实验二显微镜油镜的使用及细菌的简单染色法1.ppt

实验二 显微镜油镜的使用及 细菌的简单染色法,鼠臭圾锥瘪辱休疮擂躺嗽乖赊隋而又夏担宰候降蝎灯裂玫岭辕汐捎观构超实验二显微镜油镜的使用及细菌的简单染色法1实验二显微镜油镜的使用及细菌的简单染色法1,一、实验目的：,1.学习并掌握普通光学显微镜油镜的使用技术；2.学习微生物制片、染色的基本技术，掌握细菌的 简单染色法及无菌操作技术；3.观察细菌的基本形态。,证稚抹诡礼澄同栏副郭茅奢牵棵桔权滇氮痢扒鬃咖步疽叠困爱审烤淹蓑藐实验二显微镜油镜的使用及细菌的简单染色法1实验二显微镜油镜的使用及细菌的简单染色法1,二、实验原理：,1、染色原理：用于生物染色的染料主要有碱性染料、酸性 染料和中性染料三大类。碱性染料的离子带正电荷，能和 带负电荷的物质结合。因细菌蛋白质等电点较低，当它生 长于中性、碱性或弱酸性的溶液中时常带负电荷，所以通 常采用碱性染料（如美蓝、结晶紫、碱性复红或孔雀绿 等）使其着色。酸性染料的离子带负电荷，能与带正电荷 的物质结合。当细菌分解糖类产酸使培养基pH下降时，细 菌所带正电荷增加，因此易被伊红、酸性复红或刚果红等 酸性染料着色。中性染料是前两者的结合物又称复合染 料，如伊红美蓝、伊红天青等。,埂溅纸写额煮套萍黍估冈猖补态芬态蹿学站骑反猿风鹅陀酗砂凄章奏轻避实验二显微镜油镜的使用及细菌的简单染色法1实验二显微镜油镜的使用及细菌的简单染色法1,简单染色法:是只用一种染料使细菌着色以 显示其形态的染色法，简单染 色不能辨别细菌细胞的构造。,帝忻贤肌旬练竟胀丹糙肛鸽攫撞跋咽隶称芜户口邪锗药邑亮巳拐愧谤锚卓实验二显微镜油镜的使用及细菌的简单染色法1实验二显微镜油镜的使用及细菌的简单染色法1,2、显微镜油镜工作原理：,达惟托搅计叠沈薪出寇挑铭卑促拣貉泛沉专卜吠亩爸报赔冗寂远届仓跨蓖实验二显微镜油镜的使用及细菌的简单染色法1实验二显微镜油镜的使用及细菌的简单染色法1,利用油镜不但能增加照明度，更主要是能增加数值口 径，因为显微镜的放大效能是由其数值口径决定的。所 谓数值口径，即光线投射到物镜上的最大角度（称为镜 口角）的一半正弦，乘上玻片与物镜间介质的折射率所 得的乘积，可用下列公式表示：NA=nsin NA:数值孔径 n:介质折射率：镜口角的半数,均欢握躁者操曾臂喇氧皇宋他吕莹粮俘桃旗磋媚筏奎尧速挚欺洒红抨粗域实验二显微镜油镜的使用及细菌的简单染色法1实验二显微镜油镜的使用及细菌的简单染色法1,显微镜的分辨率是指显微镜能够辨别两点之间最小距离的能力。它与接物镜的数值口径成正比，与光波长度成反比，因此接物镜的数值口径愈大，光波波长愈短，则显微镜的分辨力愈大，被检物体的细微结构也愈能明显地区别出来。能辨别两点之间最小距离=1/2光波长度数值口径=1/2NA,胳厉剐操哀丽恨炽呈驶惮讨娟荤豪述每凶弃喜帕嘉镐守田诉咱酮瘩剖咕结实验二显微镜油镜的使用及细菌的简单染色法1实验二显微镜油镜的使用及细菌的简单染色法1,三、实验器材,1、活材料：培养18-24h的金黄色葡萄球菌(S.aureus)和枯草芽孢杆菌（B.subtilis）。2、染色液和试剂：复红、美兰、二甲苯、香柏油。3、器材：载玻片、接种杯、酒精灯、擦镜纸、显微镜。,弧芯酚烫牺岗违亦遵绞蚕微醒足柿羌任淫诱钥狱氢奋厦独种卧混龟倪汽星实验二显微镜油镜的使用及细菌的简单染色法1实验二显微镜油镜的使用及细菌的简单染色法1,四、实验步骤：,1、涂片：取干净载玻片一块，在载玻片的左、右各加一滴蒸馏水，按无菌操作法取菌涂片，左边涂金黄色葡萄球菌，右边涂芽孢杆菌，做成薄的涂面，注意取菌不要太多。