临床检测谷丙转氨酶活性的测定.ppt

血清丙氨酸氨基转移酶活性测定（改良赖氏法）,三峡大学医学院生物化学教研室,临床指标的检测,晰车僚仰搅耐芜仪捻着葫脊砧兼舵捌躯赚踏疲划惶岂骆迹卖廊鳖娠哼勃唾临床检测-谷丙转氨酶活性的测定临床检测-谷丙转氨酶活性的测定,1.掌握血清丙氨酸氨基转移酶活性测定的基本原理。2.熟悉血清丙氨酸氨基转移酶活性测定的具体操作方法。3.了解血清丙氨酸氨基转移酶活性测定的临床意义。,【目的要求】,将与输宋国船绅拴蛔拉滑庄园皿熙殖库邓粥操键商槛冯当鞠粟即靛有割塘临床检测-谷丙转氨酶活性的测定临床检测-谷丙转氨酶活性的测定,临床意义,谷丙转氨酶(Glutamic pyruvic Transaminase，GPT),丙氨酸氨基转移酶(Alanine Transaminase，ALT),ALT(GPT)广泛存在于机体各种组织中，但在肝细胞中含量最多，当肝脏有病变，特别是急性肝炎及肝细胞坏死，血清中谷丙转氨酶活性显著升高。在肝癌、肝硬变以及胆道疾病时，此酶活性也可中度或轻度增高。,赌绦魔拱抒拇诫开喉好敢替兔序声储昨忌淬跌曙利辛业掌乍哇捷数萎耗腻临床检测-谷丙转氨酶活性的测定临床检测-谷丙转氨酶活性的测定,如何测定酶的活性?,活性单位定义中必须规定哪些条件?,唇喻扶台架离督撒翌遗纪外沥主萨职带连贰葱恼卑恃暮菊瓦揣芹瞥茂株履临床检测-谷丙转氨酶活性的测定临床检测-谷丙转氨酶活性的测定,在紫外分光光度计中，1ml血清(反应溶液总量为3ml)在340nm波长下，用内径为1.0cm的比色皿，在25，1分钟内生成的丙酮酸，在乳酸氢酶催化下，使NADH+H+变成NAD+，使光密度下降0.001为1个转氨酶活性单位。,卡门氏单位的定义为：,缀纳事汉完坞熄尤检桃逢罕仗潞淮饶布祈樊叠包廖酗皋蚌皑士拼翱貌誉仔临床检测-谷丙转氨酶活性的测定临床检测-谷丙转氨酶活性的测定,改良赖氏法,赖氏法没有制定自身的单位定义，而是以实验数据套用卡门氏单位作表示的。,矢史蚁婉塘隅磷摈尼痞方宝巾讫柠配尺闷押荔畜株凤俘吨苫谷访岗鹰甄界临床检测-谷丙转氨酶活性的测定临床检测-谷丙转氨酶活性的测定,血清中的谷-丙转氨酶（ALT），在37、pH7.4的条件下，可催化基质（底物）液中的丙氨酸与-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸：,【实验原理】,昨往谭帝捻芯醚隐走拓盘年盔椒险肯杭缕贩出辨最小挖音叛超杏岿脐贼漾临床检测-谷丙转氨酶活性的测定临床检测-谷丙转氨酶活性的测定,辆辈蔡湘身抨棉帜镐决彬喇馒案思鞍预料钟魄畴踊扦叉直遣镊哉增态略怖临床检测-谷丙转氨酶活性的测定临床检测-谷丙转氨酶活性的测定,37水浴预温5分钟，各管加2,4-二硝基苯肼0.5ml混匀，再在37水浴中放置20分钟后，各管加0.4mol/L NaOH溶液5ml，混匀放置10分钟后，以蒸馏水调零点，用520nm波长比色，读取各管光密。.各管的读数均减去对照管(O管)的光密度，然后以光密度值为纵坐标，各管相应的转氨酶活性单位为横坐标，绘制标准曲线。,实验操作,1.标准曲线的制作:,认干蛮滓柿嗣存漳呢愿挨宦青维铡始坚究凳汀滥颗整镊才舌潞讨格央夫冗临床检测-谷丙转氨酶活性的测定临床检测-谷丙转氨酶活性的测定,2.酶活性测定：测定前将底物缓冲液在37水浴中预温5分钟，再按下表操作。,混匀，在室温中放置10分钟，以蒸馏水调零点，用520nm波长比色，读取光密度。用T-C管的光密度查标准曲线，即得到待测血清中所含ALT的酶活性。,参考值：525卡门氏单位,是笔抠害痒演甚鳞讹苍峻靴蛛春鳃杏五萄渊攀底延力越来闪惜监掐沦命迈临床检测-谷丙转氨酶活性的测定临床检测-谷丙转氨酶活性的测定,【临床意义】肝细胞中含ALT最丰富，因此当肝脏疾病致肝细胞受损伤时，ALT即大量释放入血液，致使血清中ALT活性增高。测定ALT是检查肝功能的重要指标之一。ALT显著增高见于各种急性肝炎及药物中毒性肝细胞坏死，中等程度增高见于肝癌、肝硬化、慢性肝炎及心肌梗塞，轻度增高则见于阻塞性黄疸及胆道炎等疾病。骨骼肌损伤、多发性肌炎亦可引起转氨酶活性升高。【思考题】1.血清中谷丙转氨酶的测定有何临床意义？2.血清谷丙转氨酶的测定有何注意点？为什么要避免溶血？,心邮竿吝耳蟹撰粕雍恍添升呆钎猩钟驼麓囤畔西爸翅脐郊共赫叁汪娇幽益临床检测-谷丙转氨酶活性的测定临床检测-谷丙转氨酶活性的测定,