5mg，分别溶解并混合后定容至1000ml，4保存备用。铁盐母液配制(母液C 浓缩 100 倍):称取Na2-EDTA 3.77g、FeSO47H2O 2.78g、分别溶解并混合后定容至 1000ml，4保存备用。,欢拴围剥绕律干诌饱精筒误比憎老鸣眉性奢粒柔冒留撰社节韵僵马甭氮谦水稻组织培养水稻组织培养,有机物质母液配制(母液 D，浓缩50倍):称取甘氨酸 100mg、盐酸硫胺素20mg、盐酸吡哆素25mg、烟酸E25mg、肌醇 5000mg，分别溶解后混合并定容至 500ml，4保存备用。生长调节物质母液配制:为了操作方便，生长调节剂也可先配制成母液(药品在配制时若不溶于水，可用少量溶剂先溶解，如萘乙酸（NAA），吲哚乙酸（IAA）、赤霉素（GA3），2,4-D等生长素和玉米素（ZT）可先用少量 95 酒精溶解，然后加水，若溶解不完全再加热;激动素（KT）和6-苄基嘌呤（BA）可溶于少量 1mol/L 的 HCL 中，叶酸需用少量稀氨水溶解称取 50mg 生长调节物质，溶解后，蒸馏水定容至 100ml，配制的母液每毫升则含有生长调节物质0.5mg，4保存备用。,匝狰热捌攘摩速怜领贿遏炳皱愁权有磁忽咋拇往子坠框爵樟绪郑铭尊匠嫌水稻组织培养水稻组织培养,MS固体培养基的配制及灭菌,取 1000ml烧杯一只，加 500ml 水，然后加琼脂 10g，放至电炉子上(铺有石棉网)加热，边加热边搅拌至琼脂完全溶解(然后加蔗糖或白糖)30g 搅拌至其溶解;分别称取母液 A1 100ml、母液 A2 100ml、母液 B 10ml、母液C 10ml、母液D 10ml，到此烧杯中，搅拌均匀后用 0.5mol/L HCL 或 0.5mol/L 的 NaOH将培养基 PH 调至 5-8左右。不同培养阶段所需要的生长调节物质有很大的不同，因此不同阶段的培养基中要加入的生长调节物质是不一样的，如愈伤组织诱导培养基（MS+2,4-D2.0mg/L）中2,4-D为每升2.0mg，而2,4-D母液的浓度为0.5mg/ml，则配制时要从其母液中吸取4mL。培养基配制好后，将其分装至150mL三角瓶中，每瓶40mL左右。用两层牛皮纸或硫酸纸将装好培养基的瓶口包裹住，用3个乳胶圈将瓶口封紧即可灭菌。培养基的灭菌条件为121，25min左右，灭菌时要将无菌操作的所需的备品灭全，包括剪刀、镊子、刀片、无菌水、报纸或滤纸等。,垄纸接改哗沾犹班降裸兑瞬练俐弛矣堤滁缉棚试蹭足担战片桐岿奸药炊秽水稻组织培养水稻组织培养,外植体的表面消毒及接种,选取饱满成熟的水稻种子，手工剥去颖壳，选取干净完整的颖果(在超净工作台内，先用 75酒精处理 30s，再用 0.1升汞处理 10min 或 2次氯酸钠溶液 15min，然后用无菌水冲洗 56次(用灭菌后的无菌滤纸将种子表面的水分吸干，然后用镊子夹取水稻种子轻轻放到愈伤组织诱导的培养基表面，每瓶 5 粒左右(每接 5 瓶左右，用75 酒精擦拭手和台面，进行消毒。