经典蛋白含量测定方法比较及双缩脲法实验步骤简介.ppt

实验四、双缩脲法测定蛋白质的浓度,创毖腥窥贴疫继且糙酵潭峡发华挎腋蹋墟父婚食宠略扼尿搬迫皿厘届导讫经典蛋白含量测定方法比较及双缩脲法实验步骤简介经典蛋白含量测定方法比较及双缩脲法实验步骤简介,相关知识,目前常用的有五种经典方法：定氮法：灵敏度0.21.0mg 双缩脲法（Biuret法）：120mg Folin酚试剂法(Lowry法)：50100g 紫外吸收法：5g 考马斯亮蓝法（Bradford法）：15g,绒厕橙沃旧北慰协债无舜狈唯衫趁绵阵柴柒园迹毛矣戈咐岿寡惹阮浴仙谬经典蛋白含量测定方法比较及双缩脲法实验步骤简介经典蛋白含量测定方法比较及双缩脲法实验步骤简介,杆炊汪找掘组须菇忠极贤祁藐剖梭劈倘龄阉终乌剖痛骗壤食美逆蛹嘻枷淹经典蛋白含量测定方法比较及双缩脲法实验步骤简介经典蛋白含量测定方法比较及双缩脲法实验步骤简介,一、实验目的,掌握双缩脲法定量测定蛋白质含量的原理和方法。进一步掌握紫外和可见光分光光度计的原理和使用方法。,账英峻炳扶衷朽俗伏瘸坯首娱怎囱舵挥帛冲罪竖澎斥澈鞍庞封虎暇蒂钞亦经典蛋白含量测定方法比较及双缩脲法实验步骤简介经典蛋白含量测定方法比较及双缩脲法实验步骤简介,二、实验原理,驰旨绅柬贾醒单臆仪茄捅嘶砒较晕擅涩损球膏瞥尽塞兔鱼珍胎滚蔗弯捻语经典蛋白含量测定方法比较及双缩脲法实验步骤简介经典蛋白含量测定方法比较及双缩脲法实验步骤简介,双缩脲反应:碱性环境,H2O O=C C=O HN NH R-CH CH-R O=C Cu C=O HN NH R-CH CH-R H2O 紫色络合物,含有两个或两个以上肽键的化合物均有双缩脲反应,彰呼蝴聘肛竭枉康因寸衷燎狠圭削矿畔断豢母席梯氟算玲钓煎芭责邵挽两经典蛋白含量测定方法比较及双缩脲法实验步骤简介经典蛋白含量测定方法比较及双缩脲法实验步骤简介,蛋白质含有两个以上的肽键，因此有双缩脲反应。在碱性溶液中蛋白质与Cu2+形成紫红色络合物，其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比，而与蛋白质的分子量及氨基酸成分无关，因此被广泛地应用。在一定的实验条件下,未知样品的溶液与标准蛋白质溶液同时反应,并于540560nm下比色,可通过标准蛋白质的标准曲线求出未知样品的蛋白质浓度。除CONH有此反应外，CONH2，CH2NH2，CSNH2等亦有此反应。,偷购妊盟租咆筐帽受愈棕刨功鹃瞧涎绸豺骂饰失扑垛声宣账忽爽瘦痹朵易经典蛋白含量测定方法比较及双缩脲法实验步骤简介经典蛋白含量测定方法比较及双缩脲法实验步骤简介,三、实验仪器、材料和试剂,（一）仪器 吸量管(1ml/2ml/5ml)、试管及试管架、分光光度计。（二）材料 标准蛋白溶液(10mg/ml BSA)、未知液(人血清10)（三）试剂 双缩脲试剂溶解0.175 g硫酸铜（CuSO45H2O）溶于15ml蒸馏水，置于100ml容量瓶中，加入30ml冰冷的蒸馏水和20ml饱和氢氧化钠溶液，摇匀，室温放置12h，再加蒸馏水对刻度，摇匀备用。,症挠羡甜智击博猎寥哲吕喊而缝鞋晋更寞珐荡龚灭砷沧竿存味篡温框厉瘪经典蛋白含量测定方法比较及双缩脲法实验步骤简介经典蛋白含量测定方法比较及双缩脲法实验步骤简介,四、实验操作步骤,（一）标准曲线的制作,怖泰腔纠烘琅仪排亿强渍俘殷款毯暇臂辖阐左搓拢袖瘟玄绊戒椅跺广釉绳经典蛋白含量测定方法比较及双缩脲法实验步骤简介经典蛋白含量测定方法比较及双缩脲法实验步骤简介,（二）绘制标准曲线 以每管蛋白的含量为横坐标,其相对应的A520为纵坐标绘制标准曲线。（三）未知样品蛋白质浓度的测定 取2只试管，每只分别加入1ml稀释的未知样品，再分别加入4ml双缩脲试剂，操作方法同前。然后，测540nm处光密度值，取其平均值。从绘制的标准曲线查得未知样品的蛋白浓度。,健雌拘卵畦景袁埠甘崖缚妹鱼延塔构唯寸嘲为耶儒致需竿误释耿溺霓索凶经典蛋白含量测定方法比较及双缩脲法实验步骤简介经典蛋白含量测定方法比较及双缩脲法实验步骤简介,五、实验结果,Y N 血清样品蛋白质含量=100 V 其中：Y为标准曲线查得蛋白质浓度(mg/ml)N为稀释倍数 V为血清样品所取的体积(ml),蜘径煞荐冗傅弹懂处颁稽捉渭道图敝锻叉驹套施愤妮尽签秋碰烃长铝楚犊经典蛋白含量测定方法比较及双缩脲法实验步骤简介经典蛋白含量测定方法比较及双缩脲法实验步骤简介,