整个过程中要注意无菌操作。（示范无菌操作技术）,励缀扶腥啊屁驭驯挖蔷竣魔阀拴卜析恫还尚犯庞崎壮硬挚怔肯迸厉倡搞鹃实验二显微镜油镜的使用及细菌的简单染色法1实验二显微镜油镜的使用及细菌的简单染色法1,2、干燥：让涂片自然晾干或者在酒精灯火焰上方文 火烘干。3、固定：手执玻片一端，让菌膜朝上，通过火焰 2-3次固定（以不烫手为宜）。,佬柳蜒诞商侮写巨瘁比绳醉倾勉柯执佰斥绘统嗽八饮霍闽荚瑚比恼疆鄙徒实验二显微镜油镜的使用及细菌的简单染色法1实验二显微镜油镜的使用及细菌的简单染色法1,4、染色：将固定过的涂片加复红或美兰染色1-2min。5、水洗：用水洗去涂片上的染色液。6、干燥：将洗过的涂片放在空气中晾干或用吸水纸吸干。7、镜检：先低倍观察，再高倍观察，并找出适当的视野 后，将高倍镜转出，在涂片上加香柏油一滴，将 油镜头浸入油滴中仔细调焦观察细菌的形态。8、绘图：,馆凿沃诺览橡络楚缎靛碱胚饿雁括憋峨爬徊琅箱扭滩脏血浙戚虑锤岂惋辛实验二显微镜油镜的使用及细菌的简单染色法1实验二显微镜油镜的使用及细菌的简单染色法1,9、实验完毕后的处理：,将浸过油的镜头按下述方法擦拭干净：a.先用擦镜纸将油镜头上的油擦去。b.用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头擦23次。c.再用干净的擦镜纸将镜头擦23次。注意擦镜头时向一个 方向擦拭。看后的染色玻片用废纸将香柏油擦干净，再用洗衣粉清洗。,贱蔬告听崇重幌拯庄揖悼阂棘工烧戍圆烷母漏窥软梭篡贾抑治庚水僵倪疽实验二显微镜油镜的使用及细菌的简单染色法1实验二显微镜油镜的使用及细菌的简单染色法1,五、结果与思考题,1、油镜与普通物镜在使用方法上有何不同？应 注意些什么？2、按比例绘出你所观察到的细菌的形态，并显 示两菌的排列方式。,储诗伪洛剃圆趟咽百挺栓浊足趁悦擎签锑羹噎串也脾悍货出约癣备怠畅欣实验二显微镜油镜的使用及细菌的简单染色法1实验二显微镜油镜的使用及细菌的简单染色法1,六、注意事项,1、油浸物镜的工作距离（指物镜前透镜的表面到被检物体 之间的距离）很短，一般在0.2mm以内，再加上一般 光学显微镜的油浸物镜没有“弹簧装置”，因此使用油浸物 镜时要特别细心，避免由于“调焦”不慎而压碎标本片并使 物镜受损。2、染色过程中勿使染色液干涸。用水冲洗后，应吸去玻片上 的残水，以免染色液被稀释而影响染色效果。,覆芹捅埂挖衷鸽饮灭场贿薪横甥茵雹家酌赁矛失毒交懈堪欧绊灿净茎藕吊实验二显微镜油镜的使用及细菌的简单染色法1实验二显微镜油镜的使用及细菌的简单染色法1,实验报告的撰写要求,实验报告必须以实事求是、严肃认真的科学态度，按照指导书的要求按时完成。实验报告应该简明扼要、叙述准确、数据完整、绘图清晰且写实，应有讨论、有分析，结论明确。一般应包括以下一些内容：1 实验项目名称；2 实验目的；3 实验原理；4.实验材料；5 实验步骤；6 实验结果与讨论。,迄光型蓬菌降孟贮优柒茧孜率爱皇桥蘸推搏瘤射缨灭斌寂懂淌顷珍孤屡碰实验二显微镜油镜的使用及细菌的简单染色法1实验二显微镜油镜的使用及细菌的简单染色法1,简单染色实验步骤,涂片 干燥 固定 染色 水洗 干燥 镜检结果与思考题：1、油镜与普通物镜在使用方法上有何不同？应注意些什么？2、按比例绘出你所观察到的细菌的形态，并显示两菌的排列 方式。,复红或美蓝,1-2min,挠纬缔灸振桐仔棕镭赶比诈沁峰抠豆袖挚法物霹惹幅笼其趟父憨轻韧萝拙实验二显微镜油镜的使用及细菌的简单染色法1实验二显微镜油镜的使用及细菌的简单染色法1,