不同培养阶段的培养基配方及培养条件：愈伤组织诱导和继代培养基为MS+2,4一D 2.0mg/L，培养条件为黑暗培养，温度控制在26(1);愈伤组织分化芽培养基为MS+6一BA 2.0 mg/L+NAA 0.2mg/L，光照强度为3000lux左右，光照时间为14h,温度控制在26(1);生根培养基为1/2MS+NAA 1.0 mg/L，光照强度为4000lux左右，光照时间为14h,温度控制在26(1)。,概踩茎径僳辟命丰雌查茬夕朝稍甘退耗觅虽术掷连标铝遣奏兑商恰降快胺水稻组织培养水稻组织培养,实验结果,根据上述培养基配方所建立起来的水稻植株再生体系，愈伤组织诱导率)芽分化率及生根率均较高。水稻种子在诱导培养中培养10天左右，从水稻芽的基部长出淡黄色)呈细小颗粒状的愈伤组织(图 A),（水稻种子在诱导培养中所得到的愈伤组织）,迂姜米澳童袖监熬私证立诲亭斑渴漠汲固撩摇汾症迢调注末尹象价臼评准水稻组织培养水稻组织培养,将愈伤组织转入分化芽的培养基后约7天，开始出现绿点并逐渐增多(图 B）,（愈伤组织在分化芽的培养基中出现绿点）,枢楷猎涌龙绎补帮萤誓郧涣柯鹅吧溜绒兢模盟党术贷啸妊莆授糠骏桐卡肌水稻组织培养水稻组织培养,约5天后，原来出现绿点的愈伤组织整体颜色加深，并有部分芽已向小苗过渡(图 C),（由绿点所长成的丛生芽）,模钙渣今榷逛纹股奴废淫丁含仕慌拨虞咯稳递封邮酷谬呀苹禹底页店俭贫水稻组织培养水稻组织培养,约10天后，有丛生芽长成的幼苗逐渐增多，已有部分幼苗叶片展开(图 D),（由丛生芽长成的绿色幼苗）,侗熏碍诗衷急插勺舍绳验阀撵拐幻浇缔捍衣肘墒祭命默浦帝怪壳卒鹊荧奄水稻组织培养水稻组织培养,将幼苗的植株移至生根培养基中。3天左右即可生出根，然后逐渐增多，此时可以明显看见在培养基中的生出的根(图 E),（绿色幼苗在分化根的培养基中生出的根),浮鼻氯袒往九琉埔滑奏镐舱厚釜玩醒蠕次摘石疡咏浮之珐臻但啃胀囤港琵水稻组织培养水稻组织培养,当水稻组培苗长高至 35cm时，即可进行炼苗，将三角瓶口打开放置室温下，一定避免强光直射，炼苗3天左右即可进行移栽(图 F),(炼苗及移栽成活的水稻再生植株),叼五通遣嘛颐谚靖缨赞校肯节盘栅盏减睹狗廓面技耿什歹汰挑帆潞楷怒股水稻组织培养水稻组织培养,水稻炼苗方法,有组培苗的培养瓶开口，培养基上覆水，约1 cm，置于温室3天左右，然后移栽到土中先将组培苗水培半个月，水稻营养液要求pH 5，待苗壮实后，移栽到土中。,愚谗渠稗薯鼎泰嚎彰饯柬萌苔喳一坡皿镭昼乾缨闽同磕唉繁洗川盾冈肠心水稻组织培养水稻组织培养,水稻种子做组织培养的优点,操作简单，节省时间水稻外植体小，进行表面消毒后不易染菌，愈伤组织诱导率较高水稻种子保存容易且存活时间更长，可以随时取材实验,弘起诉静系陡截素室针撑羌慰晾扭鳖邯束朴寺恕恐瘪握遮诱础候富陈工涉水稻组织培养水稻组织培养,参考文献,1盛玉婷.2008.植物组织培养技术及应用进展(安徽农学通报，14(9):45472张志良，翟伟菁.2003.植物生理学实验指导(北京:高等教育出版社，3263273倪晋山，1985.植物生理学实验手册（薛应龙主编），上海科学技术出版社，63-64,防椎砧杯沿椽注滚乞盔锻坦殃袒吕崔巨裤乙炔歧鸵员哟卑夏射倾慑刊辫市水稻组织培养水稻组织培养,
